一种茄子花蕾表面消毒技术的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于组织培养领域，涉及茄子花药培养前对花蕾进行有效消毒，以提高茄子花药培养成功率的技术，适用于不同品种、不同生长时期以及不同生长条件下采摘的茄子花蕾的消毒处理。
【背景技术】
[0002]前子(Solarium melongena L)，别名前、矮瓜、吊菜子、落苏，草本或亚灌木状，果可供蔬食，根、茎、叶、种子皆可入药。茄子原产亚洲热带，我国各省均有栽培。
[0003]近年发展起来的以组织培养和遗传工程为主导的生物技术，为缩短育种年限和选育优质新品种开辟了一条新途径，通过花药和花粉培养可以获得大量纯合的单倍体、双单倍体植株，用于育种实践后，可大大缩短育种进程。70年代初，Riana等成功地通过茄子花药培养经愈伤组织途径成苗，目前不论是茄子花药还是花粉(小孢子)培养，都已有许多成功的报道，但国内利用花药或花粉培养获得的亲本，选育出茄子新品种的报道却并不多。究其原因，主要是茄子花药或花粉培养产生再生植株的频率不高，且再生植株中的单倍体加倍频率不高。事实上，从茄子无菌、且有活力的花药中诱导出愈伤组织或胚状体并不困难，困难在于茄子花药(花蕾)的表面消毒技术。因此，在升汞等传统表面消毒剂禁用的情况下，如何利用对环境友好的酒精和次氯酸钠对茄子花蕾表面进行有效的消毒，是成功进行茄子花药或花粉培养的关键技术。
【发明内容】
[0004]为了更好的解决花药及花粉培养过程中出现的污染问题，本发明提供了一种高效的前子花蕾表面消毒技术。
[0005]本发明提供的技术方案是:
[0006]—种前子花蕾表面消毒技术，包括的步骤如下:
[0007](I)采集花蕾:选取花粉发育时期为单核后期至双核早期的茄子花蕾，装在塑封袋内，将塑封袋放入装有冰块的冰盒中及时带回室内；
[0008](2)花蕾预处理:将花蕾从塑封袋中取出，不经水或其他液体冲洗，直接去除茄子花蕾外包裹的萼裂片；
[0009](3)酒精消毒、次氯酸钠消毒:将整理过的茄子花蕾装入无菌瓶内，依次用酒精消毒、次氯酸钠消毒；
[0010](4)无菌水冲洗、吸干水份备用:用高压灭菌的吸水纸将茄子花药表面吸附的水分吸掉。
[0011]其中，用酒精消毒的时间为1-5分钟，用次氯酸钠消毒时间为10-20分钟。
[0012]优选的，夏秋季高温季节消毒时间为酒精消毒3分钟，次氯酸钠12分钟。
[0013]优选的，冬春温度较低的季节酒精消毒可延长到5分钟，次氯酸钠最长可达20分钟。
[0014]其中，用无菌水冲洗要快速，冲洗过后要立即将花蕾上残存的水分吸干净。
[0015]本发明通过对茄子花蕾的预处理，调节消毒试剂的消毒时间，实现对各种来源茄子花蕾表面的有效消毒。应用本发明，大大降低了茄子花药初代和继代培养时的污染率，提高了花药和花粉培养的效率，培养的花药能在多种培养基上获得胚状体。利用该技术，花药污染率低于20%，甚至可以达到100%不污染。
【附图说明】
[0016]图1:本发明的前子花蕾表面消毒技术的效果图。
【具体实施方式】
[0017]下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。
[0018]1.采集花蕾:茄子植株可生长在温室、大棚或露地，采集生长前期、中期和后期植株上的花蕾，选取花粉发育时期为单核后期至双核早期的茄子花蕾(花瓣距萼裂基部0-2_)，装在塑封袋内(防失水)，将塑封袋放入装有冰块的冰盒中及时带回室内，放入冰箱内冷藏24_48h或直接进行前处理；
