Zoarenone在制备治疗肾综合征出血热药物中的应用
【技术领域】
[0001 ]本发明设及化合物Zoarenone的新用途，尤其设及Zoarenone在制备治疗肾综合征 出血热药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 世界上人类病毒性出血热共有13种，根据该病肾脏有无损害，分为有肾损及无肾 损两大类，在我国主要为肾综合征出血热化FRS)，又称流行性出血热化HF);在朝鲜称朝鲜 出血热化HF);在苏联称出血性肾病肾炎化NN);由于特异性血清学诊断的确立及病原学的 解决，1982年世界卫生组织统一定名为肾综合征出血热。
[0003] 本病是由朝鲜出血热病毒(或称汉坦病毒）引起，W鼠类为主要传染源的自然疫源 性疾病;可通过呼吸道、消化道、接触传播、母婴传播和虫媒传播；W发热、出血倾向及肾脏 损害为主要临床特征的急性病毒性传染病，典型的出血热一般有发热、低血压、少尿、多尿 及恢复五期经过，如处理不当病死率很高;HFRS病毒的传播几乎遍及世界各大洲。在我国已 有半个世纪的流行时，八十年代中期W来，我国本病年发病数逾已10万，已成为除病毒性肝 炎外，危害最大的一种病毒性疾病。
[0004] 研究表明，肾综合征出血热的致病机理主要有：（1)早期发病可能是由于病毒直接 作用结果，与感染病毒株的型别、毒力、数量W及病毒结构蛋白不同有关。本病毒为单链、负 性RNA型，分大化）、中(M)、小(S)S不同片段属布尼亚病毒科的一个新属，称为汉坦病毒属， 病毒蛋白有四个结构蛋白组成，即G1、G2为包膜糖蛋白，NP为核蛋白，L蛋白可能为多聚酶。 G1、G2蛋白上存在中和抗原和血凝素抗原，并能诱导中和抗体；（2)由病毒启动的免疫损伤。 病毒在机体内大量复制，同时刺激免疫系统产生抗体，并能激活补体系统产生组胺等活性 物质使血管扩张，血浆外渗进而形成免疫复合物在血管、肾小球基底膜、血小板等表面沉 积，形成变态反应；（3)微循环障碍。目前对肾综合征出血热主要采用综合性治疗，特别应早 期抓好抗病毒治疗及液体疗法，对重症患者要及时抓紧抗休克、预防出血及肾功能衰竭的 治疗，早期积极地抗病毒治疗，对减轻病毒损伤、阻断病情进展具有重要作用。迄今尚缺乏 可治愈肾综合征出血热的特异药物。临床上多采用病毒挫、干扰素等抗病毒治疗，效果尚不 能肯定。因此，在临床实践中，发展了多种对肾综合征出血热有一定疗效的重要或中西药复 方制剂，临床应用表明，运些药物对缓解症状，减少西药用量，或在一定时期作为主要治疗 药物等均有一定的积极作用。
[000引 本发明设及的化合物Zoarenone是一个2014年发表(Francisco Cen-化checo，et al.，Zoaramine，a Zoanthamine - like Alkaloid with a New Skeleton . Organic Letters，2014，16，2880-2883.)的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅 仅涉及、冶疗骨质疏松（Francisco Cen-Pacheco，et al.，Zoaramine，a Zoanthamine-like Mkaloid with a New Skeleton.Organic Letters，2014,16,2880-2883·)，对于本发明涉 及的Zoarenone在制备治疗肾综合征出血热药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的 结构类型，而且其对于治疗肾综合征出血热活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出 任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于肾综合征出血热的防治显然具有显著 的进步。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于根据现有Zoarenone研究中未发现其具有治疗肾综合征出血热 活性的报道的现状，提供了 Zoarenone在制备治疗肾综合征出血热药物中的应用。
[0007] 所述化合物Zoarenone结构如式（I)所示：
[000引
式（[)
[0009] 本发明设及的Zoarenone在制备治疗肾综合征出血热药物中的用途属于首次公 开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于治疗肾综合征出血热活性强得意想不 到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于治疗肾综 合征出血热显然具有显著的进步。
【具体实施方式】
[0010] 本发明所设及化合物Zoarenone的制备方法参见文献(FranciSCO Cen-F*acheco， et al.，Zoaramine，a Zoanthamine-1ike Alkaloid with a New Skeleton . Organic Letters，2014，16，2880-2883·)
