具有抗肿瘤活性的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂nxgf和nxgh及其制备方法和应用
【技术领域】
[00011本发明涉及喹唑啉类化合物，尤其涉及具有抗肿瘤活性的EGFR TKI - NXGF和NXGH 及其制备方法，本发明还涉及该药作为抗肿瘤剂的应用，属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 目前发现的EGFR酪氨酸激酶(EGFR TK)可以催化ATP的高能磷酸键转移到EGFR的 数个酪氨酸位点，使其磷酸化，从而激活下游的PI3K/Akt、Ras/MAPK等信号通路，促进细胞 进生长增殖、代谢，抑制细胞凋亡。细胞中EGFR过度表达和突变时，会阻碍细胞程序死亡，使 细胞的生长调节失控，而获得无限增殖和侵袭能力，即发展成为恶性肿瘤细胞。EGFR TKI通 过与ATP竞争胞内酪氨酸激酶的结合位点，阻止受体内酪氨酸的自身磷酸化，抑制EGFR酪氨 酸激酶激活，从而抑制肿瘤细胞生长、加速肿瘤细胞凋亡，抑制血管生成和肿瘤细胞浸润、 转移。小分子EGFR TKI的基本结构为喹唑啉胺。EGFR TKI可分为：1)可逆性TKI主要有:吉非 替尼（gefitinib)，厄洛替尼（erlotinib)，拉帕替尼（Lapatinib)，2)不可逆性TKI主要有： 阿法替尼(Afatinib)，达可替尼(Dacomitinib)。目前，可逆性和不可逆性EGFR TKI对突变 EGFR非小细胞肺癌短时间内具有显著的疗效，但最终均因产生获得性耐药而导致治疗失 败，并没有明显延长患者的生存期。因此，开发和研制具有更强、更持久抗肿瘤活性的新型 EGFR TKI将可能为突变EGFR非小细胞肺癌患者带来生机。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的之一是研发全新的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR TKI) 一 NXGF和NXGH，其机制是通过抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶磷酸化从而促进肿瘤 细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成和侵袭、转移；
[0004] 本发明的目的之二是发现NXGF和NXGH对突变EGFR肺癌细胞系具有较强的抑制活 性。
[0005] 本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
[0006] 本发明通过对不可逆性分子革巴向抗癌药物一Pelitinib(EKB_569)化学结构进行 优化和改进，得到了全新EGFR TKI - NXGF和NXGH，其具有更好的水溶性和更小的毒副作用， 同时对突变EGFR非小细胞肺癌具有较强抑制活性，并阐明其机制是通过抑制肿瘤细胞表皮 生长因子受体酪氨酸激酶磷酸化，阻碍下游信号通路活化，从而抑制肿瘤细胞生长、增殖， 促进肿瘤细胞凋亡。
[0007] 本发明的一种表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂或其可药用的盐，命名为NXGF 或NXGH，其中，所述的NXGF的分子结构式如式I所示，所述的NXGH的分子结构式如式II所示：
[0009] 当然，可以制备本发明化合物酸加成的盐，这些盐包括在本发明之中。
[0010] 本发明化合物的酸加成盐优选为药学上可接受的，与适当的酸（例如盐酸、醋酸、 硫酸)形成无毒的盐，除了药物上可接受的盐以外，其它的盐也包括在本发明之中。
[0011] 进一步的，本发明还提出了所述的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂或其可药 用的盐在制备促进肿瘤细胞凋亡的药物中的用途。
[0012] 其中，所述的促进肿瘤细胞凋亡是通过抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶磷酸化 而实现的。
[0013] 其中，优选的，所述的肿瘤细胞为EGFR突变的非小细胞肺癌细胞。
