一种咪唑类化合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种咪唑类化合物。
【背景技术】
[0002] 非留类抗炎药(NSAIDS)通过抑制前列腺素的合成显示其特有的抗炎、退热和镇痛 效果，目前临床上应用较为广泛的是阿司匹林、布洛芬、酮洛芬、氟比洛芬酯、双氯芬酸钠、 塞来昔布、帕瑞昔布和萘普生等。在已公开的文献中化合物Z为塞来昔布的前体药物，结构 式如下：
在公开的文献中介绍了化合物Z较塞来昔布具有较好的药动学参数。
[0003] 肿瘤是危害人类健康的严重疾病，肿瘤的防治工作一直是医药研究领域的重点。 目前，由于工业发展中带来的环境污染等问题，人类的生存环境质量不断下降，造成肿瘤疾 病的发病率与致死率不断上升。放疗、化疗是目前治疗肿瘤的主要手段。但化疗、放疗在抑 制了癌细胞发育的同时也抑制了正常细胞的发育，降低了机体免疫力，导致新的并发症。治 疗肿瘤疾病的特效药并不能令人满意，目前临床所用细胞毒性药物选择性不高，导致对正 常细胞的恶性杀伤，限制了其应用。因此，寻找新的、无创伤、无细胞毒作用的抗肿瘤药物成 为国际医药领域的重要方向。
【发明内容】
[0004] 我公司研究人员进一步合成了化合物la、lb、lc(式I化合物的钠盐），进行体外、体 内抗肿瘤实验和药动学试验，比较塞来昔布、化合物Z、la、lb和lc的抑瘤活性及药动学参 数。
我们所合成的系列化合物可以通过实施例中的反应路线取得。
[0006]将下述化合物la、lb、lc、化合物Z、塞来昔布进行抑瘤试验比较，发现对于黑色素 瘤B16的抑制作用lc(式I)明显大于其它化合物。将上述化合物1&、113、1(：、化合物2、塞来昔 布进行药动学试验，发现1&、113、1(：、2化合物经过1^&816犬灌胃后在血液中均不同程度的代 谢为塞来昔布，其中lc具有最佳的药动学特征，beagle犬灌胃后观察到的AUC值显著大于其 它化合物，镇痛作用也由于化合物Z。
[0007] 具体实施例： 实施例1:系列化合物的制备： la、lb、lc依照下式获得：
(1)化合物3的合成： 准确称取32.4克甲醇钠加入到100.0 mLDMF中，在室温下搅拌反应10分钟，反应液冷却 至5-10°C，缓慢滴加67.0克对甲基苯乙酮，用时30分钟，滴加完毕后继续反应30分钟。将 76.8克三氟乙酸甲酯溶于100mL的DMF中，缓慢滴加到上述反应液中，用时30分钟，滴加完毕 后在室温下继续反应1小时，停止反应，向反应液中加入300mL冰水，用37%的盐酸调节pH=3-5，充分搅拌30分钟，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤(200mL X 3)，真空干燥得到101.8克淡黄色的 化合物3，产率为87 · 7%。!1匪1?(400抱，DMS0) : 7 · 74-7 · 72(d，J=4 · 4Hz，2H)，7 · 18-7 · 16(d，J= 4.4Hz，2H)，3.71(s， 2H)，2.35(s， 3H);MS(m/z):231.3。
[0008] (2)化合物4的合成： 准确称取89.4克4-(氨基磺酰基)苯肼和30.0mL37%的盐酸加入到200.0 mL的DMF中，搅 拌反应30分钟，向反应液中加入100克化合物3，60°C下搅拌反应2小时，停止反应，反应液冷 却至室温，向反应液中加入500mL蒸馏水，充分搅拌1小时，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤（200mL X 3)，真空干燥后得到 149 · 8克化合物4，产率为90 · 3%。!1匪1?(400!^，DMS0) : 7 · 92-7 · 90(d，J= 4·8Hz，2H)，7·50-7·48(d，J=4·8Hz，2H)，7·37-7·35(d，J=4·4Hz，2H)，7·18-7·16(d，J= 4.4Hz，2H)，6.55(s， 2H)，2.35(s， 3H);MS(m/z):382.3。
