一种检测脑卒中发病风险以及发病的生物标志物的检测方法及其应用
【专利摘要】本发明提供了一种基于体液中酪氨酸水平作为检测脑卒中发病风险以及脑卒中发病的生物标志物的检测方法及其应用，包括以下步骤：（1）检测样本中外泌体中酪氨酸浓度；（2）将步骤（1）的酪氨酸浓度与已知的脑卒中患者、脑卒中高危人群和健康人群的酪氨酸浓度结果进行对比；（3）根据上述对比结果，完成基于体液中酪氨酸水平作为检测脑卒中发病风险以及发病的生物标志物的检测方法。通过检测脑卒中发病或者高危人群的体液外泌体，如尿液，汗液，唾液等中酪氨酸的含量，从而预测和检测脑卒中的发病。酪氨酸的水平，和脑卒中的发病以及脑卒中发病的风险成正相关。
【专利说明】
一种检测脑卒中发病风险以及发病的生物标志物的检测方法 及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及检测脑卒中发病风险以及发病的生物标志物，具体是基于检测体液中 酪氨酸水平，作为检测脑卒中发病风险以及发病的生物标志物的检测方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 在我国以及世界各国，脑卒中是造成死亡和终生残疾的最重大疾病之一。缺血性 脑卒中是脑卒中中发病率最高的一类疾病。目前诊断的主要手段是通过核磁共振技术，进 行影像学分析。这种方法，只能去医院检测，对于患者很不方便，耗时相对较长、费用较高。 因此，发明一种新型、简便、快速、可以家用的脑卒中检测方法，具有重大的社会经济意义以 及临床价值。
[0003] 酪氨酸是一种芳香族氨基酸，亦是20种用来合成蛋白质的蛋白氨基酸之一。目前 发现，酪氨酸是某些蛋白磷酸化的重要位点，其磷酸化，去磷酸化的程度与肿瘤细胞密切相 关。酪氨酸的浓度与脑卒中的关系，至今尚未有报道。
【发明内容】
[0004] 本发明人的目的是突破现有技术的难题，提出一种可以用于预测，检测脑卒中并 且对人体无损伤的新型检测方法和应用。
[0005] 本发明以脑卒中患者或者脑卒中高危人群其尿液中酪氨酸浓度经生化方法检测 后显著高于正常人群，依次作为检测脑卒中发病风险以及发病的生物标志物的检测方法和 应用。
[0006] 本发明的具体技术方案是： 一种基于体液中酪氨酸水平作为检测脑卒中发病风险以及发病的生物标志物的检测 方法，包括以下步骤： (1) 检测样本中体液中酪氨酸浓度； (2) 将步骤(1)的酪氨酸浓度与已知的脑卒中患者、脑卒中高危人群和健康人群的酪氨 酸浓度结果进行对比； (3) 根据上述对比结果，完成基于体液中酪氨酸水平作为检测脑卒中发病风险以及发 病的生物标志物的检测方法。
[0007] 进一步的，所述体液检测样本是尿液、唾液、汗液、或血液的一种。优选清晨尿液。
[0008] 进一步的，所述检测方法是通过检测酪氨酸的各种性质，从而判断酪氨酸浓度，从 而预测、检测脑卒中。
[0009] 进一步的，所述检测方法是通过酪氨酸的特征显色反应，通过沉淀物颜色变化，判 断酪氨酸浓度，从而实现脑卒中预测、检测。
[0010]进一步的，所述检测方法是通过HPLC(高效夜效色谱法），判断酪氨酸浓度，从而实 现脑卒中预测、检测。
[0011] 进一步的，所述检测方法是通过检测体液光谱，通过酪氨酸的自荧光，判断酪氨酸 浓度，从而实现脑卒中预测、检测。
[0012] 本发明还提供了一种基于体液中酪氨酸水平作为检测脑卒中发病风险以及发病 的生物标志物的应用。
[0013] 本发明利用体液中酪氨酸浓度，预测高危人群得脑卒中的风险，检测脑卒中患者 脑卒中，为临床预测，检测脑卒中疾病建立基础，可以极大的降低脑卒中检测的时间，使患 者或者高危人群可以在家里自行检测，得到及时治疗。同时，本发明提供了检测方法，作为 一种简化的酪氨酸浓度检测方法。既可以在高端精密外泌体酪氨酸的医学诊断或研究等情 况下得到应用、也可以在便捷尿医学诊断、家庭用简易脑卒中检测等情况下得到应用，具有 性价比高、结果精确并且应用广泛等良好效果，非常有利于普及。
