一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法。
【背景技术】
[0002]脂质体系指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的超微型球状载体制剂，亦称类脂小球或液晶微囊，结构为一层或多层同心脂质双分子层。脂质体结构具有适合体内降解、无毒性和无免疫原性等特点，可以控制包埋药物在体内稳定缓慢释放。脂质体作为药物载体应用十分广泛。而纳米脂质体是人们设计的较为理想的脂质体药物载体。纳米脂质体作为药物载体，具有生物相容性好、对所载药物有广泛的重应性无毒，生物利用度高，不弓丨起免疫反应以及达到寻靶目的等优点。
[0003]杨梅花色苷(Anthocyanin)是一类广泛存在于植物的花、果实和叶中的水溶性天然色素，其化学结构是花青素与糖类物质通过糖苷键结合而成。同时杨梅花色苷作为一种天然食用色素，具有安全、无毒、资源丰富等优点，且具有抗癌、抗炎、抗氧化、抗血栓、预防糖尿病、促进视红细胞再生、减轻视觉疲劳、减轻肝功能障碍等多种生理活性。目前，杨梅花色苷类产品在实际应用中有如下的缺点:对光、氧化敏感，在体内释放较快、光照等恶劣条件下极易被氧化，在非保护状态下生物利用率不高等。针对以上杨梅花色苷在实际应用中的问题，有必要将杨梅花色苷进行包封并制成杨梅花色苷脂质体，以保护其不被外界因素所氧化，提高杨梅花色苷的稳定性和生物利用度，有利于储存，可广泛应用于食品、化妆品、保健品和药品中。
【发明内容】
[0004]针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法的技术方案。
[0005]所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤:
I)将大豆卵磷脂与胆固醇按质量比3-5:1的比例溶解在有机溶剂中得溶液A，其中，固液比(mg/ml)为4-9:1 ；
2)将杨梅花色苷溶解在溶剂中制成杨梅花色苷原液，其中，固液比(mg/ml)为1:10;
3)将杨梅花色苷原液用PH=7.4的磷酸盐缓冲液溶解稀释，得溶液B，其中，固液比(mg/ml)为1:100-120;
4)将A、B液按体积比1-2:1混合，先经磁力搅拌及水浴超声仪超声处理，再经磁力搅拌处理，使混合液变成澄清的单相，然后将混合液置于旋转蒸发仪中减压蒸发直至形成一层脂质薄膜；
5)向脂质薄膜中加入磷酸盐缓冲溶液，溶解脂质薄膜，得溶液C;
6)将溶液C过滤膜，超声，放4°C冰箱中保存，即得包封杨梅花色苷的脂质体。
[0006]所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤I)中有机溶剂为乙醚与三氯甲烷的混合溶剂，所述乙醚与三氯甲烷的体积比为1-2:1。
[0007]所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤I)中胆固醇为蛋白胆固醇、血清胆固醇、蛋黄胆固醇或胆囊胆固醇中的任一种。
[0008]所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤2)中溶剂为无水乙醇、无水乙醚和氯仿中的至少一种。
[0009]所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤3)中磷酸盐缓冲溶液由0.2mol/L的Na2HPO4溶液与0.2mol/L的NaH2PO4溶液按体积比0.1-0.3:1混合得到。
[0010]所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤4)中先经磁力搅拌时间为40-50分钟，水浴超声仪在功率10Hz的条件下，超声5-8分钟，再经磁力搅拌时间为3-8分钟，转速30-40r/min。
[0011]所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤4)中减压蒸发真空度为0.06-0.1Mpa0
[0012]所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤6)中滤膜孔径为450nm和220nm，超声时间为5-10分钟。
