东方瓜馥木提取物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物化学应用领域，具体涉及一种东方瓜馥木提取物及其制备方法与 应用。
【背景技术】
[0002] 类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一种以关节滑膜炎为特征的慢性 全身性自身免疫性疾病，以慢性、对称性、多关节滑膜炎和关节外病变为主要临床表现。其 病理改变随着滑膜炎的进程，滑膜细胞异常增殖形成滑膜血管翳，其内部有大量的新生血 管增生及各种炎性细胞浸润，侵蚀软骨与骨导致关节破坏。RA患者滑液中滑膜细胞明显增 多，其中含有大量成纤维样滑膜细胞，滑膜细胞的增殖与其凋亡减少有关。增殖的滑膜细胞 周围还有大量炎性细胞浸润，不仅可导致基质降解，还可产生大量炎症因子如IL-I、TNF_a 等，从而导致滑膜炎症和软骨及骨的破坏。因此，利用药物是否抑制滑膜细胞的增殖探讨药 物的抗类风湿性关节炎的作用。
[0003] 东方瓜馥木(拉丁名:Fissistigma tungfangense Tsiang et P.T.L)为番蒸枝科 瓜馥木属物种，为中国的特有植物。目前东方瓜馥木在治疗类风湿关节炎药物中的应用尚 无报道。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种东方瓜馥木提取物，该提取物可以用于抗 类风湿关节炎。
[0005] 本发明还要解决的技术问题是提供上述东方瓜馥木提取物的制备方法。
[0006] 本发明最后要解决的技术问题是提供上述东方瓜馥木提取物的应用。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0008] -种东方瓜馥木提取物的制备方法，将东方瓜馥木原料烘干并粉碎，然后用醇加 热回流提取，过滤得到提取液，减压浓缩至浸膏状得到醇粗提物，醇粗提物加水稀释后用有 机溶剂萃取，将萃取液或萃取后剩余的水溶液分别浓缩至浸膏状，真空干燥得到的粉末即 为东方瓜馥木的有机溶剂提取物或东方瓜馥木的水提物;其中，所述的有机溶剂为石油醚、 氯仿和乙酸乙酯中的任意一种或几种的组合。
[0009] 其中，醇粗提物加水稀释后用有机溶剂萃取，将萃取液或萃取后剩余的水溶液分 别浓缩至浸膏状，真空干燥得到的粉末，优选如下方式之一：
[0010] 1、醇粗提物加水稀释后用石油醚萃取，将萃取液浓缩至浸膏状，真空干燥得到的 粉末即为石油醚萃取部位；
[0011] 2、醇粗提物加水稀释后用石油醚萃取，萃取后剩余的水溶液浓缩至浸膏状，真空 干燥得到的粉末即为水相萃取部位；
[0012] 3、醇粗提物加水稀释后依次顺序用石油醚和乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓 缩至浸膏状，真空干燥得到的粉末即为乙酸乙酯萃取部位；
[0013] 4、醇粗提物加水稀释后依次顺序用石油醚、乙酸乙酯和氯仿萃取，将氯仿萃取液 浓缩至浸膏状，真空干燥得到的粉末即为氯仿萃取部位。
[0014] 上述方式中，最优选方式1、方式2和方式4。
[0015] 其中，所述的东方瓜馥木原料为东方瓜馥木的根、茎或叶。
[0016] 其中，所述的用醇加热回流提取中，所述的醇为60%~100 % v/v的甲醇水溶液或 60 %~100 % v/v的乙醇水溶液。
[0017]其中，所述的用醇加热回流提取中，回流提取温度为25~80°C，回流提取1~3次， 每次回流提取，每次提取中甲醇水溶液或乙醇水溶液与东方瓜馥木的质量比为1:1~3,每 次回流提取时间为5~24h。
