检测IgM抗体的胶体金试纸条及其试纸卡、试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型涉及一种试纸条，具体涉及一种检测IgM抗体的胶体金试纸条，所述 IgM抗体为九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体，以及包括该胶体金试纸条的胶体金试纸 卡及胶体金试剂盒。
【背景技术】
[0002] 目前通过免疫荧光试剂盒检测样品中的九项呼吸道病原体的特异性IgM抗体是一 种成熟的技术，但是所需时间较长。例如，安图生物公司九项呼吸道感染病原体IgM抗体检 测试剂盒采用间接免疫荧光法原理，在载玻片上（10孔/片)分别包被：1孔包被嗜肺军团菌 血清I型，2孔包被McCoy细胞中的肺炎支原体，3孔包被Q热立克次体II相，4孔包被肺炎衣原 体(原生小体），5孔包被HEp-2细胞中的腺病毒，6孔包被HEp-2细胞中的呼吸道合胞病毒，7 孔包被LLC-MK2细胞中的甲型流感病毒，8孔包被LLC-MK2细胞中的乙型流感病毒，9孔包被 LLC-MK2细胞中的副流感病毒1，2和3型，10孔为质控孔。除嗜肺军团菌，载玻片中所有抗原 都是从细胞培养物中获得。简单步骤为:稀释血清样本(5min)-加入抗人IgG吸附剂处理血 清样本，并离心，（20min)-在载玻片中加入所检测血清样本，并37°C孵育90min-清洗并晾 干15min-加兔抗人IgM-FITC结合物，并7°C孵育30min-清洗并晾干15min-加入封闭介质 并置于显微镜下观察结果15min，所以检测时间需要约3小时以上。
[0003] 现有技术中还有其他的检测呼吸道病原体的试剂盒，但这些试剂盒及相关检测方 法常需要扩增样品的核酸片段，有的需培养或制备相应的探针溶液，有的还需使用大型仪 器设备，如质谱仪、GeXP遗传分析仪等进行检测。这会付出额外的培养时间和反应时间，并 且要求有专业人员和昂贵的专业设备相配合才能得以实施，因而检测成本高且效率较低。
[0004] 胶体金试纸条作为一种快速现场检测技术，操作简便，一般15分钟内即可肉眼读 出结果。然而，目前还未见在一个胶体金试纸条上同时检测九项呼吸道病原体的特异性IgM 抗体的报道。 【实用新型内容】
[0005] 因此，本实用新型的目的在于克服现有技术中的上述缺陷，提供了一种特异性强、 检测便捷、价格低廉的检测九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体的胶体金试纸条，还提供 了包括该胶体金试纸条的胶体金试纸卡及胶体金试剂盒。
[0006] 为实现上述目的，本实用新型提供了一种检测IgM抗体的胶体金试纸条，所述IgM 抗体为九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体，所述胶体金试纸条包括在聚氯乙烯(PVC)底 板上依次贴附的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫;所述结合物垫为包覆有兔抗人 IgM抗体-胶体金结合物的玻璃纤维膜;所述硝酸纤维素膜依次包被有9条检测线和1条质控 线，所述9条检测线分别为肺炎支原体重组抗原、肺炎衣原体重组抗原、甲型流感病毒抗原、 乙型流感病毒抗原、副流感病毒抗原、嗜肺军团菌抗原、Q热立克次体抗原、呼吸道合胞病毒 抗原和腺病毒抗原(下文中可分别简称为T1~T9线），所述质控线为二抗(下文中可简称为C 线）。以上9条检测线可以以任意顺序排列而不影响检测结果。
[0007] 本实用新型涉及的呼吸道感染病原体的相关介绍如下：
[0008] 肺炎支原体:肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，可在呼吸道粘 膜上皮内潜伏，部分患者无明显症状，但大部分患者为显性感染，在3岁以下儿童呼吸道感 染多见，成人以肺炎表现为主。肺炎支原体肺炎潜伏期为14~21天，起病缓慢，IgM抗体一般 在感染后1周出现，3~4周达高峰期，可持续3~6个月。
[0009] 肺炎衣原体:肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎，在老年 人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%，肺炎衣原体所感染所致的肺炎， 症状和体征无特异性，多数起病缓慢，潜伏期一般为30天左右，IgM抗体在发病2~3周出现， 一般来说可持续存在2~6个月。
[0010] 流感病毒:它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。 由于它易与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期间临床诊断很困难，因此实验室诊断显得 非常重要。流感病毒感染的潜伏期一般为1~7天，IgM抗体在发病1周左右出现，可持续2~3 个月。
[0011] 副流感:副流感病毒在2~4岁儿童中能引起喉气管支气管炎，潜伏期一般为2~7 天，IgM抗体在发病1周左右出现，可持续2~3个月。
[0012] 嗜肺军团菌:人最易感染嗜肺军团菌1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。10% 的肺炎是由嗜肺军团菌1型所引起的，潜伏期一般为2~10天，IgM抗体存在感染后1周出现， 并可持续3~6个月。
[0013] Q热立克次体:Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热，非典型肺炎，肝 炎或者心内膜炎，潜伏期为2~38天，通常为12~19天，IgM抗体一般在感染后2周出现，4~8 周达高峰，可持续存在3~4个月。
