建立奥利亚罗非鱼雄性纯系的方法
【技术领域】
[0001]本项发明属于奥利罗非鱼的种质改良技术。尤其是能够通过亲本选择、催熟，雌核发育，交配选择，回交的方法，建立起奥利亚罗非鱼雄性纯系的一种方法。
【背景技术】
[0002]奥尼杂交罗非鱼(奥利亚罗非鱼父本与尼罗罗非鱼母本交配的后代)是我国主要的罗非鱼养殖品种之一，经过近二三十年养殖，特别是亲本的过度利用，使亲本遗传多样性增加，通过传统的表型性状挑选方法，很难在遗传性状方面得到精确改良，导致制出的奥尼杂交罗非鱼苗的雄性率、抗逆性等性状存在不同程度的差异与分化，品种优良性状存在衰退趋势。
【发明内容】
[0003]为了解决目前奥尼杂交罗非鱼亲本，尤其是父本奥利亚罗非鱼种质优良性状的退化现象，本发明提供一种建立奥利亚罗非鱼雄性纯系的一种方法。
[0004]原理:奥利亚罗非鱼性别决定的染色体类型是Z、W类型，即ZZ表现为雄性，Zff表现为雌性，要获得奥利亚罗非鱼雄性性状优良纯系，必须从现有良种中挑选出亲本进行建立。本方法建立奥利亚罗非鱼雄性纯系的原理是，奥利亚罗非鱼雌鱼产两种类型的卵子，Z型和W型，雌核发育后再经染色体加倍产生两种性别的鱼苗(而X、Y染色体性别决定类型雌核发育后代只产生全雌鱼XX，如尼罗罗非鱼)，即ZZ表现为雄性(纯系)，Wff表现为雌性(非需要的)，经过雌核发育产生的雄性鱼苗ZZ数量一般满足不了生产的大量需求，要进行纯系扩大。具体的是经过纯化的雄鱼ZZ与正常用的雌性奥利亚罗非鱼ZW进行交配，交配产生雄鱼Zz和雌鱼Zw各占50%，鱼养殖至性成熟。其中的雌鱼(Zw，所含Z染色体来自纯化的雄鱼)再与雌核发育的雄鱼(ZZ)进行交配，产生的鱼苗养殖至性成熟，结果产生大量的奥亚利雄鱼(ZZ)个体，即纯系。其中Zw型表现为雌鱼(淘汰不用)。
[0005]一种建立奥利亚罗非鱼优良性状雌性纯系的方法，其特征在于包括以下步骤:
一、亲本选择
6月份繁殖季节，在现有的奥利亚罗非鱼保有的品种中，选择2龄的个体进行繁殖，繁殖在网箱内进行，网箱I立方米大小，每只网箱放养2尾奥利亚罗非鱼雄鱼3尾奥利亚罗非鱼雌鱼，以后每隔一周检查一次雌鱼的产卵情况(卵含在雌鱼口腔内)，产卵量在1500粒以上的雌鱼挑出集中在专池中养殖作为备用亲鱼，1500粒以下雌鱼的弃之不用。在挑选过程中，适当补充雌性亲本，达到所需要的选择数量。
[0006]第二年6月，准备的备用亲鱼和2龄红罗非鱼雄鱼，分别用网箱分隔饲养，每只网箱放养一尾奥利亚罗非鱼雌鱼或红罗非鱼雄鱼，精养15天左右，当发现一些网箱内的鱼不再摄食，红罗非鱼雄鱼色彩亮丽占居网箱一角时，即达到亲本催熟要求。
[0007]二、雌核发育
按照常规雌核发育的方法，对红罗非鱼雄鱼的精子进行灭活，遗传物质失活的精子与奥利亚罗非鱼雌鱼的卵子“受精”，低温诱导卵子染色体加倍成正常的二倍体，然后进行人工孵化，完成雌核发育。
[0008]雌核发育的鱼苗中，有正常的奥利亚罗非鱼苗(为雌核发育的后代，其中Wff (罕)和ZZ U )各占50%)，而红色带黑色斑点的鱼苗为杂交苗(没有失活的精子与卵子正常受精所至)，弃之不用。雌核发育的后代鱼苗养殖成性成熟，其中有雄鱼(ZZ)(占群体中个体数量的50%)即为雌核发育所产生的雄性纯系奥利亚罗非鱼。
