一种用于肝素结合蛋白荧光免疫层析法定量检测试剂盒的检测板的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种以荧光免疫层析法制备的肝素结合蛋白定量检测试剂盒及其检测板。
【背景技术】
[0002]肝素结合蛋白(Heparin Binding Protein，HBP)又称为37kDa抗微生物阳离子蛋白(CAP37)，是由中性粒细胞合成的37kDa的糖蛋白[1]。HBP属于丝氨酸蛋白酶大家族的成员，尽管它有45%的序列与人中性白细胞弹性蛋白酶相一致，但它没有蛋白酶活性。最初研究HBP是为了其抗微生物活性，但研究发现，HBP与很多炎症反应相关。活化的中性粒细胞接触内皮后，从分泌小泡中释放HBP，HBP 一旦释放，诱导钙依赖的内皮细胞骨架的重排，从而使细胞收缩，并增加内皮细胞的渗透性。它也能使内皮细胞内化以防止细胞调亡。当细胞表面释放M蛋白，此时M蛋白与纤维蛋白原结合形成复合物，并与嗜中性粒细胞表面的?2整联蛋白接触，由分泌小泡分泌HBP。
[0003]在感染灶处，发生吞噬作用时，嗜苯胺蓝颗粒分泌HBP，具有抗微生物生长活性，激活单核细胞和其他炎性介质；HBP也可以使单核细胞内化，维持生存和刺激生成更多的细胞因子。HBP有助于炎症反应的维持和发展，检测HBP有助于鉴别伴有循环系统衰竭的脓毒症的危险性。
[0004]目前，检测HBP的方法主要是酶联免疫吸附试验，该方法操作繁琐，检测速度慢，不适用于大批量样本的操作，且需要专业人员操作。
【发明内容】
[0005]本实用新型的目的是提供一种用于肝素结合蛋白荧光免疫层析法定量检测试剂盒的检测板，其操作简单、准确、快速、灵敏特异。
[0006]为了实现上述目的，本实用新型采取了以下技术方案:
[0007]—种用于肝素结合蛋白荧光免疫层析法定量检测试剂盒的检测板，其特征在于:
[0008]包括底板(7)，底板(7)的中部设置硝酸纤维素膜(2)，硝酸纤维素膜(2)上设置有相互分离且左右依次布置的羊抗兔IgG质控线(3)、肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体-1检测线(4)和羊抗鼠IgG辅助检测线(5)，所述羊抗兔IgG质控线(3)、CCP抗原检测线(4)和羊抗鼠IgG质控线(5)包被在硝酸纤维素膜上，样本垫(I)覆盖在硝酸纤维素膜(2)于羊抗兔IgG质控线(3)所处的这一侧上，吸水垫(6)的一侧覆盖在硝酸纤维素膜(2)的另一侧上。
[0009]进一步地，所述检测板具有外壳，为塑料材质，所述外壳分上盖(8)和下盖(9)连接在一起的两块，上盖(8)设置有加样孔(10)和检测窗(11);检测窗的位置对应羊抗兔IgG质控线(3)、肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体-1检测线(4)和羊抗鼠IgG辅助检测线(5)所在的位置，使所述羊抗兔IgG质控线(3)、肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体-1检测线(4)和羊抗鼠IgG辅助检测线(5)及其左右区域处在检测窗中，加样孔的位置对应样本垫(I)所在的位置，使样品能滴加到样本垫上。
[0010]所述检测板中样本垫可采用全血垫、玻纤、硝酸纤维素膜、吸水垫以及其他具有相似作用的样本垫中的一种或几种。
[0011 ] 所述检测板中的HBP单克隆抗体-1作为捕获抗体。
[0012]本实用新型可应用于但不限于半自动和全自动POCT免疫分析仪器，测定时间短，结果准确、灵敏度高。对单个样本和大量样本检测的成本几乎相同，因此适用于对少量和批量样本的检测。
【附图说明】
[0013]图1为本实用新型所提供的实施例的示意图。
[0014]图2为检测板的截面示意图。
【具体实施方式】
[0015]下面通过实施例进一步详细描述本实用新型，但本实用新型不仅仅局限于以下实施例。
[0016]参照附图。本实用新型所提供的一种用于肝素结合蛋白荧光免疫层析法定量检测试剂盒的检测板，包括底板7，底板7的中部设置硝酸纤维素膜2，硝酸纤维素膜2上设置有相互分离且左右依次布置的羊抗兔IgG质控线3、肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体-1检测线4和羊抗鼠IgG辅助检测线5，所述羊抗兔IgG质控线3、CCP抗原检测线4和羊抗鼠IgG质控线5包被在硝酸纤维素膜上，样本垫I覆盖在硝酸纤维素膜2于羊抗兔IgG质控线3所处的这一侧上，吸水垫6的一侧覆盖在硝酸纤维素膜2的另一侧上。
