专利名称：脐血dna的制作及保存方法
背景技术：
本发明涉及一种脐血DNA的制作及保存方法。
现有技术脐血作为一种资源，其重要性及应用越来越受到人们的重视。目前脐血干细胞的制作与保存已开始进行，但脐血DNA作为一种最原始、最纯粹的DNA，其制作与保存意义重大，目前尚无人进行该方面的工作。
发明内容
本发明的目的就是提供一种脐血DNA的制作、保存方法。该方法利用分子生物学手段将婴儿脐血总DNA提取并保存，为今后身份鉴别、基因诊断、基因治疗、器官移植等提供最原始的DNA记录。
为实现上述目的，本发明提供一种脐血DNA的制作及保存方法，它依次包括如下步骤(1)采集脐血，将出生婴儿的脐带血和胎盘血采集到含抗凝剂的脐血收集袋中；(2)取血加入含有抗凝剂的离心管中，离心去除红细胞；(3)吸去上清，用加样枪将中层淡黄色细胞层，小心转移至新的离心管中；(4)加入细胞裂解液，轻轻混匀，置于37℃水浴；(5)加入蛋白酶K，轻轻混匀；(6)置于50℃水浴，不时旋转；(7)将上述混合液冷却至室温，加入等体积水饱和酚，缓慢颠转，温和混匀两相，直至成乳浊液；
(8)离心；(9)用水饱和酚抽提一次，再用氯仿抽提一次，收集水相；(10)加入冷的无水乙醇，沉淀DNA；(11)加入缓冲溶液溶解DNA；(12)进行DNA电泳及酶消化试验，检测DNA的浓度和纯度，及其完整性和消化能力、基因特征、血型，得出分析结果；(13)将DNA置于滤膜上，抽真空密封于锡箔袋中，将该锡箔袋放入DNA珍藏盒内；该盒内还放置有微型光盘，其上刻录有脐血DNA的上述分析结果，包括DNA的浓度、纯度、及其完整性和消化能力、基因特征、血型；(14)余下的DNA入库保存。
所述步骤(2)中的抗凝剂为乙二胺四乙酸。
所述步骤(5)中的蛋白酶K终浓度为100ug/ml。
所述步骤(11)中的缓冲溶液为三羟甲基胺基甲烷-乙二胺四乙酸溶液、或去离子水。
所述步骤(12)的电泳为琼脂糖凝胶电泳；所用酶为限制性内切酶HindIII。
所述微型光盘上还刻录有以下内容DNA及分子遗传学的背景资料；婴儿DNA的统一编号；父母或新生儿出生时的照片；婴儿出生时的体重、出生年月日、民族、籍贯。
本发明还提供一种脐血DNA库的建立方法，它包括如下步骤(1)将按上述方法得到的DNA的分析结果输入计算机；(2)建立DNA分析结果数据库。
在上述步骤(2)中，所述数据库系统可完成顾客信息的录入、查询、修改，其记录有新生儿的所有出生的数据、图片信息及提取脐血基因过程中的所有操纵数据；每条记录都以序列编号标识，数据库通过条码识别可根据编号、出生时间、父母姓名的数据完成单个或几个字段的复合查询，在将来的升级网络版中将继续完善数据共享，选择打印，扩大记录字段等功能。
图1为脐血DNA制作及保存流程图。
具体实施例方式
脐血，就是指新生儿出生10分钟内，脐带被结扎后，胎盘内由脐带流出的血。从新生儿脐血中提取的整组DNA，称之为脐血DNA，大量脐血DNA样本则组成脐血DNA库。脐血DNA包含了婴儿所有遗传信息和基因特征，是最原始、最纯正的DNA记录。随着年龄的增长及与外界环境的不断接触，DNA有可能受到影响而发生变化，许多疾病都是由于基因变异所致。所以，保存脐血DNA的价值就在于基因的原始性，它是对孩子生命信息最真实、最本质的反映。人的一生中，也只有这样唯一的一次保存机会。这种信息是最原始、最真实、没有任何外因干扰和变异的生命信息，可以用来诊断和预防遗传疾病的发生，一旦孩子在生长、发育过程中发生疾病，可以通过脐血DNA中的信息对其进行基因诊断、基因治疗。特别是在分子生物学日益发达和完善的今天，应用分子生物学技术作病因诊断和治疗更有特别价值。另外，脐血DNA在人体身份识别、亲子鉴定、器官移植、遗传疾病诊断、治疗和研究方面更具重大意义。
如图1所示，本发明的具体操作步骤如下1.在婴儿分娩过程中，由专职医务人员采取婴儿脐血；2.将脐血血样和详细登记表送至中心实验室；3.按无重复编号登记于中心实验室的中央计算机数据库登记；4.按如下步骤提取脐血整组DNA(1)采集脐血，将出生婴儿的脐带血和胎盘血采集到含抗凝剂的脐血收集袋中；(2)取血加入含有抗凝剂的离心管中，离心去除红细胞；(3)吸去上清，用加样枪将淡黄色细胞层(中层)小心转移至新的离心管中；(4)加入细胞裂解液，轻轻混匀，置于37℃水浴；(5)加入蛋白酶K，轻轻混匀；(6)置于50℃水浴，不时旋转；(7)将上述混合液冷却至室温，加入等体积水饱和酚，缓慢颠转，温和混匀两相，直至成乳浊液；(8)离心；(9)用水饱和酚抽提一次，再用氯仿抽提一次，收集水相；(10)加入冷的无水乙醇，沉淀DNA；(11)加入缓冲溶液溶解DNA，该缓冲溶液可以是三羟甲基胺基甲烷-乙二胺四乙酸溶液、或去离子水；(12)进行DNA电泳及酶消化试验，检测DNA的浓度和纯度，及其完整性和消化能力，得出分析结果；上述电泳为琼脂糖凝胶电泳，所用酶为限制性内切酶HindIII。