[0009]三、交配选择
雌核发育产生的雄性纯系奥利亚罗非鱼ZZ，与正常的雌鱼ZW进行交配，产生雄鱼Zz和雌鱼Zw鱼苗，鱼苗养殖至性成熟，淘汰其中的雄鱼Zz，选择保留其中的雌鱼Zw用于回交。
[0010]四、回交
选择保留的雌鱼Zw与雌核发育所产生的雄性纯系奥利亚罗非鱼ZZ进行回交，生产出的鱼苗养殖到性成熟，其中的雄鱼ZZ的Z染色体均来自雌核发育，即为群体扩大后的奥利亚雄性纯系罗非鱼。
[0011]本发明通过亲本选择、催熟，雌核发育，交配选择，回交的方法，能够建立奥利亚罗非鱼优良的纯系，有效保持奥利亚罗非鱼作为繁殖父本的优良性状。
【具体实施方式】
[0012]—、亲本选择
6月份繁殖季节，在现有的奥利亚罗非鱼保有的品种中，选择2龄的个体进行繁殖，繁殖在网箱内进行，网箱I立方米大小60只，每只网箱放养2尾雄鱼3尾雌，以后每隔一周检查一次雌鱼的产卵情况(卵含在雌鱼口腔内)，产卵量在1500粒以上的雌鱼挑出集中在专池中养殖作为备用亲鱼，1500粒以下雌鱼的弃之不用。在挑选过程中，适当补充雌性亲本，达到所需要的选择数量。I个月后共挑出奥利亚罗非鱼雌300尾。
[0013]第二年6月，准备30尾2龄红罗非鱼雄鱼，从300尾奥利亚罗非鱼中挑选出性腺发育好、个体较大的60尾，红罗非鱼雄鱼和后备用亲鱼奥利亚罗非鱼雌鱼，分别用网箱分隔饲养，每只网箱放养一尾雌鱼或雄鱼，精养15天左右，当发现一些网箱内的鱼不再摄食，雄鱼色彩亮丽占居网箱一角时，即达到亲本催熟要求。
[0014]二、雌核发育
按照常规雌核发育的方法，对红罗非鱼的精子进行灭活，遗传物质失活的精子与奥利亚罗非鱼卵子“受精”(激发卵子发育而不参与遗传物质传递)，低温诱导卵子染色体加倍成正常的二倍体，然后进行人工孵化，完成雌核发育。共获得雌核发育鱼苗2800尾，
经过3个月的养殖，雌核发育的鱼苗中，有正常的奥利亚罗非鱼苗(为雌核发育的后代)，而红色带黑色斑点的鱼苗为杂交苗(没有失活的精子与卵子正常受精所至)，弃之不用。去除畸形和生长缓慢的个体，共获得雌核发育鱼200余尾。保留其中有100余尾雄鱼(ZZ)，挑去雌鱼(WW)。
[0015]三、交配选择
雌核发育产生的雄性纯系奥利亚罗非鱼(ZZ) 100尾中，挑选性腺发育良好共计30尾，与正常的雌鱼(Zw) 100尾进行交配，共获鱼苗60000尾(40%的雌鱼产卵，每尾平均产1500尾左右)鱼苗养殖至性成熟，淘汰其中的雄鱼(Zz)，选择保留其中的雌鱼30000尾，养成后得到雌鱼(Zw)1000余尾用于回交。根据生产规模选择保留雌鱼。(按40%雌鱼产卵，每尾产1500尾鱼苗，10000雌鱼可产600万尾苗，其中300万尾为雄性奥利亚罗非鱼)
四、回交
选择保留的雌鱼(Zw) 10000尾中挑选400尾，与雌核发育所产生的雄性纯系(ZZ) 100尾进行回交，生产出的240000尾鱼苗养殖到性成熟，其中的120000尾雄鱼(ZZ)的Z染色体均来自雌核发育，即为群体扩大后的奥利亚雄性纯系罗非鱼。
