检测降钙素原的试纸条的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种检测降钙素原的试纸条。
【背景技术】
[0002]降钙素原是激素降钙素的前体糖蛋白。目前，国际上已将降钙素原作为评价临床感染程度和严重疾病的一项监测指标。一般认为，降钙素原的生物学效应主要在于:次级炎症因子的作用、趋化因子的作用、抗炎及保护作用等。炎症反应约3小时后，降钙素原在血浆中的水平升高，6-8小时达到最高值，但自身免疫、过敏和病毒感染时降钙素原不会升高，因此可以区分病毒性和病菌性感染，指导用药。细菌感染者血清降钙素原水平与感染严重程度正相关，降钙素原水平下降则提示病情复发。降钙素原体内半衰期为20-24小时，可用于临床监测细菌感染和败血症的病程和预后。
[0003]对于降钙素原的检测，目前常用的检测方法包括:酶联免疫法、化学发光法、胶乳增强免疫比浊法、胶体金免疫层析法、荧光免疫层析法等。酶联免疫法及化学发光法检测灵敏度高，可实现准确定量，但其耗时过长，而且无法进行单份样本的即时测定。胶乳增强免疫比浊法虽可实现高通量筛选，但由于方法学本身的限制，其检测灵敏度较低，无法对低值样品进行精确测定。胶体金免疫层析法操作简单，无需特殊的仪器设备，但只能实现半定量。荧光免疫层析法中，传统应用的有机荧光化合物如异硫氰基荧光素、罗丹明类荧光染料等虽在水溶液中具有很高的灵敏度，但其标记抗体或抗原后用于复杂的血清、体液、细胞等生物样品免疫分析测定时，一旦样品中的待检物浓度在低浓度水平时，共存杂质的浓度将大大高于待检物浓度。此时，高浓度的共存杂质产生的背景荧光就会对免疫产物的荧光测定造成严重的干扰，进而显著降低荧光免疫测定的灵敏度，这极大地限制了其在临床诊断领域的应用。
【实用新型内容】
[0004]抟术问题
[0005]现有技术中缺少一种能够实现降钙素原精确测定的检测试纸条。因此，需要提供一种新型的降钙素原检测试纸条。
[0006]技术方案
[0007]一方面，本实用新型提供了一种检测降钙素原的试纸条，其特征在于，包括以下顺序依次搭接的组成部分:
[0008]a)用于样品接收的样品接收区，
[0009]b)包被有由量子点标记的抗降钙素原的第一抗体的第一样品结合区，
[0010]c)包被有由稀土荧光材料标记的抗降钙素原的第一抗体的第二样品结合区，
[0011]d)具有相互间隔的检测带和质控带的样品检测区，其中所述检测带上固定有抗降钙素原的第二抗体，所述质控带固定有抗鼠IgG的抗体，和
[0012]e)吸水区。
[0013]在一个实施方式中，所述试纸条进一步包括底板，其中所述样品接收区、第一样品结合区、第二样品结合区、样品检测区和吸水区粘结在底板上并顺序依次搭接。
[0014]在一个实施方式中，所述量子点为微球形式且具有2nm-30nm的粒径范围，且所述量子点选自以下组中:CdTe、CdSe, PbSe, InP和GaN。
[0015]在一个实施方式中，所述第二样品结合区上进一步包被有微球，其中所述微球负载有所述稀土荧光材料和所述第一抗体。
[0016]在一个实施方式中，所述微球的粒径大小为50nm_400nm。
[0017]在一个实施方式中，所述微球的粒径大小为100nm-300nm。
[0018]在一个实施方式中，所述微球的粒径大小为10nm或300nm。
[0019]在一个实施方式中，所述检测带和所述质控带之间的间隔在0.3cm至0.5cm之间。
[0020]在一个实施方式中，所述试纸条的宽度在0.2cm至0.5cm之间。
[0021]有益效果
[0022]本实用新型所提供的检测降钙素原的试纸条同时具有高灵敏度、线性范围好，以及低误差范围的优点。
【附图说明】
[0023]图1本实用新型的试纸条的侧视结构示意图。
[0024]图2本实用新型的试纸条的俯视结构示意图。
[0025]附图标记:
[0026]1-样品接收区、2-第一样品结合区、3-第二样品结合区、4-样品检测区、5-吸水区、6-底板、7-量子点(微球)、8_稀土荧光材料、9-检测带、和10-质控带。
【具体实施方式】
[0027]下文中将参照附图来更详细地描述示例性实施方式。所述附图用于图示说明本实用新型，而非对其进行限制。
[0028]图1是本实用新型的试纸条的侧视结构示意图。
[0029]如图1所示，布置在底板6上的试纸条包括样品接收区1、第一样品结合区2、第二样品结合区3、样品检测区4和吸水区5。
[0030]样品接收区I用于接收样品，其可由选自玻璃纤维素膜或者聚酯膜、棉纤的材料制成，优选由玻璃纤维素膜制成。样品接收区I可以起到样品过滤的作用。例如，当待检测样品为血浆、血清时，样品接收区I可以过滤样品中的颗粒性不溶物，由此去除检测时不必要的杂质干扰，提高检测精确度。
