一种液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法_2

文档序号:9838580阅读:来源:国知局
过热水法浸提(沸水提取1-4小时)或高压灭菌法浸提(115°C提取30min)获得。
[0023]2.种子液的制备:将步骤I中菌种活化后的培养基以6 %接种量接种于种子培养基中进行培养获得种子液,初始PH7.0,培养温度为28 0C,摇床转速180rpm,培养时间36h;
所述种子培养基组成为:浒苔多糖0.5-2.0%、磷酸氢二钾0.05-0.5%、硫酸钾0.2-2.0%、硝酸钾0.05-0.6%、硫酸镁0.02-0.1%,其余成分为水。
[0024]种子培养基根据发酵规模的大小具体可分为一级种子培养基和二级种子培养基。
[0025]3.液体深层快速发酵:将步骤2中所述种子液以8%接种量接种于生物反应器的发酵培养基中进行浒苔生物肥的发酵制备,装液量为生物反应器体积的50%,pH6.8,培养温度26 0C,搅拌桨转速200rpm,通气量1.5vvm,溶解氧60%,培养时间24h;
所述发酵培养基组成为:粒径为40-200目的固体浒苔粉1.0-8.0%,有机氮源0.01-0.05%,磷酸氢二钾 0.05-0.5%、硫酸钾 0.2-2.0%、硝酸钾 0.05-0.6%、硫酸镁 0.02-0.1%,其余成分为水。
[0026]本发明中液体深层快速发酵为分批发酵,补料分批发酵以及连续发酵方法中的一种或多种。生物反应器为中试、工业化规模发酵罐及其相关微生物发酵工程设备。
[0027]4.浒苔生物肥的制备:将步骤3中的发酵液通过板框过滤结合低速离心的方法实现固液分离,将液体部分收集并通过大量元素、微量元素及相关营养物质的复配制备浒苔生物肥。
[0028]实施例2
1.菌种活化:将所述交替单胞菌A321菌株接种于活化培养基(配方同实施例1)中进行活化培养,培养基装液量25mL/100mL,初始pH7.0,培养温度32 °C,摇床转速160rpm,培养时间 48h;
2.种子液的制备:将步骤I中菌种活化后的培养基以8%接种量接种于种子培养基(配方同实施例1)中进行培养,初始PH6.8,培养温度为28 0C,摇床转速160rpm,培养时间36h;
3.液体深层快速发酵:将步骤2中种子液以10%接种量接种于生物反应器的发酵培养基(配方同实施例1)中进行浒苔生物肥的发酵制备,装液量为生物反应器体积的60%,pH7.2,培养温度24°C,搅拌桨转速200rpm,通气量1.0vvm,溶解氧50%,培养时间20h;
4.浒苔生物肥的制备:将步骤3中的发酵液通过板框过滤结合低速离心的方法实现固液分离,将液体部分收集并通过大量元素、微量元素及相关营养物质的复配制备浒苔生物肥。
[0029]以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其进行限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的普通技术人员来说,依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
【主权项】
1.一种液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法,其特征在于所述方法包括以下具体步骤: (1)菌种活化:将菌株接种于活化培养基中进行活化培养,初始PH6.8-7.2,培养温度30-32 0C,摇床转速160-200rpm,培养时间 36_48h ; (2)种子液的制备:将步骤(I)中菌种活化后的培养基以5-8%接种量接种于种子培养基中进行培养获得种子液,初始PH6.5-7.2,培养温度为28-30 °C,摇床转速160_200rpm,培养时间 30-36h; (3)液体深层快速发酵:将步骤(2)中所述种子液以8-10%接种量接种于生物反应器的发酵培养基中进行浒苔生物肥的发酵制备得到发酵液,装液量为生物反应器体积的50-70%,pH6.8-7.5,培养温度24-28 °C,搅拌桨转速200_600rpm,通气量0.5-2.5vvm,溶解氧30-70%,培养时间18-24h; (4)浒苔生物肥的制备:将步骤(3)中的发酵液进行固液分离,将液体部分收集并通过大量元素、微量元素及营养物质的复配制得所述浒苔生物肥。2.根据权利要求1所述的液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法,其特征在于:所述菌株为保藏编号为CCTCC NO:M2012132的交替单胞菌A321。3.根据权利要求2所述的液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法,其特征在于:所述活化培养基组成为:以质量百分比计,浒苔多糖0.5-2.0%、磷酸氢二钾0.05-0.5%、硫酸钾0.2-2.0%、硝酸钾0.05-0.6%、硫酸镁0.02-0.1%,余量为水。4.根据权利要求2所述的液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法,其特征在于:所述种子培养基组成为:以质量百分比计,浒苔多糖0.5-2.0%、磷酸氢二钾0.05-0.5%、硫酸钾0.2-2.0%、硝酸钾0.05-0.6%、硫酸镁0.02-0.1%,余量为水。5.根据权利要求2所述的液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法,其特征在于:所述发酵培养基组成为:以质量百分比计,粒径为40-200目的固体浒苔粉1.0-8.0%,有机氮源0.01-0.05%,磷酸氢二钾 0.05-0.5%、硫酸钾 0.2-2.0%、硝酸钾 0.05-0.6%、硫酸镁 0.02-0.1%,余量为水。6.根据权利要求3或4所述的液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法,其特征在于:所述浒苔多糖通过热水法浸提或高压灭菌法浸提获得。7.根据权利要求1所述的液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法,其特征在于:所述步骤(I)中活化培养基的装液量为25mL/100mL。8.根据权利要求5所述的液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法,其特征在于:所述有机氮源为牛肉膏、酵母膏和蛋白胨中的一种或多种。9.根据权利要求1所述的液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法,其特征在于:所述步骤(3)中发酵液中的可溶性多糖含量为0.2-1.2%,还原糖含量为0.02-0.3%,蛋白含量为0.1-0.6%,有机质含量为0.5-3.0%,固形物含量为1.0-5.0%,以质量百分比计。10.根据权利要求1所述的液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法,其特征在于:所述步骤(4)中发酵液通过板框过滤结合低速离心的方法实现固液分离。
【专利摘要】本发明公开了一种液体深层快速发酵制备浒苔生物肥的方法。该方法步骤主要包括菌种活化、种子液的培养、液体深层快速发酵和浒苔生物肥的制备四部分。在发酵制备方面运用液体深层发酵技术结合生物反应器等专业发酵设备,实现了发酵过程的实时监控,在有效调控菌体代谢过程的同时提高了目的产物的产量。本发明的发酵制备方法可直接将固体浒苔粉作为主要原料进行发酵,在显著缩短发酵周期的同时,降低了生产成本,符合产业化生产的需求。CCTCC NO :M201213220120423
【IPC分类】C05F11/08, C12P1/04, C12R1/01
【公开号】CN105602995
【申请号】CN201610038944
【发明人】王鹏, 江晓路, 乔乐克
【申请人】青岛海洋生物医药研究院股份有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年1月21日
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