[0017]所述检测板具有外壳，为塑料材质，所述外壳分上盖8和下盖9连接在一起的两块，上盖8设置有加样孔10和检测窗11 ;检测窗的位置对应羊抗兔IgG质控线3、肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体-1检测线4和羊抗鼠IgG辅助检测线5所在的位置，使所述羊抗兔IgG质控线3、肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体-1检测线4和羊抗鼠IgG辅助检测线5及其左右区域处在检测窗中，加样孔的位置对应样本垫I所在的位置，使样品能滴加到样本垫上。
[0018]本实用新型所提供的肝素结合蛋白荧光免疫层析法定量检测试剂盒由检测板、检测缓冲液、质控品和包含了定标曲线的芯片或二维码构成。
[0019]所述检测缓冲液包括荧光标记的HBP单克隆抗体-2、荧光标记的兔IgG、PBS、表面活性剂、防腐剂。
[0020]所述质控品中含有类血清组分和重组人HBP蛋白，防腐剂。
[0021]所述质控品是包括但不限于两个浓度的质控品。
[0022]所述定标曲线的芯片或二维码包括定标曲线的信息、试剂盒的名称、批号、有效期。
[0023]所述检测缓冲液中的荧光标记的HBP单克隆抗体-2为能够与HBP结合的示踪抗体。
[0024]所述检测缓冲液中的PBS为四盐磷酸缓冲液、三盐磷酸缓冲液和二盐磷酸缓冲液的一种，优选四盐磷酸缓冲液，PO4 3浓度为0.01mol/L, pH值为7.2-7.4。
[0025]所述检测缓冲液中的表面活性剂为吐温-20，其浓度为0.1%_2%，能降低表面张力，减少非特异性结合，提高荧光抗体在溶液中的稳定性，并能促进跑板均匀。
[0026]所述检测缓冲液中的防腐剂为叠氮钠，Proclinl50和Proclin300的一种，优选叠氮钠，其浓度为0.01%-0.1%。
[0027]所述质控品中的类血清组分用来模仿人体血液环境。
[0028]所述质控品中的重组HBP蛋白为能分别和HBP单克隆抗体-1及HBP单克隆抗体_2特异性结合的极简化蛋白。
【主权项】
1.一种用于肝素结合蛋白荧光免疫层析法定量检测试剂盒的检测板，其特征在于:包括底板(7)，底板(7)的中部设置硝酸纤维素膜(2)，硝酸纤维素膜(2)上设置有相互分离且左右依次布置的羊抗兔IgG质控线(3)、肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体-1检测线(4)和羊抗鼠IgG辅助检测线(5)，所述羊抗兔IgG质控线(3)、CCP抗原检测线(4)和羊抗鼠IgG质控线(5 )包被在硝酸纤维素膜上，样本垫(I)覆盖在硝酸纤维素膜(2 )于羊抗兔IgG质控线(3)所处的这一侧上，吸水垫(6)的一侧覆盖在硝酸纤维素膜(2)的另一侧上。2.如权利要求1所述的一种用于肝素结合蛋白荧光免疫层析法定量检测试剂盒的检测板，其特征在于:所述检测板具有外壳，为塑料材质，所述外壳分上盖(8)和下盖(9)连接在一起的两块，上盖(8)设置有加样孔(10)和检测窗(11);检测窗的位置对应羊抗兔IgG质控线(3)、肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体-1检测线(4)和羊抗鼠IgG辅助检测线(5)所在的位置，使所述羊抗兔IgG质控线(3)、肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体-1检测线(4)和羊抗鼠IgG辅助检测线(5)及其左右区域处在检测窗中，加样孔的位置对应样本垫(I)所在的位置，使样品能滴加到样本垫上。
【专利摘要】本实用新型提供一种用于肝素结合蛋白荧光免疫层析法定量检测试剂盒的检测板，包括底板，底板的中部设置硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上设置有相互分离且左右依次布置的羊抗兔IgG质控线、肝素结合蛋白单克隆抗体-1检测线和羊抗鼠IgG辅助检测线，羊抗兔IgG质控线、CCP抗原检测线和羊抗鼠IgG质控线包被在硝酸纤维素膜上，样本垫覆盖在硝酸纤维素膜于羊抗兔IgG质控线所处的这一侧上，吸水垫的一侧覆盖在硝酸纤维素膜的另一侧上。本实用新型可应用于但不限于半自动和全自动POCT免疫分析仪器，测定时间短，结果准确、灵敏度高。对单个样本和大量样本检测的成本几乎相同，因此适用于对少量和批量样本的检测。
【IPC分类】G01N33/577, G01N33/558, G01N33/68
【公开号】CN204882575
【申请号】CN201520549689
【发明人】王森, 严静, 李佳佳, 蔡国龙, 洪龙斌, 龚仕金, 龚庆, 羊兰翠, 虞意华, 田堃, 周旭一
【申请人】杭州中翰盛泰生物技术有限公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年7月27日