[0018] 其中，所述的过滤，其方式为纱布过滤，优选三层纱布过滤。
[0019] 其中，所述的减压浓缩，温度为30~70°C，压力为-0.06~-0.15MPa。
[0020] 其中，醇粗提物加水稀释成悬浮液，一般按照粗提物与水质量比为2:3进行稀释。 [0021 ]其中，有机溶剂萃取时，以有机溶剂的量和悬浮液的体积比为3: 2进行萃取，萃取1 ~3次。
[0022] 其中，所述的真空干燥条件为30~90°C，_0.09~-O.IMPa，干燥5~24h。
[0023] 上述东方瓜馥木提取物的制备方法制备得到的东方瓜馥木提取物也在本发明的 保护范围之内。
[0024] 发明人在抗类风湿关节炎筛选实验中发现东方瓜馥木提取物在抗类风湿关节炎 中具有良好的药效，可以用来制备抗类风湿关节炎的药物。因此上述东方瓜馥木提取物在 制备抗类风湿关节炎药物中的应用也在本发明的保护范围之内。
[0025] 有益效果:本发明首次发现东方瓜馥木醇提物的石油醚萃取部位、氯仿萃取部位 以及水相部位对滑膜细胞具有较好的抑制效果，表明东方瓜馥木醇提物的石油醚萃取部 位、氯仿萃取部位以及水相部位具有良好的体外抗类风湿关节炎药效，可以用于抗类风湿 关节炎药物的研发。
【具体实施方式】
[0026]根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本 发明。
[0027] 实施例1
[0028] 东方瓜馥木5Kg干燥的茎粉碎成粉末，粉末用15L 75%v/v的乙醇水溶液，在45°C 条件下热回流提取3次，每次10h，3层纱布过滤合并得到提取液，将提取液在45°C，压力为-0.1 MPa条件下减压浓缩成膏状(约520g)。将提取物按照与水质量比为2:3稀释成悬浮液，依 次用石油醚、乙酸乙酯以及氯仿萃取，以有机溶剂的量和悬浮液的体积比为3:2进行萃取， 萃取3次，分别合并石油醚，乙酸乙酯以及氯仿萃取液，石油醚萃取液，乙酸乙酯萃取液，氯 仿萃取液以及萃取过后的水相分别在温度为45°C，压力为_0.09MPa条件下进行减压浓缩得 到石油醚浸膏（IOlg)，乙酸乙酯浸膏（IlOg)，氯仿浸膏（80g)以及水相浸膏（208)。将4个部 位的浸膏以及第一步得到的留下的醇提物（20g)在50°C，-0.1 MPa条件下进行真空干燥，干 燥24h，得到5个部位用于体外抗类风湿关节炎的实验。
[0029] 实施例2:东方瓜馥木醇提物和醇提物的各极性萃取部位体外抗类风湿关节炎的 实验。
[0030] 1、实验材料
[0031] 细胞:滑膜细胞(原代大鼠滑膜细胞）。
[0032] 细胞培养液:原代大鼠滑膜细胞培养基。
[0033] 试剂：噻挫蓝（3_(4，5-dimethyIthiazol-2-yl )_2，5_diphenyl tetrazol ium bromide，MTT，Sigma生产）。乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH)试剂盒(购自碧云天 公司）。甲氨蝶呤(methot rexate，MTX，上海信宜药厂有限公司，批号20140307)。
[0034] 2、仪器:96孔细胞培养板;infinite 200Pro多功能酶标仪。
[0035] 3、实验方法
[0036] MTT法、LDH活性测定药物对滑膜细胞的抑制作用
[0037] 取对数期的滑膜细胞接种至96孔培养板（I X IO4个细胞/孔），设置为空白组(不给 予药物）、甲氨蝶呤组(给予lyg/mL的甲氨蝶呤）、给药组(给予100、200、400、600、800、1000μ g/mL浓度的药物），培养孵育过夜后用于实验。细胞给予不同浓度的药物培养48h后，每孔加 入IOyL浓度为5mg/mL MTT，继续培养4h后，小心吸弃培养上清液，每孔加入IOOyL的DMSO溶 解甲瓒结晶，室温震摇5min，完全溶解后，用酶标仪在570nm处检测光密度(0D值）。根据OD值 计算细胞存活率。