[0011] W下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加 W限定。
[0012] 实施例1:本发明所设及化合物Zoarenone片剂的制备：
[001引取20克化合物Zoarenone加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成 1000 片。
[0014] 实施例2:本发明所设及化合物Zoarenone胶囊剂的制备：
[0015] 取20克化合物Zoarenone加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊 制成1000粒。
[0016] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0017] Zoarenone抗肾综合征出血热病毒的实验研究
[0018] ( - )对肾综合征出血热病毒体外抑制实验
[0019] 1 材料
[0020] (1)病毒株:国际标准肾综合征出血热病毒76-118株，由中国预防医学科学院研究 所保存。实验用每毫升含100个病毒感染性滴度的病毒(l〇〇TCID50/ml)。
[0021 ] (2)细胞:非洲绿猴肾Vero传代的E6克隆系，139~141代。其中含3%小牛血清维持 液。
[0022] (3)药物:Zoarenone，各稀释度均用维持液配制。实验过程中设立空白对照。
[0023] 2 方法
[0024] (1)药物对Vero E6细胞的毒性作用。将已长成单层的Vero E6细胞分别W Zoarenone 在 0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、7.5、10.0ug/ml 的药物浓度处理培养 2 周后， 观察细胞形态。
[00巧](2)药物对肾综合征出血热病毒侵入细胞的阻断作用。W0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、 5.Oug/ml的药物浓度预处理细胞12小时后，再W肾综合征出血热病毒攻击，培养2周后用免 疫巧光法检查。
[0026] (3)对肾综合征出血热病毒的直接杀灭作用。^0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、7.加邑/1111 的药物浓度和100TCID50/0.1ml的病毒等量混合，作用不同时间后，再将其感染细胞，用免 疫巧光法检查。
[0027] (4)对肾综合征出血热病毒的增殖抑制作用。病毒感染细胞24小时后，W不同的药 物浓度加入细胞培养基，培养2周后用免疫巧光法检查。
[002引3观察指标
[0029] W免疫巧光法检测细胞内病毒抗原，如果感染细胞未见巧光阳性，表示病毒已被 杀灭或抑制，同时计算抗病毒指数。
[0030] 4 结果
[0031] (1) 10.0 ug/ml的药物浓度组培养5天后细胞颗粒增多，折光性差，细胞形态明显改 变，部分细胞脱落，其余各浓度未见药物对Vero E6细胞的毒性作用。
[0032] (2)各浓度在不同时间预先处理的实验组细胞与未用药处理的对照组细胞均出现 特异性巧光，病毒感染性滴度为105/0.1ml，抗病毒指数1。表明Zoarenone不能阻断病毒侵 入细胞。
[0033] (3)3. Oug/ml药物浓度的Zoarenone对病毒有直接的灭杀作用，此浓度W上各组， 其感染滴度和对照组比均有显著差异(P<〇.05)，药物浓度增加，抗病毒作用增强(见表1)。
[0034] (4)0.加 g/ml药物浓度的Zoarenone对病毒增殖有抑制作用，此浓度W上各组，其 感染滴度和对照组比均有显著差异(P<〇.05)，药物浓度增加，抗病毒作用增强(见表2)。 [00巧]表1 Zoarenone对肾综合征出血热病毒的直接杀灭作用(X±s)
[0036]
[0037] 与对照组比较，*p<0.05。
[003引表2 Zoarenone对肾综合征出血热病毒增殖的抑制作用(X±s)
[0039]
[0041 ] 与对照组比较，*p<0.05。
[0042]总结：Zoarenone对细胞的毒性作用低;对肾综合征出血热病毒有直接杀灭作用； 对肾综合征出血热病毒的增殖有明显抑制作用，药物浓度增加，抗病毒效力增加。
【主权项】
1 .Zoarenone在治疗肾综合征出血热药物中的应用，所述化合物Zoarenone结构如式 (I)所示：
【专利摘要】本发明公开了Zoarenone在制备治疗肾综合征出血热药物中的新用途。Zoarenone在对肾综合征出血热病毒体外、体内抑制实验研究显示，Zoarenone对细胞的毒性作用低、对肾综合征出血热病毒有直接杀灭作用并能明显抑制该病毒的增值；对感染该病毒的地鼠有明显保护作用，使其发病时间推迟、病程延长、死亡率降低。因此Zoarenone是治疗肾综合征出血热有效、安全的药物。
【IPC分类】A61K31/56, A61P31/14, A61P13/12
【公开号】CN105596351
【申请号】CN201510756937
【发明人】田丽华
【申请人】淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2015年11月10日