[0031]第一样品结合区2上包被有由量子点7标记的抗降钙素原的第一抗体。量子点是由半导体材料制成的、稳定直径在2nm-30nm的纳米粒子，通常呈现微球形。量子点的电子和空穴被量子限域，连续能带结构变成具有分子特性的分立能级结构，所以量子点在受激后可以发射荧光。采用量子点来标记抗体可以极大的提高检测的精确度和灵敏度。在一个实施方式中，所述量子点具有2nm-30nm的粒径。在一个优选实施方式中，所述量子点具有2nm-20nm的粒径。在一个优选实施方式中，所述量子点具有5nm-20nm的粒径。在一个实施方式中，所述量子点为I1-VI族量子点(如CdTeXdSe等)。在另一个实施方式中，所述量子点为II1-V族量子点(如InP、GaN等)。在又一个实施方式中，所述量子点为IV-VI族量子点(如PbSe等)。
[0032]第二样品结合区3上包被有由稀土荧光材料8标记的抗降钙素原的第一抗体。在本实用新型的试纸条中，包被在第一样品结合区2和第二样品结合区3上的抗降钙素原的第一抗体是相同的抗体，区别仅在于其分别由量子点7和稀土荧光材料8标记。
[0033]在本实用新型中，术语“标记”包括采用化学或物理方法使抗降钙素原的第一抗体与量子点和稀土荧光材料直接连接。然而，标记也可以通过其它方式完成，例如稀土荧光材料和抗降钙素原的第一抗体可通过例如同时包埋或负载在微球上的方式达到“标记”的目的。因此，在一个实施方式中，第二样品结合区3上可进一步具有微球(未示出)，所述微球上同时包埋或负载有稀土荧光材料和抗降钙素原的第一抗体。在一个实施方式中，包埋或负载在所述微球上的稀土荧光材料和抗降钙素原的第一抗体之间可以具有化学连接，例如以稀土荧光材料标记的抗降钙素原的第一抗体的形式存在于所述微球上。在另一个实施方式中，包埋或负载在所述微球上的稀土荧光材料和抗降钙素原的第一抗体之间可以不具有化学连接，即所述微球上包埋或负载有彼此间无化学连接的稀土荧光材料和抗降钙素原的第一抗体。
[0034]在一个实施方式中，所述微球可以为聚合物微球，例如聚苯乙稀微球。在一个实施方式中，微球的粒径大小范围在50nm-400nm之间，优选在100nm-300nm之间，更优选为10nm 或 300nm。
[0035]制备稀土荧光微球的方法是现有技术已知的，包括但不限于:包埋法，即在聚合物微球的聚合反应过程中加入稀土材料配合物；键合法，即使稀土元素离子与聚合物侧链上的官能团发生配位反应得到稀土荧光微球；以及溶胀法和包覆法。后两种方法均是在单分散的微球(如:聚苯乙烯微球)的基础上，将稀土材料配合物渗透或包覆在微球的内部或表面，通过控制反应条件，可实现最终制备出单分散性好、荧光强度高、荧光稳定性好的聚合物微球。
[0036]稀土荧光材料包括化学元素周期表中镧系元素一镧(La)、铈(Ce)、镨(Pr)、钕(Nd)、钷(Pm)、钐(Sm)、铕(Eu)、钆(Gd)、铽(Tb)、镝(Dy)、钬(Ho)、铒(Er)、铥(Tm)、镱(Yb)、镥(Lu)，以及与镧系的15个元素密切相关的两个元素一钪(Sc)和钇⑴共17种元素。相对于传统的荧光材料，稀土荧光材料具有吸收能力强、转换率高、并可发射从紫外到红外范围的光谱，在可见光区有很强的发射能力，且物理性能稳定等优点。在一个实施方式中，所述稀土荧光材料为含有铕(Eu)离子、铽(Tb)离子、钐(Sm)离子、钕(Nd)离子、镝(Dy)离子等各种镧系元素的荧光材料中的一种或者几种。在另一个实施方式中，稀土荧光材料为含有铕(Eu)离子、铽(Tb)离子、钐(Sm)离子、钕(Nd)离子、镝(Dy)离子等各种镧系元素的稀土荧光材料中的一种或者几种负载到微球上形成的稀土荧光微球。将稀土荧光材料负载到微球上可进一步提高荧光的稳定性。
[0037]单独量子点标记的抗体虽然灵敏度高，但线性范围不佳，体现为高值检测不准确。单独稀土荧光材料标记的抗体虽然具备良好的线性范围，但是灵敏度有待改进，体现为低值检测不准确。本实用新型联用量子点和稀土荧光材料，量子点标记物有利于低值的检测以达到灵敏度的要求，而稀土荧光材料标记物使得检测的线性范围可覆盖高值区域。
[0038]样品检测区4具有相互间隔的检测带9和质控带10，其中检测带9上固定有抗降钙素原的第二抗体，质控带10固定有抗鼠IgG的抗体。检测带9和质控带10之间的距离可以在0.05cm至0.8cm之间。在一个实施方式中，检测带9和质控带10之间的间隔在0.1cm至0.6cm之间，优选在0.3cm至0.5cm之间。
[0039]吸水区5可由选自由棉绒、玻纤的材料制成，优选由棉绒制成。
[0040]试纸条的整体长度在8cm至1cm之间，整体宽度在0.2cm至0.5cm之间，优选在0.2cm至0.3cm之间，最优选为0.3cm。本实用新型的试纸条在提供灵敏度和检测线性范围的同时，通过降低试纸条的长度和/或宽度可降低抗体的用量，大大节约了生产成本。
[0041]图2是本实用新型的试纸条的侧视结构示意图。对图2中与图1相同的内容不再进行重复描述。
[0042]本实用新型的试纸条具有至少以下诸多优点:
[0043]I)量子点和稀土荧光材料标记物的联用克服了目前降钙素原检测中存在的低值灵敏度和检测线性范围无法兼顾的问题；
[0044]2)独立样品接收区和两个样品结合区的设计有助于提高降钙素原检测灵敏度；和