(13)将DNA置于滤膜上，抽真空密封于锡箔袋中，将该锡箔袋放入DNA珍藏盒内；该盒内还放置有微型光盘，其上刻录有脐血DNA的上述分析结果，包括DNA的浓度、纯度、有其完整性和消化能力等信息、基因特征、血型；(14)余下的DNA入库保存；入库之前，应先进行DNA分析进行DNA电泳及酶消化试验，检测DNA的浓度和纯度，及其完整性和消化能力，得出分析结果；将分析数据输入计算机，建立DNA分析结果数据库。
该数据库系统可完成顾客信息的录入、查询、修改，其记录有新生儿的所有出生的数据、图片信息及提取脐血基因过程中的所有操纵数据。每条记录都以序列编号标识，数据库通过条码识别可根据编号、出生时间、父母姓名的数据完成单个或几个字段的复合查询。在将来的升级网络版中将继续完善数据共享，选择打印，扩大记录字段等功能。
脐血DNA是新生儿踏入人生第一步的最真实最科学的记录，并将伴随其一生。在基因工程技术飞速发展的今天，这一DNA最原始记录将作为标志物，在儿童生长发育、疾病诊断、身份识别及健康咨询等诸多方面提供越来越多的帮助。
权利要求
1.脐血DNA的制作及保存方法，它依次包括如下步骤(1)采集脐血，将出生婴儿的脐带血和胎盘血采集到含抗凝剂的脐血收集袋中；(2)取血加入含有抗凝剂的离心管中，离心去除红细胞；(3)吸去上清，用加样枪将中层淡黄色细胞层，小心转移至新的离心管中；(4)加入细胞裂解液，轻轻混匀，置于37℃水浴；(5)加入蛋白酶K，轻轻混匀；(6)置于50℃水浴，不时旋转；(7)将上述混合液冷却至室温，加入等体积水饱和酚，缓慢颠转，温和混匀两相，直至成乳浊液；(8)离心；(9)用水饱和酚抽提一次，再用氯仿抽提一次，收集水相；(10)加入冷的无水乙醇，沉淀DNA；(11)加入缓冲溶液溶解DNA；(12)进行DNA电泳及酶消化试验，检测DNA的浓度和纯度，及其完整性和消化能力、基因特征、血型，得出分析结果；(13)将DNA置于滤膜上，抽真空密封于锡箔袋中，将该锡箔袋放入DNA珍藏盒内；该盒内还放置有微型光盘，其上刻录有脐血DNA的上述分析结果，包括DNA的浓度、纯度、及其完整性和消化能力、基因特征、血型；(14)余下的DNA入库保存。
2.根据权利要求书1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的抗凝剂为乙二胺四乙酸。
3.根据权利要求书1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)中的蛋白酶K终浓度为100ug/ml。
4.根据权利要求书1所述的方法，其特征在于，所述步骤(11)中的缓冲溶液为三羟甲基胺基甲烷-乙二胺四乙酸溶液、或去离子水。
5.根据权利要求书1所述的方法，其特征在于，所述步骤(12)的电泳为琼脂糖凝胶电泳；所用酶为限制性内切酶HindIII。
6.根据权利要求书1所述的方法，其特征在于，所述微型光盘上还刻录有以下内容DNA及分子遗传学的背景资料；婴儿DNA的统一编号；父母或新生儿出生时的照片；婴儿出生时的体重、出生年月日、民族、籍贯。
7.脐血DNA库的建立方法，它包括如下步骤(1)将按权利要求1的方法得到的DNA的分析结果输入计算机；(2)建立DNA分析结果数据库。
8.根据权利要求7所述的脐血DNA库的建立方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述数据库系统可完成顾客信息的录入、查询、修改，其记录有新生儿的所有出生的数据、图片信息及提取脐血基因过程中的所有操纵数据；每条记录都以序列编号标识，数据库通过条码识别可根据编号、出生时间、父母姓名的数据完成单个或几个字段的复合查询，在将来的升级网络版中将继续完善数据共享，选择打印，扩大记录字段等功能。
全文摘要
脐血DNA的制作及保存方法，即取婴儿脐带血和胎盘血，加入含抗凝剂的离心管中，去除红细胞；吸去上清，将中层淡黄色细胞层转移至新的离心管中；加入细胞裂解液混匀，置于37℃水浴；加入蛋白酶K混匀；置于50℃水浴，不时旋转；冷却至室温，加入等体积水饱和酚，缓慢颠转，温和混匀两相，直至成乳浊液；离心；用水饱和酚抽提一次，再用氯仿抽提一次，收集水相；加入冷的无水乙醇，沉淀DNA；加缓冲溶液溶解DNA；进行DNA电泳及酶消化试验，得出分析结果；将DNA置于滤膜上，密封于锡箔袋中，将该袋放入DNA珍藏盒内；余下的DNA入库保存，并建立脐血DNA库。
文档编号G06F17/40GK1614029SQ20031010324
公开日2005年5月11日 申请日期2003年11月3日 优先权日2003年11月3日
发明者李少波, 李宏实, 毛金武, 周见远, 唐贵卿 申请人:李少波, 李宏实, 毛金武, 周见远, 唐贵卿