[0038]
[0039] 4、统计方法
[0040]采用SPSS 22.0统计软件分析实验数据。结果用均数土标准差( ?±>? )表示，用单因 素方差(one-way AN0VA)分析组间差异。以Ρ〈0.05认为具有统计学差异。
[0041 ]实验结果
[0042] 使用不同浓度药物培养48h后，MTT检测细胞活力结果见下表。
[0043]表1各药物对滑膜细胞的抑制作用
[0046] 注:与空白组比较，*P<0.05。
[0047] 实验结果表明石油醚萃取部位、氯仿萃取部位以及水相部位具有较好的药效，可 以用于制药。
【主权项】
1. 一种东方瓜馥木提取物的制备方法，其特征在于，将东方瓜馥木原料烘干并粉碎，然 后用醇加热回流提取，过滤得到提取液，减压浓缩得到醇粗提物，醇粗提物加水稀释后用有 机溶剂萃取，将萃取液或萃取后剩余的水溶液分别减压浓缩至浸膏状，真空干燥得到的粉 末即为东方瓜馥木的有机溶剂提取物或东方瓜馥木的水提物； 其中，所述的有机溶剂为石油醚、氯仿和乙酸乙酯中的任意一种或者几种的组合。2. 根据权利要求1所述的东方瓜馥木提取物的制备方法，其特征在于，所述的东方瓜馥 木原料为东方瓜馥木的根、茎或叶。3. 根据权利要求1所述的东方瓜馥木提取物的制备方法，其特征在于，所述的用醇加热 回流提取中，所述的醇为60 %~100 % v/v的甲醇水溶液或60 %~100 % v/v的乙醇水溶液。4. 根据权利要求1所述的东方瓜馥木提取物的制备方法，其特征在于，所述的用醇加热 回流提取中，回流提取温度为25~80°C，回流提取时间为5~24h。5. 根据权利要求1所述的东方瓜馥木提取物的制备方法，其特征在于，所述的过滤，其 方式为纱布过滤。6. 根据权利要求1所述的东方瓜馥木提取物的制备方法，其特征在于，所述的减压浓 缩，温度为30~70°C，压力为-0 · 06~-0 · 15MPa。7. 根据权利要求1所述的东方瓜馥木提取物的制备方法，其特征在于，所述的有机溶剂 为石油醚或氯仿。8. 根据权利要求1所述的东方瓜馥木提取物的制备方法，其特征在于，所述的真空干燥 条件为30~90°C，-0 · 09~-0 · IMPa，干燥5~24h。9. 权利要求1~8中任意一项所述的东方瓜馥木提取物的制备方法制备得到的东方瓜 寵木提取物。10. 权利要求9所述的东方瓜馥木提取物在制备抗类风湿关节炎药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种东方瓜馥木提取物的制备方法，将东方瓜馥木原料烘干并粉碎，然后用醇加热回流提取，过滤得到提取液，减压浓缩得到醇粗提物，醇粗提物加水稀释后用有机溶剂萃取，将萃取液或萃取后剩余的水溶液分别浓缩至浸膏状，真空干燥得到的粉末即为东方瓜馥木的有机溶剂提取物或东方瓜馥木的水提物；其中，所述的有机溶剂为石油醚、氯仿、正丁醇或乙酸乙酯。本发明在抗类风湿性关节炎筛选实验中，发现东方瓜馥木提取物及提取物的各极性部位具有良好的抗类风湿关节炎效果，可以用来制备治疗类风湿关节炎的药物。
【IPC分类】A61P29/00, A61P19/02, A61K36/185
【公开号】CN105641005
【申请号】
【发明人】陈光英, 周学明, 韩长日, 宋小平, 徐伟, 孙丽丽
【申请人】海南师范大学
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年11月11日