[0009] (3)化合物5a(R为甲基）、5b(R为乙基）、5c(R为环丙基)的合成： 准确称取38.1克化合物4和15.0克三乙胺加入到200.0 mL的DCM中，搅拌反应30分钟，向 反应液中滴加11.0克丙酰氯，10分钟内滴加完毕，升温至60 °C下搅拌反应2小时，停止反应， 反应液冷却至室温，向反应液中加入500mL蒸馏水，充分搅拌1小时，静置分层，分出有机层， 水层用DCM萃取（100mL X 3)，合并有机相，用蒸馏水洗涤(200mL X 3)，减压蒸馏除去溶剂得 到35 · 6克化合物5a，产率为81 · 3%。顯]\?(400取，DMS0) : 8 · 00(s，1H)，7 · 92-7 · 90(d，J= 4·8Hz，2H)，7·50-7·48(d，J=4·8Hz，2H)，7·37-7·35(d，J=4·4Hz，2H)，7·18-7·16(d，J= 4.4Hz，2H)，6.55(s， 2H)，2.35(s， 3H)，2.24-2.20(m, 2H)，1.14(t，J=3.6Hz，3H);MS(m/ z):438.3〇
[0010] 重复上述的反应步骤，得到36.4克化合物513，产率为80.3%。顯]\?(400他，0130) : 8·00(s，1H)，7·92-7·90(d，J=4·8Hz，2H)，7·50-7·48(d，J=4·8Hz，2H)，7·37-7·35(d，J= 4.4Hz，2H)，7.18-7.16(d，J=4.4Hz，2H)，6.55(s， 2H)，2.35(s， 3H)，2.19-2.17(m， 2H)， 1.63-1.61(m, 2H),0.96(t,J=3.2Hz,3H)；MS(m/z):453.3〇
[0011] 重复上述的反应步骤，得到33.8克化合物5c，产率为74.9%。顯]\?(400他，DMS0): 8·00(s，1H)，7·92-7·90(d，J=4·8Hz，2H)，7·50-7·48(d，J=4·8Hz，2H)，7·37-7·35(d，J= 4.4Hz，2H)，7.18-7.16(d，J=4.4Hz，2H)，6.55(s， 2H)，2.35(s， 3H)，1.19-1.17(m， 1H)， 0.71-0.68(m, 2H),0.56-0.52(m,2H)；MS(m/z):451.3〇
[0012] (4)化合物la、lb、lc的合成： 准确称取30.0克化合物5a加入到100.0 mL的乙醇中，室温下搅拌30分钟。将2.9克氢氧 化钠（与其他无机碱或有机碱如氨丁三醇、氢氧化钾、氢氧化镁、二乙胺、三乙胺、匍胺等可 获得不同的盐)或溶于50.OmL乙醇中，滴加到上述反应液中，10分钟内滴加完毕，室温下搅 拌反应2小时，停止反应，向反应液中缓慢滴加300mL乙醚，这时有大量的沉淀析出，充分搅 拌1小时，抽滤，滤饼用乙醚洗涤（50 . OmL X 3)，真空干燥后得到25.3克化合物la，产率为 80.3%〇HNMR(400Hz,DMS0)：7.92-7.90(d,J=4.8Hz,2H),7.50-7.48(d,J=4.8Hz,2H),7.37-7.35(d,J=4.4Hz,2H),7.18-7.16(d,J=4.4Hz,2H),6.55(s, 2H),2.35(s, 3H),2.24-2.20 (m, 2H)，1 · 14(t，J=3·6Hz，3H);MS(m/z):460·4。
[0013] 重复上述的反应步骤，得到24.2克化合物让，产率为77.1%。顯]\?(400他，0130) : 7.92- 7.90(d，J=4.8Hz，2H)，7.50-7.48(d，J=4.8Hz，2H)，7.37-7.35(d，J=4.4Hz，2H)，7.18-7.16(d，J=4.4Hz，2H)，6.55(s， 2H)，2.35(s， 3H)，2.19-2.17(m， 2H)，1.63-1.61(m， 2H)， 0·96(t，J=3·2Hz，3H);MS(m/z):474·3。
[0014] 重复上述的反应步骤，得到23.7克化合物1〇，产率为75.4%。顯]\?(400他，0130) : 7.92- 7.90(d，J=4.8Hz，2H)，7.50-7.48(d，J=4.8Hz，2H)，7.37-7.35(d，J=4.4Hz，2H)，7.18-7.16(d，J=4.4Hz，2H)，6.55(s， 2H)，2.35(s， 3H)，1.19-1.17(m， 1Η)，0·7卜0.68(m， 2H)， 0·56-0·52(m，2H);MS(m/z):472·6。
