血小板蛋白gpⅸ一步法快速检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型属于生物检测试剂盒技术领域，具体涉及一种血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]出血性疾病在临床上是一种非常常见的疾病，如果得不到及时确诊治疗，则可能导致剧烈疼痛、严重关节损伤以及致命的内出血从而导致死亡，而全世界仅有30%的出血性疾病患者得到了确诊。免疫性血小板减少症(ITP)是临床最为常见的出血性疾病，约占出血性疾病总数的30%，欧美国家年发病率为5-10/10万人口。可发生在任何年龄阶段，分急性及慢性俩种，急性多见于儿童，慢性多见于成人，以40岁以下女性常见，65岁以上老年发病率呈上升趋势。临床表现以皮肤的瘀点及瘀斑，粘膜及内脏出血为特征。根据2010年世界血友联盟调查数据显示ITP患病率约为千分之一，中国约有150万患者。ITP是由机体免疫系统功能紊乱引起血小板破坏增加，从而导致血小板数目减少的自身免疫性出血性疾病，主要是由于血小板特异性自身抗体介导的血小板破坏引起的血小板数量减少，故血小板特异性自身抗体的检测对ITP的诊断有重要的临床应用价值。
【实用新型内容】
[0003]本实用新型的目的是提供一种血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒，可快速检测血小板蛋白GPK，灵敏度高、特异性好、漏诊率低，操作简单方便。
[0004]为实现上述目的，本实用新型所采用的技术方案是:一种血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒，其特征在于:包括盒体和盖体，盖体从盒体开口的一侧密封盒体，盖体上设有观察窗和加样孔，观察窗分为测试T区和质控C区，盒体内容置有一检测带，检测带上包被有抗GPIX单克隆抗体的微球和FITC标记的羊抗人多克隆抗体。
[0005]优选的，所述盒体与盖体采用搭扣的方式扣合。
[0006]优选的，所述盒体为一端呈方形、另一端呈圆弧形的形状，盖体的形状与盒体的形状相适应。
[0007]优选的，所述盖体的圆弧形的一端设有便于捏持的凸纹。
[0008]优选的，所述盒体的一外侧壁上设有名片卡位槽。
[0009]优选的，所述微球的材质为聚苯乙烯。
[0010]其中，流式微球技术(cytometric bead array，CBA)是基于流式细胞术发展起来的新技术，它以聚苯乙烯微球为反应界面，利用特异性单克隆抗体包被后即可俘获一些小分子物质，通过检测微球的“放大”作用对这些小分子物质进行检测。近年来，CBA正越来越多的应用于血清、血浆、培养细胞上清、眼泪或房水等各种液相中可溶性蛋白及细胞因子的检测。
[0011]血小板特异性自身抗体介导的血小板破坏是经典的ITP发病机制。约50%?60%的ITP患者血小板表面结合有IgG型自身抗体，可识别血小板表面的I种或多种GP，包括GP Πb/ma,GPIb/IX，Ia/Π a，IV，V等。其中约75%的血小板抗体都位于血小板膜GPΠ b/nia，GPIb/IX复合体上。血小板自身抗体引起血小板破坏加速的可能机制:自身抗体结合在血小板上，一方面抗体分子的Fe段与巨■细胞的Fe受体(FcR)结合，导致血小板被吞■破坏；另一方面抗原抗体复合物可激活补Clq，随后补体系统各成分相继被激活，C3裂解产物C3b附着于血小板表面，并与巨噬细胞的C3b受体结合，也导致血小板吞噬破坏。个别患者血小板自身抗体不仅导致血小板破坏，还可能引起血小板功能异常。
[0012]包被抗GPIX(单抗 SZl)、GPIb(单抗 SZ2)、抗 GPIIb(单抗 SZ22)、抗 GPma(单抗SZ21)、抗GMP-140(单抗SZ51)单克隆抗体的微球可捕获血小板特异性抗原抗体复合物，在加入FITC标记的羊抗人多克隆抗体后，流式细胞仪上检测平均荧光强度值(Meanfluorescence intensity，MFI)可反映患者血小板糖蛋白特异性自身抗体情况，从而实现ITP的诊断。
[0013]上述抗GPIX单克隆抗体的微球的制备过程如下:
[0014](a)微球的制备:采用微乳聚合法制备粒径为50_1000nm的聚苯乙烯微球，所述微球表面带有羧基、氨基、醛基、溴乙酰基、碘乙酰基、硫醇基和环氧基中的一种或多种或不带基团；
[0015](b)抗GPK单克隆抗体的微球的制备:用缓冲液稀释步骤(I)制备完成的微球，加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，于摇床上活化后，离心处理，去除上清液，加入缓冲液对沉淀复溶，然后加入抗GPK单克隆抗体，于摇床上偶联，然后加入乙醇胺和牛血清白蛋白，密封过夜，最后离心处理，去除上清液，再用缓冲液对沉淀复溶，超声处理，制得抗GPK单克隆抗体的微球。