[0014] 呼吸道合胞病毒:是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。潜 伏期为3~7天，IgM抗体在发病1周左右出现。
[0015] 腺病毒:腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发 热和轻度呼吸道感染。腺病毒感染的潜伏期为2~14天，IgM抗体在发病1周左右出现。可持 续2~3个月。
[0016] 免疫球蛋白M(IgM)是人类或者动物体内最重要的一种免疫球蛋白。当机体感染病 原体后，在体内，最早出现的是该病原体的特异性的IgM抗体，之后IgM浓度降低，特异性的 IgG抗体升高。因此，通过检测机体内病原体特异性的IgM抗体的存在与否，可以诊断人或者 动物对该病原体是否有早期感染的可能。血清内若检测出病原体的特异性的IgM抗体，证明 该机体有近期感染的发生，如果能够实现早诊断、早诊疗，无疑对临床医生和患者都是具有 重要的意义。
[0017] 根据本实用新型的胶体金试纸条，其中，所述样品垫为玻璃纤维膜。
[0018] 根据本实用新型的胶体金试纸条，其中，所述吸水垫为吸水纸。
[0019] 根据本实用新型的胶体金试纸条，其中，所述检测线和质控线的各相邻线的间隔 为3~4mm〇
[0020] 根据本实用新型的胶体金试纸条，其中，所述检测线和质控线的各相邻线的间隔 均为3mm。
[0021] 根据本实用新型的胶体金试纸条，其中，所述胶体金试纸条的宽度为3~5_。
[0022] 根据本实用新型的胶体金试纸条，其中，所述胶体金试纸条的宽度为4_。
[0023]根据本实用新型的胶体金试纸条，其中，所述样品垫与结合物垫之间重叠1~2_， 所述结合物垫与硝酸纤维素膜之间重叠1~2mm，所述硝酸纤维素膜与吸水垫之间重叠1~ 2mm 〇
[0024] 根据本实用新型的胶体金试纸条，其中，选用的二抗为羊抗兔IgG抗体。
[0025] 该胶体金试纸条的检测原理大体为:在样品垫滴加入待测样品后，通过毛细作用， 待测样品将结合物垫中的兔抗人IgM抗体-胶体金结合物溶解释放出来并向吸水垫一端的 方向移动。如果被检测样品中含有针对肺炎支原体、衣原体、甲型流感、乙型流感、副流感、 嗜肺军团菌、Q热立克次体、呼吸道合胞病毒、腺病毒中的任何一种或者多种病原体对应的 特异性的IgM抗体，则与金纳米颗粒-兔抗人IgM抗体发生特异性反应，生成金纳米颗粒-兔 抗人IgM抗体-特异性的IgM抗体复合物，当样品继续移动到T1~T9线时，其中有针对感染的 病原体的特异性IgM抗体会和相应的病原体的抗原发生特异性反应并被其捕获，形成抗原-特异性IgM抗体-兔抗人IgM抗体-胶体金的复合物，因此在该测试线处形成一条红色条带， 样品继续移动到C线处时，多余的会被二抗捕获，因而在C线处形成一条红色条带。C线显色 证明该测试的有效性，C线不显色则视为测试无效，需重新检测。
[0026] 本实用新型还提供了一种检测IgM抗体的胶体金试纸卡，所述IgM抗体为九项呼吸 道感染病原体特异性IgM抗体，所述胶体金试纸卡包括壳体和位于所述壳体中的本实用新 型的胶体金试纸条，所述壳体上设置有加样孔和显色观察窗，所述加样孔对准所述样品垫 的位置，所述显色观察窗对准所述包被有9条检测线和1条质控线的硝酸纤维素膜的位置。
[0027] 本实用新型还提供了一种检测IgM抗体的胶体金试剂盒，所述IgM抗体为九项呼吸 道感染病原体特异性IgM抗体，所述胶体金试剂盒包括铝箱袋和密封在所述铝箱袋中的干 燥剂、滴管以及本实用新型的胶体金试纸条或胶体金试纸卡。
[0028] 本实用新型的发明人将胶体金免疫层析技术和间接免疫法原理相结合，将测试线 包被九项呼吸道病原体所相应的重组抗原，通过免疫间接法原理，一步法就能够快速检测 出样本中是否有九项呼吸道病原体相应的特异性的IgM抗体。到目前为止，没有关于九项呼 吸道病原体特异性IgM抗体通过胶体金试纸条快速检测的试剂盒。尽管安图生物公司可以 实现同时检测，但是耗时很长，大于3个小时。更具体地，本发明所提供的胶体金试纸条及相 关的试纸卡和试剂盒相对于现有技术可具有下列优势：
[0029] (1)检测速度快、效率高。一般在10~15分钟内即可读取显色结果并进行判断，不 需要额外的样品培养时间或反应时间。
[0030] (2)特异性强、符合率高。胶体金试纸条上的9条检测线可以针对性地分别检测可 能存在的九项呼吸道病原体的特异性IgM抗体，并通过可目视的显色（例如显红色或不显 色）来体现特异性IgM抗体的阴性或阳性。根据本实用新型对实际样品的检测结果来看，其 对九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体的检测符合率均在95%以上。
[0031] (3)操作简单，价格低廉，不需要专业技术人员或大型仪器设备即可实施检测，尤 其适合在偏远贫困地区使用。
[0032] (4)可适用于早期诊断，通过肉眼即可读出检测结果，从而获取更多的相关信息， 辅助临床医生给予正确的医疗诊断等，早发现、早诊断、早治疗、早痊愈，具有重要的临床意 义。
【附图说明】
[0033]以下，结合附图来详细说明本实用新型的实施方案，其中：
[0034]图1示出了本实用新型的检测IgM抗体的胶体金试纸条的示意性的结构及原理图； [0035]图2示出了本实用新型的检测IgM抗体的胶体金试纸卡的结构示意图。
[0036] 附图标记说明：
[0037] 1、样品垫;11、九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体；
[0038] 2、结合物垫;21、兔抗人IgM抗体-胶体金结合物；
[0039] 3、硝酸纤维素膜;4、吸水垫；<