β-CTX检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种β?CTX检测试剂盒，包括盒体，盒体内设有多个下凹放置位，其中两个下凹放置位内分别设有第一试剂瓶、第二试剂瓶，在盒体内还放置有微孔测试板以及用于密封微孔测试板的封板膜；第一试剂瓶内装有生物素标记的小鼠抗β?胶原降解产物单克隆抗体溶液，第二试剂瓶内装有HRP标记的小鼠抗β?胶原降解产物单克隆抗体溶液。通过本实用新型可以实现对人血清或血浆中β?胶原降解产物的快速检测，检测成本低，使用方便。
【专利说明】
β-CTX检测试剂盒
技术领域
[0001]本实用新型属于医疗器械领域，具体地是涉及一种试剂盒，该试剂盒用于人血清 β-胶原降解产物(β-CTX)的检测。
【背景技术】
[0002] β-〇ΤΧ(β一Cross laps)是I型胶原分解片段的一种，由C端肽的α-天冬氨酸转变成 β型(β-CTX)而形成，由8个氨基酸组成。基质的有机成分中，I型胶原的含量超过90%。1型胶 原受骨基质合成和分解的调控，因此，骨代谢的过程中成熟的I型胶原被降解成小分子片段 进入血循环，并通过肾脏进行排泄。通过检测骨吸收指标，可了解骨转换的程度。生理或病 理性骨吸收增强时(如老年人或骨质疏松症），1型胶原的降解也增高，血中的分解片段含量 随之也相应升高。I型胶原降解产物的主要分子片段是羧基端肽(CTX)。在骨成熟过程中，C 端肽的α-天冬氨酸转变成β型天冬氨酸(β-CTX)。此类羧基端的异构肽是I型胶原降解的主 要特异性产物。血清β-CTX水平的增高表明患者的骨吸收程度增加，骨吸收抑制治疗后血清 β-CTX水平会恢复正常。检测血清CTX适用于监测骨质疏松症或其它骨疾病的抗吸收治疗 (如二磷酸盐类和激素替代治疗）。
[0003] 另一方面，现有的检测手段存在诸多缺陷：检测成本较高，使用不方便，且无法实 现快速检测，测试的灵敏度也比较低。
【发明内容】
[0004] 本实用新型的目的，在于提供一种试剂盒，通过本实用新型可以实现对人血清β-胶原降解产物的检测，检测成本低，使用方便。
[0005] 本实用新型的技术方案如下：
[0006] β-CTX检测试剂盒，包括盒体，盒体内设有多个下凹放置位，其中两个下凹放置位 内分别设有第一试剂瓶、第二试剂瓶，在盒体内还放置有微孔测试板以及用于密封微孔测 试板的封板膜;第一试剂瓶内装有生物素标记的小鼠抗胶原降解产物单克隆抗体溶液， 第二试剂瓶内装有HRP标记的小鼠抗β_胶原降解产物单克隆抗体溶液。
[0007] 在所述下凹放置位内还设有至少八个辅助测试瓶。
[0008] 所述辅助测试瓶为十二个，其中六个装有校准品，其中两个装有质控品，另四个分 别装有孵育缓冲液、底物TMB溶液、浓缩洗板液、终止液。
[0009] 所述微孔测试板为至少两个，所述封板膜也为至少两个。
[0010]在所述盒体内设有框架或插槽，所述微孔测试板置于该框架或插槽内。
[0011]本实用新型所述β-CTX检测试剂盒使用方便，可以实现快速的检测，检测成本低， 合理的设计，使用方便;且该试剂盒对人血清或血浆中胶原降解产物进行检测时，具有特 异性、灵敏度和精密度都非常好的优点。
【附图说明】
[0012]图1是本实用新型所述测试盒在打开状态时的结构图；
[0013] 附图标记说明：
[0014] 10、盒体，11、下凹放置位，12、插槽，21、第一试剂瓶，22、第二试剂瓶，23-34、辅助 测试瓶，40、微孔测试板。
【具体实施方式】
[0015] 为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中 给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所 描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻 全面。
[0016] 如图1所示，一种用于人血清β-胶原降解产物检测的试剂盒，其包括盒体10,盒体 10内设有多个由固定泡沫模具形成的下凹放置位11，其中两个下凹放置位11内分别设有第 一试剂瓶21、第二试剂瓶22,在盒体内10还放置有微孔测试板40以及用于密封微孔测试板 40的封板膜(封板膜可随机放置，图1中省略），微孔测试板40中的微孔内包被有链霉亲和 素。在其余的下凹放置位11内还设有十二个辅助测试瓶23-34。
[0017] 具体组成为：
[0018] 1.微孔测试板40:微孔测试板40上具有12条χ8孔，包被有链霉亲和素，微孔测试板 40置于盒体10内的插槽12中；同时附带四片用于密封微孔测试板的封板膜，以及说明书1 份，质控报告单1份(图1中省略）。
[0019] 2、第一试剂瓶21内装有生物素标记的小鼠抗β-胶原降解产物单克隆抗体溶液，其 浓度为I. 〇mg/L;第二试剂瓶22内装有HRP标记的小鼠抗β-胶原降解产物单克隆抗体溶液。
[0020] 3、辅助测试瓶23-28内分别装有校准品（分别标记为A-F)，六个瓶内的校准品分别 为具有可直接使用的含有β-胶原降解产物的Tris缓冲液，校准品A: I X 5. OmL，校准品B-F: 5 X0.4mL〇