[0013]通过采用逆向蒸发法制备杨梅花色苷脂质体，并采用水浴超声仪进行超声处理，直至为稳定的体系，该方法可显著提高杨梅花色苷脂质体的稳定性，有效保护杨梅花色苷不被恶劣的条件所氧化，提高杨梅花色苷的稳定性。通过调整确定了脂质成分及缓冲液的比例，经过磁力搅拌、超声及旋转蒸发等工艺步骤，可有效的控制脂质体的粒径，提高包封率;本发明杨梅花色苷脂质体开拓了脂质体的应用范围，运用脂质体作为载体包埋杨梅花色苷，其制备工艺简单，设备要求较低，便于推广应用，可产业化生产。
【附图说明】
[0014]图1为纳米脂质体粒径分布图。
【具体实施方式】
[0015]以下结合实施例来进一步说明本发明。
[0016]实施例1
将I 1mg大豆卵磷脂和36mg胆固醇(蛋白胆固醇、血清胆固醇、蛋黄胆固醇或胆囊胆固醇中的任一种)溶于含有I Oml三氯甲烷和8ml乙醚的混合溶液中得A液，将5mg杨梅花色苷溶于50ml乙醇制备成原液，取Iml原液用磷酸盐缓冲液稀释至1ml制成样液，取9ml样液作为B液，将A液和B液按体积比1:1混合，先磁力搅拌40min，然后在水浴超声仪频率为10Hz的条件下超声I Omin，再磁力搅拌5min，使混合液变成澄清的单相;在40°C的水浴，0.08Mpa的真空压下，转速30r/min下将混合溶液旋转蒸发直至形成一层脂质薄膜；向脂质薄膜中加入30ml磷酸盐缓冲溶液，溶解脂质薄膜，得溶液C;将溶液C分别过450nm，220nm滤膜，滤液超声5min，置于4°C冰箱保存，即得包封杨梅花色苷的脂质体。
[0017]磷酸盐缓冲液的配置:
0.2mol/L的Na2HPO4溶液:称取磷酸氢二钠71.64g，加蒸馏水溶解并定容到100ml。
[0018]0.2mo I/L的NaH2PO4溶液:称取磷酸二氢钠31.21g，加蒸馏水溶解并定容到100ml。
[0019]将上述两溶液分别装在棕色瓶内，于4°C冰箱中保存，用时两溶液各按不同比例混合，即可得到所需pH的缓冲液。
[0020]将0.2mol/L的Na2HPO4溶液、0.2mol/L的NaH2PO4溶液按0.1-0.3:1体积混合，即得至IJpH为7.4的磷酸盐缓冲液。
[0021]实施例2
将10mg大豆卵磷脂和25mg胆固醇溶于含有1ml三氯甲烷和8ml乙醚的混合溶液中得A液，将5mg杨梅花色苷溶于50ml乙醇制备成原液，取Iml原液用磷酸盐缓冲液稀释至1ml制成样液，取9ml样液作为B液，将A液和B液按体积比2:1混合，先磁力搅拌50min，然后在水浴超声仪频率为10Hz的条件下超声1min，再磁力搅拌8min，使混合液变成澄清的单相;在40°〇的水浴，0.08Mpa的真空压下，转速30r/min下将混合溶液旋转蒸发直至形成一层脂质薄膜；向脂质薄膜中加入30ml磷酸盐缓冲溶液，溶解脂质薄膜，得溶液C;将溶液C过过450nm，220nm滤膜，滤液超声5min，置于4°C冰箱保存，即得包封杨梅花色苷的脂质体。
[0022]磷酸盐缓冲液的配置同实例I。
[0023]实施例3
将60mg大豆卵磷脂和20mg胆固醇溶于含有1ml三氯甲烷和8ml乙醚的混合溶液中得A液，将5mg杨梅花色苷溶于50ml乙醚制备成原液，取Iml原液用磷酸盐缓冲液稀释至1ml制成样液，取9ml样液作为B液，将A液和B液按体积比I: I混合，先磁力搅拌40min，然后在水浴超声仪频率为10Hz的条件下超声1min，再磁力搅拌5min，使混合液变成澄清的单相;在40°〇的水浴，0.08Mpa的真空压下，转速40r/min下将混合溶液旋转蒸发直至形成一层脂质薄膜；向脂质薄膜中加入30ml磷酸盐缓冲溶液，溶解脂质薄膜，得溶液C;将溶液C过450nm，220nm滤膜，滤液超声lOmin，置于4°C冰箱保存，即得包封杨梅花色苷的脂质体。
[0024]磷酸盐缓冲液的配置同实例I。
[0025]实施例4
对实施例1得到的包封杨梅花色苷的脂质体进行检测，其包封率为58.3%。
[0026]物理稳定性:
制作完成的脂质体分别在每隔一天测定粒径及分布系数，研究其物理稳定性，得出结果:
1.粒径变化范围(如图1所示):l-30nm
2.分布系数变化范围:0.04-0.1
