具有高荧光寿命的荧光指示剂的制作方法
【技术领域】
[000? ]本发明涉及一种焚光指不剂，特别涉及一种具有尚焚光寿命的焚光指不剂。
【背景技术】
[0002] 荧光指示剂是指能够受激照射产生荧光的一类物质，在现有技术中虽然能够产生 焚光的物质较多，但普通的焚光指不剂受配体和中心金属的限制，其焚光寿命较短，一般在 纳秒级别（lns = l(T12345678S)，并且，由于配体所带基团的影响，使得其在溶解度和对抗体的可修 饰范围上受到了极大地限制。
【发明内容】
[0003] 针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种稀土配位物荧光指示剂， 该指示剂能够对氨基酸、多肽、蛋白质、生物素、亲和素、核酸等分子进行标记，通过激光激 发荧光指示剂，检测发射出的荧光强度，可以定量检测待测物质的浓度。
[0004] 为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：
[0005] -种荧光指示剂，其至少包含有以下化合物：
[0006]
其中，仏为-COOH 或-C0NH (CH2) nNH2 或-C0NH (CH2) nNHC0 (CH2) mCOON (COCH2CH2CO)或-C0NH( CH2 )nNHC0Ph-p-NCS ； 2 R2选自H原子、羧酸酯、羧酸或卤素原子中的一种； 3 R3选自Η原子、羧酸酯、羧酸或卤素原子中的一种； 4 R4选自Η原子、羧酸酯、羧酸或卤素原子中的一种； 5 Rs选自Η原子、羧酸酯、羧酸或卤素原子中的一种； 6 R6选自Η原子、羧酸酯、羧酸或卤素原子中的一种。 7
[0013] R2~R6基团的作用主要是调节该化合物的在不同溶剂中的溶解度和荧光发光效 率;心的作用是：1)延长受激后发出的荧光的寿命，使其能够达到微秒级；2)增加荧光指示 剂与抗体(或蛋白）的键合便利性，以提高荧光指示剂的可修饰性，同时降低荧光指示剂对 抗体(或蛋白）生物活性的影响;3)调节荧光指示剂在生物试剂中的溶解度。 8
[0014]优选的是，所述的荧光指示剂，其中，η为正整数。
[0016] 优选的是，所述的荧光指示剂，其中，所述羧酸酯为-C00CH3。
[0017] 优选的是，所述的荧光指示剂，其中，所述羧酸为-C00H。
[0018] 本发明的有益效果是:本案所设计的荧光指示剂可被紫外光所激发，产生的荧光 强度高，stokes位移大，可高达280nm;同时该指示剂具有时间分辨特性，激发后能长时间发 出荧光，达到微秒级，可以利用此特性来消除待测样本的生物背景荧光(生物背景荧光激发 后维持时间短，在纳秒级）。
【附图说明】
[0019]图1为实施例1的HPLC检测结果图。
[0020]图2为实施例2的质谱图。
[0021]图3为荧光指示剂的发射光谱和激发光谱图。
[0022] 图4为荧光指示剂的荧光寿命测试图。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文 字能够据以实施。
[0024] 实施例1
[0025] -种荧光指示剂，其至少包含有以下化合物：
[0026]
[0027]它的合成方法如下：
[0028]
[0029] 该化合物的HPLC图见图1。
[0030] 实施例2
[0031] -种荧光指示剂，其至少包含有以下化合物： 1
[0033] 匕乂刀Γ :=
[0034]
[0035] 该化合物的质谱图见图2。
[0036] 实施例3
[0037] -种荧光指示剂，其至少包含有以下化合物：
[0038]
[0039] 它的合成方法如下：（以n = 2，m = 6为例）
[0040]
[0041 ] 注:DSS为双琥珀酰亚胺辛二酸酯。
[0042] 实施例4
[0043] -种荧光指示剂，其至少包含有以下化合物： 八r\
[0044] ilUUL· L,UUil
[0045] 它的合成方法如下：（以n = 2为例）
[0π/ια1
1234 实施例5 2 抗体标记 3 将实施例3或4中的荧光指示剂加入到抗体溶液中，pH约8.0，室温震荡1小时，使用 分离柱进行分离，即可得到已标记的抗体，采用荧光分光光度计测试，可以检测到很强的荧 光。 4 实施例6 [0051 ] 生物素标记
[0052] 将EDC( 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺） 加入到生物素溶液中活化15分钟，然后加入实施例2中的荧光指示剂，震荡1小时，使用分离 柱进行分离，即可得到标记的生物素。采用荧光分光光度计测试，可以检测到很强的荧光。 [0053]图3为实施例1-4任一化合物的荧光发射光谱和激发光谱图，发射光谱在340nm激 发，激发光谱在620nm检测，测试环境为pH=7.0磷酸缓冲液。
[0054]图4为激发实施例1-4中任一化合物所得到的荧光寿命测试图，在340nm激发，在 620nm检测。普通荧光染料的寿命是纳秒级别，而从图4中可以看出，本案的荧光染料寿命是 微秒级别的。
[0055]尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地 实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的图例。
【主权项】
1. 一种荧光指示剂，其至少包含有以下化合物：其中，Ri 为-COOH 或-CONH( CH2) nNH2 或-CONH( CH2) nNHCO (CH2 )m⑶ 0N( COCH2CH2CO)或-CONH (CH2)nNHCOPh-p-NCS； R2选自H原子、羧酸酯、羧酸或卤素原子中的一种； R3选自Η原子、羧酸酯、羧酸或卤素原子中的一种； R4选自Η原子、羧酸酯、羧酸或卤素原子中的一种； Rs选自Η原子、羧酸酯、羧酸或卤素原子中的一种； R6选自Η原子、羧酸酯、羧酸或卤素原子中的一种。2. 如权利要求1所述的荧光指示剂，其特征在于，η为正整数。3. 如权利要求1所述的荧光指示剂，其特征在于，m为正整数。4. 如权利要求1所述的荧光指示剂，其特征在于，所述羧酸酯为-C00CH3。5. 如权利要求1所述的荧光指示剂，其特征在于，所述羧酸为-C00H。
【专利摘要】本案涉及一种具有高荧光寿命的荧光指示剂，该荧光指示剂以铕为中心金属，以氨基桥联的联吡啶作为辅助配体。本案所设计的荧光指示剂可被紫外光所激发，产生的荧光强度高，stokes位移大，可高达280nm；同时该指示剂具有时间分辨特性，激发后能长时间发出荧光，达到微秒级，可以利用此特性来消除待测样本的生物背景荧光。
【IPC分类】G01N21/64, C09K11/06, C07D487/22
【公开号】CN105602549
【申请号】CN201510981005
【发明人】白鹏利, 殷建, 尹焕才, 陈名利, 胡军
【申请人】中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2015年12月24日