[0015]实施例2: B16黑色素瘤抑制作用比较： B16黑色素瘤于C57BL/6小鼠腋下皮下接种传代保存。选择肿瘤生长良好、无坏死或液 化的腋下传代保存的B16黑色素瘤荷瘤小鼠，脱颈椎处死小鼠，75%酒精浸泡消毒后，无菌取 瘤组织，加入5倍体积(W/V)的注射用生理盐水，用组织匀浆器制研磨成匀浆，以灭菌的200 目不锈钢筛网过滤得瘤细胞悬液。同上接种于C57BL/6小鼠腋窝皮下，常规饲养。
[0016]分组和给药:荷瘤小鼠70只，按体重随机分为5组，每组10只，分别为模型组、环磷 酰胺组、la组、lb组、1 c组、化合物Z组、塞来昔布组，剂量均为60mg/kg，采用生理盐水配制成 3mg/ml溶液。各组小鼠按表3所示剂量和方式给药，环磷酰胺组于荷瘤第二天仅腹腔给予一 次环磷酰胺，实验组的各组均每日尾静脉给药1次，连续10天。给药体积20 ml/kg体重。末次 给药后24小时，脱颈椎处死小鼠，称体重，剥取瘤组织称重，计算抑瘤率。
[0017]结果以SD表示，以t检验进行组间统计学差异比较。
[0018]结果显示，五个实验组连续静脉注射10天，均对小鼠移植性肿瘤B16黑色素瘤的生 长具有抑制作用，化合物1c组最优。
与模型组比较:*，P〈0.05;'P〈0.01。
[0020] 实施例3:药动学试验 雄性beagle犬10只，每组2只，实验前一天晚禁食不禁水，给药前称重。
[0021] (A)塞来昔布组 (B) 化合物Z组 (C) 化合物la组 (D) 化合物lb组 (E) 化合物lc组 给药：塞来昔布取200mg，其他组均计算成等同于塞来昔布200mg的质量，采用0.5%的 CMC配制成10ml混悬液。单次给药10ml溶液后，给水10ml。检测条件:采用C18色谱柱，150mm X4.6mm，5um，流动相为30mmol/L的醋酸铵-甲醇（22: 78 V/V)，流速：lml/min，柱温:40°C， 检测波长:254nm。给药后在0-24小时按时间点采血，采用验证的高效液相色谱法检测塞来 昔布的血液血浆浓度，各组的表2:塞来昔布在各组中的血浆药物代谢动力学参数如下：
实施例4:化合物lc对小鼠热板法致痛的影响 选用体重20-22g雌性昆明种小鼠。首先进行痛觉敏感性筛选，将小鼠置于55.0°C ±0.5 °(：的热板上，以小鼠舔后足所经历的时间作为疼痛反应的阈值，剔出喜跳者及小于5s或大 于30s内无反应者，筛选出60只痛觉反应敏感的小鼠，按体重随机分成五组，每组12只。采用 化合物1C进行实验。化合物1C低、中、高剂量组(化合物1C的剂量分别为4、12、36mg /kg体 重)和阳性对照组(化合物Z，剂量为72mg/kg体重），采用0.5%的羧甲基纤维素钠溶液制备 成混悬液。测定给药前痛阈值后，各试验组小鼠灌胃给予相应的药物，空白对照组给予等容 积的生理盐水。用脱毛剂将小鼠双后足踝关节以下脱毛，擦干。每只小鼠以同样的方法测定 给药前疼痛反应阈值，然后各受试组给药lh后，测定每鼠给药后的疼痛反应阈值，小鼠舔后 足后，立即移离热板，于给药后的2h、3h再测定一次疼痛反应的阈值，对各组间疼痛反应的 阈值进行t检验，以评价的镇痛作用。
[0022] 试验结果如表3所示，表明各试验组小鼠给药前对热板法疼痛反应的阈值相近，经 给药后，化合物lc各剂量组小鼠在lh、2h、3h舔后足的时间均较空白对照组显著延长，提高 了疼痛反应的阈值，表明化合物lc能明显延长小鼠热板痛阈时间，具有显著的镇痛作用，药 效显著优于化合物Z。表3中，低、中、高剂量组分别表示化合物1 c低、中、高剂量组。
[0023] 表3 lc对热板法实验中小鼠痛阈值的影响
【主权项】
1. 如式(I)所示结构的化合物：式I。2. 根据权利要求1所述化合物的盐。3. 权利要求1所述化合物的钢盐。4. 权利要求1、2、3所述化合物在制备治疗肿瘤药物中的用途。5. 权利要求1、2、3所述化合物在制备镇痛药物中的应用。
【专利摘要】一种咪唑类化合物（式Ⅰ所示）及其盐，实验证明具有较好的药动学参数、抑瘤活性和镇痛作用，可以抑制肿瘤细胞的生长，用于制备抗肿瘤和镇痛药物。
【IPC分类】A61P35/00, C07D231/12, A61P29/00
【公开号】CN105646354
【申请号】
【发明人】史美娟, 王明霞, 其他发明人请求不公开姓名
【申请人】广州诺威生物技术有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年3月19日