[0016]采用上述技术方案后，本实用新型具有以下积极效果:
[0017]本实用新型中的血小板特异性自身抗体检测试剂盒(流式微球法)专供检测ITP与非免疫性血小板减少患者血小板膜表面的GPK自身抗体，该产品采用了流式微球技术，使用的抗体原料质量符合国家标准要求。产品性能指标符合国标，灵敏度高、特异性好、漏诊率低、操作简单方便，优于目前在使用的血小板相关抗体检测，可替代MAIPA作为一种新的实用的易于推广的实验方法。
【附图说明】
[0018]图1为本实用新型的血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒的俯视图；
[0019]图2为本实用新型的血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒的主视图。
[0020]其中:1、盒体，2、盖体，3、观察窗，4、加样孔，5、凸纹，6、名片卡位槽。
【具体实施方式】
[0021]下面结合附图和【具体实施方式】对本实用新型作进一步详细说明。
[0022]如图1-2所示，为本实用新型的血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒，包括盒体I和用于密封盒体I开口一侧的盖体2，盒体I与盖体2采用搭扣的方式扣合。盒体I为一端呈方形、另一端呈圆弧形的形状，盖体2的形状与盒体I的形状相适应。
[0023]盖体2上设有观察窗3和加样孔4，观察窗3分为检测T区和质控C区，盒体I内容置有一检测带，检测带上包被有抗GPK单克隆抗体的微球和FITC标记的羊抗人多克隆抗体，其中，微球的材质为聚苯乙烯。待检测的血小板从加样孔4内滴加到检测带上，与抗GPIX单克隆抗体发生特异性反应，最终被FITC标记显示。
[0024]盖体2的圆弧形的一端设有凸纹5，凸纹5便于人手捏持。
[0025]盒体I的一外侧壁上设有名片卡位槽6，名片卡位槽6的设置是为了便于能够插入记载信息的名片，便于记录检测结果信息。
[0026]对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本实用新型要求的保护范围之内。
【主权项】
1.一种血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒，其特征在于:包括盒体(I)和盖体(2)，盖体(2)从盒体(I)开口的一侧密封盒体(I)，盖体(2)上设有观察窗(3)和加样孔(4)，观察窗(3)分为测试T区和质控C区，盒体(I)内容置有一检测带，检测带上包被有抗GPK单克隆抗体的微球和FITC标记的羊抗人多克隆抗体。2.根据权利要求1所述的血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒，其特征在于:盒体(I)与盖体(2)采用搭扣的方式扣合。3.根据权利要求2所述的血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒，其特征在于:盒体(1)为一端呈方形、另一端呈圆弧形的形状，盖体(2)的形状与盒体(I)的形状相适应。4.根据权利要求3所述的血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒，其特征在于:盖体(2)的圆弧形的一端设有便于捏持的凸纹(5)。5.根据权利要求4所述的血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒，其特征在于:盒体(I)的一外侧壁上设有名片卡位槽(6)。6.根据权利要求1-5任一项所述的血小板蛋白GPK—步法快速检测试剂盒，其特征在于:所述微球的材质为聚苯乙稀。
【专利摘要】本实用新型属于生物检测试剂盒技术领域，具体涉及一种血小板蛋白GPⅨ一步法快速检测试剂盒，包括盒体和盖体，盖体从盒体开口的一侧密封盒体，盖体上设有观察窗和加样孔，观察窗分为测试T区和质控C区，盒体内容置有一检测带，检测带上包被有抗GPⅨ单克隆抗体的微球和FITC标记的羊抗人多克隆抗体。本实用新型的试剂盒，可快速检测血小板蛋白GPⅨ，灵敏度高、特异性好、漏诊率低，操作简单方便。
【IPC分类】G01N33/68
【公开号】CN205210095
【申请号】CN201520999933
【发明人】钱晓锦
【申请人】常州福隆生物有限公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年12月4日