[0019]2.花蕾前处理:将花蕾从塑封袋中取出，不经水或其他液体冲洗，直接去除茄子花蕾外包裹的萼裂片，具体操作为沿着萼片裂开的纹路将萼裂片剥去，但不能将萼筒剥除；
[0020]3.花蕾消毒:将整理过的茄子花蕾装入无菌瓶内，在超净工作台或生物安全柜中，用75%的无水乙醇处理l_5min，倒出无水乙醇后加入一滴吐温-80，然后用6.5%的次氯酸钠处理10-20min，期间不停摇晃，最后用无菌水冲洗4_5次；
[0021]4、吸干花蕾表面残留的水分备用:无菌水冲洗结束后，立即用高压灭菌的吸水纸将茄子花药表面吸附的水分吸掉，然后直接从花蕾中剥取花药接种，来不及接种的花药可放在冰箱中冷藏l-2d。
[0022]5.花蕾表面消毒的效果:应用本发明，即使在夏季，从处于生长末期、白粉虱高发的植株上采摘的茄子花蕾，其花药的污染率也不超过20%，比常规方法的对照大大降低了污染率，提高了茄子花药培养的成功率，培养的花药能在多种培养基上获得胚状体，最终获得完整再生植株。
[0023]以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上的限制，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，依据本发明的技术实质，对以上实施例所作的任何简单的修改、等同替换与改进等，均仍属于本发明技术方案的保护范围之内。
【主权项】
1.一种茄子花蕾表面消毒技术，其特征在于:包括的步骤如下: (1)采集花蕾:选取花粉发育时期为单核后期至双核早期的茄子花蕾，装在塑封袋内，将塑封袋放入装有冰块的冰盒中及时带回室内； (2)花蕾预处理:将花蕾从塑封袋中取出，不经水或其他液体冲洗，直接去除茄子花蕾外包裹的萼裂片； (3)酒精消毒、次氯酸钠消毒:将整理过的茄子花蕾装入无菌瓶内，依次用酒精消毒、次氯酸钠消毒； (4)无菌水冲洗、吸干水份备用:用高压灭菌的吸水纸将茄子花药表面吸附的水分吸掉。2.如权利要求1所述的茄子花蕾表面消毒技术，其特征在于:用酒精消毒的时间为1-5分钟，用次氯酸钠消毒时间为10-20分钟。3.如权利要求1所述的茄子花蕾表面消毒技术，其特征在于:夏秋季高温季节消毒时间为酒精消毒3分钟，次氯酸钠12分钟。4.如权利要求1所述的茄子花蕾表面消毒技术，其特征在于:冬春温度较低的季节酒精消毒可延长到5分钟，次氯酸钠最长可达20分钟。5.如权利要求1所述的茄子花蕾表面消毒技术，其特征在于:用无菌水冲洗要快速，冲洗过后要立即将花蕾上残存的水分吸干净。
【专利摘要】本发明公开了一种茄子花蕾表面消毒技术，包括的步骤如下：花蕾采集、花蕾预处理、花蕾表面消毒、吸干花蕾表面残留的水分。采摘不同立地和不同季节生长的植株的花蕾，防失水和低温条件下带回室内,去除花萼裂片后，先用75％酒精消毒1-5min，再用6.5％的次氯酸钠消毒10-20min，无菌水冲洗4-5次，吸干水后剥取花药进行后续试验。本发明通过对茄子花蕾的预处理，调节消毒试剂的消毒时间，实现对各种来源茄子花蕾表面的有效消毒，大大降低了茄子花药初代和继代培养时的污染率，提高了花药和花粉培养的效率，培养的花药能在多种培养基上获得胚状体，利用该技术，花药污染率低于20％，甚至可以达到100％不污染。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105165620
【申请号】
【发明人】崔群香, 杜碧云, 周显忠, 张天雨, 何成荣, 吴飞泽
【申请人】金陵科技学院
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年10月9日