【附图说明】
[0014] 图1:健康人群以及脑卒中病人的尿液酪氨酸浓度。脑卒中病人尿液酪氨酸浓度显 著高于健康人群。
[0015] 图2:脑卒中高危人群以及健康人群的尿液酪氨酸浓度。脑卒中高危人群的尿液酪 氨酸浓度显著高于健康人群。
【具体实施方式】
[0016] -、实验方法： 1.样本采集采取脑卒中患者，脑卒中高危人群以及正常人的尿液3ml。
[0017] 2.加入装有0.5ml显色液的反应瓶中，瓶中具体反应如下： a. 硫酸汞完全离子化作为汞源用于反应中，酪氨酸被汞化，反应式：
b. 汞离子被亚硝基取代成3-亚硝基-4-羟基苯丙氨酸，游离出汞离子，反应式：
c. 汞离子与3-亚硝基-4-羟基苯丙氨酸发生螯合作用，生成砖红色螯合物(显色物质）， 根据该螯合物颜色判定酪氨酸含量。反应式： 3.稍震荡后静放5分钟。
[0018] 4.将沉淀物颜色与标准色板对照以判定结果。
[0019] 5.健康人群的标准色板读数平均值是3,但是脑卒中人群以及脑卒中高危人群的 读数平均值在4.5附近。
[0020] 6.统计分析，所有数据按照平均值+标准差的方式给出。数据使用单因素方差分析 进行评估。P值小于〇. 05认为是统计学显著的。
[0021] 二、实验结果和讨论 图1脑卒中人群尿液酪氨酸含量显著高于健康人群。
[0022] 图2脑卒中高危人群尿液酪氨酸含量显著高于健康人群。
[0023] 本发明公开了一种基于体液中酪氨酸水平作为检测脑卒中发病风险以及发病的 生物标志物的检测方法及其应用。脑卒中高危人群以及脑卒中人群相较于健康人群，尿液 中酪氨酸浓度显著高于健康人群。本发明首次提出用酪氨酸浓度来检测预测脑卒中的方法 和应用，解决了目前检测脑卒中只能在医院用影像手段的局限性。为家庭用脑卒中检测提 供了很大的便利。
【主权项】
1. 一种基于体液中酪氨酸水平作为检测脑卒中发病风险以及发病的生物标志物的检 测方法，包括以下步骤： (1) 检测样本中外泌体中酪氨酸浓度； (2) 将步骤(1)的酪氨酸浓度与已知的脑卒中患者、脑卒中高危人群和健康人群的酪氨 酸浓度结果进行对比； (2)根据上述对比结果，完成基于体液中酪氨酸水平作为检测脑卒中发病风险以及发 病的生物标志物的检测方法。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于:所述体液是尿液、唾液、汗液、或血液的一种。3. 如权利要求2所述的方法，其特征在于:所述体液的尿液取自清晨尿液。4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于:所述检测样本中体液中酪氨酸浓度，是通过 酪氨酸的特征显色反应，通过沉淀物颜色变化，判断酪氨酸浓度。5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于:所述检测样本中体液中酪氨酸浓度，是通过 HPLC、生化反应、自荧光检测等所有方法，判断酪氨酸浓度。6. 如权利要求1所述的方法，其特征在于:所述检测样本中体液中酪氨酸浓度，是通过 HPLC、生化反应、自荧光检测等所有方法，判断酪氨酸浓度。7. -种基于体液中酪氨酸水平作为检测脑卒中发病风险以及发病的生物标志物的应 用。
【文档编号】G01N33/68GK106093024SQ201610411494
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月12日 公开号201610411494.1, CN 106093024 A, CN 106093024A, CN 201610411494, CN-A-106093024, CN106093024 A, CN106093024A, CN201610411494, CN201610411494.1
【发明人】殷卫海, 吴丹红, 蔡林卫, 张铭超
【申请人】昂朗生物科技（上海）有限公司