[0021] 4、辅助测试瓶29、30内装有质控品，该质控品为可直接使用的含有β-胶原降解产 物的Tris缓冲液，2 X 0.4mL。5、辅助测试瓶31，装有孵育缓冲液:含有蛋白稳定剂的Tris缓 冲液，lX19mL。
[0022] 6、辅助测试瓶32,装有底物TMB溶液，可直接使用的四甲基联苯胺(TMB)底物(溶于 酸性缓冲液中），lX12mL。
[0023] 7、辅助测试瓶33，装有浓缩洗板液:含有吐温的50 X Tris缓冲液，I X 20mL。
[0024] 8、辅助测试瓶34,2M稀硫酸作为终止液，I X 12mL。
[0025] 使用前，将所有试剂平衡至室温（18-22Γ)。确定实验所需微孔测试板40的数量。 每一样本设两个平行孔;另外，每轮实验共需要16孔用于校准品和质控品，将适当数量的微 孔测试板40置于塑料框架上，将未使用的微孔测试板40与干燥剂一起密封保存。
[0026] 本实施例的使用过程具体包括以下步骤：
[0027] 1)按照所需测定的样本数量及布局在板条上放好微孔测试板40。
[0028] 2)加入校准品、质控品和样本各50yL至待测孔中。
[0029] 3)每孔加入抗体混合溶液150yL。
[0030] 4)用封板膜将微孔测试板40的孔封好，置于室温下（18-22°C)振荡（300rpm)孵育 120 ±5分钟。
[0031] 5)用稀释好的洗液将微孔测试板40清洗5次。
[0032] a.自动洗板:设置洗板机分配每孔至少300yL洗液。重复洗板5次。
[0033] b.手动洗板:迅速颠倒倒出孔内物。每孔加入250yL洗液。重复洗板5次。
[0034]在进入下一步之前，于吸水纸上用力拍打倒置的板以去除多余的洗液。
[0035] 6)在清洗后不要让孔干燥!拍板后立即加底物，每孔加入底物液100yL。
[0036] 7)用封板膜将微孔测试板40封好，置于室温（18-22Γ)下避光振荡（300rpm)孵育 15 ±2分钟。
[0037] 8)每孔加入终止液IOOyL。
[0038] 9)加入终止液后2小时内以650nm为参照测定450nm下的吸光度。
[0039] 本实施例的检测范围：
[0040]如果待测样本的吸光度高于校准品F，建议用校准品A稀释样本并重新分析。
[0041 ]关于本实施例检测结果的解释：
[0042]可使用二次方程曲线拟合，也可以计算样本平行孔吸光度的平均值，构建六个校 准品A-F的吸光度平均值(纵坐标)对相应CTX浓度(横坐标）的标准曲线，依此用内插法确 定质控和待测样本中CTX的浓度。结果举例：
[0044] 本实施例所述β-CTX检测试剂盒使用方便，可以实现快速的检测，检测成本低，方 便使用，且该试剂盒对人血清或血浆中胶原降解产物进行检测时，具有特异性、灵敏度和 精密度都非常好的优点。
[0045] 以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实 施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存 在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0046]以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并 不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员 来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的 保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1. β-CTX检测试剂盒，其特征在于，包括盒体，盒体内设有多个下凹放置位，其中两个下 凹放置位内分别设有第一试剂瓶、第二试剂瓶，在盒体内还放置有微孔测试板以及用于密 封微孔测试板的封板膜;第一试剂瓶内装有生物素标记的小鼠抗β-胶原降解产物单克隆抗 体溶液，第二试剂瓶内装有HRP标记的小鼠抗β-胶原降解产物单克隆抗体溶液。2. 如权利要求1所述β-CTX检测试剂盒，其特征在于，在所述下凹放置位内还设有至少 八个辅助测试瓶。3. 如权利要求2所述β-CTX检测试剂盒，其特征在于，所述辅助测试瓶为十二个，其中六 个装有校准品，其中两个装有质控品，另四个分别装有孵育缓冲液、底物TMB溶液、浓缩洗板 液、终止液。4. 如权利要求1至3中任一项所述β-CTX检测试剂盒，其特征在于，所述微孔测试板为至 少两个，所述封板膜也为至少两个。5. 如权利要求1至3中任一项所述β-CTX检测试剂盒，其特征在于，在所述盒体内设有框 架或插槽，所述微孔测试板置于该框架或插槽内。
【文档编号】G01N33/577GK205538999SQ201620074385
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年1月25日
【发明人】郭志程
【申请人】广州菲康生物技术有限公司