表明粒径变化不大，分布系数变化幅度较小，显示所制作的纳米脂质体发生聚沉的效果不明显，经长期储藏后仍可保持其纳米性能。
【主权项】
1.一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤: I)将大豆卵磷脂与胆固醇按质量比3-5:1的比例溶解在有机溶剂中得溶液A，其中，固液比(mg/ml)为4-9:1 ； 2)将杨梅花色苷溶解在溶剂中制成杨梅花色苷原液，其中，固液比(mg/ml)为1:10； 3)将杨梅花色苷原液用PH=7.4的磷酸盐缓冲液溶解稀释，得溶液B，其中，固液比(mg/ml)为1:100-120; 4)将A、B液按体积比1-2:1混合，先经磁力搅拌及水浴超声仪超声处理，再经磁力搅拌处理，使混合液变成澄清的单相，然后将混合液置于旋转蒸发仪中减压蒸发直至形成一层脂质薄膜； 5 )向脂质薄膜中加入磷酸盐缓冲溶液，溶解脂质薄膜，得溶液C; 6)将溶液C过滤膜，超声，放4°C冰箱中保存，即得包封杨梅花色苷的脂质体。2.如权利要求1所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤I)中有机溶剂为乙醚与三氯甲烷的混合溶剂，所述乙醚与三氯甲烷的体积比为1-2:1。3.如权利要求1所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤I)中胆固醇为蛋白胆固醇、血清胆固醇、蛋黄胆固醇或胆囊胆固醇中的任一种。4.如权利要求1所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤2)中溶剂为无水乙醇、无水乙醚和氯仿中的至少一种。5.如权利要求1所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤3)中磷酸盐缓冲溶液由0.2mo VL的Na2HPO4溶液与0.2mol/L的NaH2PO4溶液按体积比0.1-0.3:1混合得到。6.如权利要求1所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤4)中先经磁力搅拌时间为40-50分钟，水浴超声仪在功率10Hz的条件下，超声5-8分钟，再经磁力搅拌时间为3-8分钟，转速30-40r/min。7.如权利要求1所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤4)中减压蒸发真空度为0.06-0.1Mpa。8.如权利要求1所述的一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤6)中滤膜孔径为450nm和220nm，超声时间为5-10分钟。
【专利摘要】一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，属于生物技术领域。其包括以下工艺步骤：将大豆卵磷脂与胆固醇溶解在有机溶剂中得溶液A；将杨梅花色苷溶解在溶剂中制成杨梅花色苷原液；将杨梅花色苷原液用磷酸盐缓冲液溶解稀释得溶液B；将A、B液混合，先经磁力搅拌及水浴超声仪超声处理，再经磁力搅拌处理，使混合液变成澄清的单相，然后将混合液置于旋转蒸发仪中减压蒸发直至形成一层脂质薄膜；向脂质薄膜中加入磷酸盐缓冲溶液，溶解脂质薄膜，得溶液C；将溶液C过滤膜，超声，放4℃冰箱中保存。本发明杨梅花色苷脂质体开拓了脂质体的应用范围，运用脂质体作为载体包埋杨梅花色苷，其制备工艺简单，设备要求较低，便于推广应用，可产业化生产。
【IPC分类】A61P39/06, A61P35/00, A61P29/00, A61K9/127, A61K8/60, A61P27/02, A61P3/10, A61P1/16, A61Q19/00, A61P7/02, A23L33/12, A61K31/7048
【公开号】CN105639654
【申请号】
【发明人】关荣发, 梁提松, 赵进, 吴知盼, 王彦波, 吕飞, 刘明启
【申请人】中国计量学院
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年1月27日