【主权项】
1.建立奥利亚罗非鱼雄性纯系的方法，其特征在于包括下述步骤: (1)亲本选择: 6月份繁殖季节，在现有的奥利亚罗非鱼保有的品种中，选择2龄的个体进行繁殖，每隔一周检查一次奥利亚罗非鱼雌鱼的产卵情况，挑出产卵量在1500粒以上的雌鱼作为备用亲鱼； 第二年6月，将备用亲鱼和2龄红罗非鱼雄鱼，分隔饲养，精养12-18天，达到亲本催熟要求； (2)雌核发育: 按照常规雌核发育的方法，对红罗非鱼雄鱼的精子进行灭活，遗传物质失活的精子与奥利亚罗非鱼备用亲鱼的卵子“受精”，低温诱导卵子染色体加倍成正常的二倍体，然后进行人工孵化，完成雌核发育； 雌核发育的鱼苗中，剔除没有失活的精子与奥利亚罗非鱼备用亲鱼的卵子正常受精的杂交苗，雌核发育的后代鱼苗养殖成性成熟，其中雄鱼即为雌核发育所产生的雄性纯系奥利亚罗非鱼(ZZ)； (3)交配选择: 雌核发育产生的雄性纯系奥利亚罗非鱼(ZZ)，与正常的奥利亚罗非鱼雌鱼(zw)进行交配，鱼苗养殖至性成熟，淘汰其中的雄鱼(Zz)，选择保留其中的雌鱼(Zw)用于回交； (4)回交: 选择保留的雌鱼(Zw)与雌核发育所产生的雄性纯系奥利亚罗非鱼(ZZ)进行回交， 生产出的鱼苗养殖到性成熟，其中的雄鱼(ZZ)的Z染色体均来自雌核发育，即为群体扩大后的奥利亚雄性纯系罗非鱼。2.根据权利要求1所述的建立奥利亚罗非鱼雄性纯系的方法，其特征在于:所述步骤Cl)中繁殖过程在网箱内进行，网箱I立方米大小，每只网箱放养2尾雄鱼3尾雌鱼。3.根据权利要求1所述的建立奥利亚罗非鱼雄性纯系的方法，其特征在于:所述步骤Cl)中备用亲鱼的挑选过程中，定期补充奥利亚罗非鱼雌鱼。4.根据权利要求1所述的建立奥利亚罗非鱼雄性纯系的方法，其特征在于:所述步骤(O中分隔饲养采用网箱分隔饲养，每只网箱放养一尾备用亲鱼或2龄红罗非鱼雄鱼。5.根据权利要求4所述的建立奥利亚罗非鱼雄性纯系的方法，其特征在于:当网箱内的鱼不再摄食，红罗非鱼雄鱼色彩亮丽占居网箱一角时，即达到亲本催熟要求。6.根据权利要求1所述的建立奥利亚罗非鱼雄性纯系的方法，其特征在于:所述步骤(2)中雌核发育所产生的雄性纯系奥利亚罗非鱼(ZZ)占雌核发育的鱼苗的50%。
【专利摘要】本发明公布了一种建立奥利亚罗非鱼雄性纯系的方法，经过纯化的雄鱼ZZ与正常用的雌性奥利亚罗非鱼zw进行交配，交配产生雄鱼Zz和雌鱼Zw各占50%，鱼养殖至性成熟。其中的雌鱼Zw，所含Z染色体来自纯化的雄鱼再与雌核发育的雄鱼ZZ进行交配，产生的鱼苗养殖至性成熟，结果产生大量的纯系奥亚利雄鱼ZZ个体。本发明通过亲本选择、催熟，雌核发育，交配选择，回交的方法，能够建立奥利亚罗非鱼优良的纯系，有效保持奥利亚罗非鱼作为繁殖父本的优良性状。
【IPC分类】A01K61/00
【公开号】CN105165684
【申请号】
【发明人】徐跑, 何杰, 强俊
【申请人】中国水产科学研究院淡水渔业研究中心
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月30日