[0014] 更进一步的，本发明还提出了一种制备以上所述的表皮生长因子受体酪氨酸激酶 抑制剂或其可药用的盐的方法，包括：
[0015] (1)氮气保护下将60g 2-氨基-4氯苯甲酸和315ml甲酰胺混合于160°C下反应1 Oh， 冷却后倒入冰水中，抽滤，滤饼分别用水和甲醇洗涤，最后用乙醚和正己烷各洗涤一次，抽 干得到浅棕色固体，即化合物一；
[0016] (2)将38ml浓硫酸加入单颈瓶中，降温至0°C以下，滴加36ml浓硝酸，保持温度在5 °C以下，分批加入12.0g化合物一，加毕于95-100°C反应2-2.5h后冷却，倒入冰水中，抽滤， 滤饼分别用饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤，旋干，用220ml醋酸重结晶一次，再用醋酸结晶一 次，得到黄色固体，即化合物二；
[0017] ⑶将4.60g化合物二和7.80g甲醇钠的80mL甲醇溶液加入到密闭容器中，于100-105°C下反应18-20h，冷却，加入醋酸调pH至中性，旋去溶剂，加入水，抽滤，滤饼用甲醇洗 涤，抽干，滤饼用乙醇带干水分，抽干旋干得到产物，即化合物三；
[0018] (4)将4.00g化合物三，27.0g三氯氧磷，2.6g三乙胺，100ml二氯乙烷的混合物于95 °C下回流反应4-5h，冷却抽滤旋干，二氯甲烷溶解，冰水洗涤，干燥抽滤旋干，进行柱层析分 离，使用二氯甲烷:乙酸乙酯体积比= 16:1的混合溶液洗脱，得到产物，即化合物四；
[0019] (5)氮气保护下将2.5g化合物四，1.6g 3-氯-4-氟苯胺，250ml异丙醇的混合物于 100-105 °C回流反应3h，冷却抽滤，滤饼用少量异丙醇和乙醚洗涤，干燥得到黄色固体产物， 即化合物五；
[0020] (6)氮气保护下将3.0g化合物五溶于45ml DMF中于150°C分批投入2.0g氯化锂，共 反应3h，冷却，倒入冰水中，抽滤，旋干，进行柱层析分离，依次使用二氯甲烷：甲醇体积比= 30:1、20:1以及10:1的混合溶液进行洗脱，于二氯甲烷：甲醇体积比= 10:1的洗脱液中得到 黄色固体，即化合物六；
[0021] (7)20.0g三缩四乙二醇和10.2g三乙胺加入反应瓶中，加入300ml乙腈，冰浴降温 至0-5°C，将19.0gTsCl溶入100ml乙腈缓慢滴入该溶液中，lh滴完，滴完后升至20-25°C反应 12-14h，旋去溶剂，进行柱层析分离，依次使用正己烷：乙酸乙酯体积比= 4:1以及1.5:1的 混合溶液进行洗脱，于正己烷：乙酸乙酯体积比= 4:1的洗脱液中得到油状产品，即化合物 十八，于正己烷:乙酸乙酯体积比= 1.5:1的洗脱液中得到油状物，即化合物十九。
[0022] (8)氮气保护下将12.0g化合物十八和2.4g咪唑，l.Og 4-二甲氨基吡啶(DMAP)溶 于100ml的二氯甲烷中，体系冷却至0-5°C，滴加含有11.4g叔丁基二苯基氯硅烷(TBDPSC1) 的20mL的二氯甲烷溶液，加毕继续于0-5°C下反应l_1.5h，倒入水中，分层，水层用二氯甲烷 萃取，干燥浓缩后进行柱层析分离，依次使用正己烷：乙酸乙酯体积比=8:1、6:1以及4:1的 混合溶液进行洗脱，于正己烷：乙酸乙酯体积比= 4:1的洗脱液中得到油状产品，即化合物 二^一〇
[0023] (9)氮气保护下将2.9g化合物六，12.2g碳酸钾，lOOmlDMF的混合物于90°C下滴加 含有6.18g化合物二^^一的60ml二甲基甲酰胺溶液(DMF)，lh滴完，反应2h，旋干DMF，加入氯 化铵溶液，乙酸乙酯萃取旋干，进行柱层析分离，使用正己烷：乙酸乙酯体积比= 1:2的混合 溶液洗脱2-3遍，得到黄色固体，即化合物八；
[0024] NXGF 的制备：
[0025] (10)氮气保护下将0 · 85g化合物八，5 · 3g铁粉，0 · 28g氯化铵，5ml水，30ml乙醇的混 合物于95°C反应1.5-2h，冷却，抽滤，滤饼用二氯甲烷和甲醇泡洗，旋干，进行柱层析分离， 依次使用二氯甲烷：甲醇体积比= 60:1、40:1以及20:1的混合溶液进行梯度洗脱，于二氯甲 烷：甲醇体积比= 20:1的洗脱液中得到黄色油状物，即化合物十四；
[0026] (11)氮气保护下将10g巴豆酸，23g N-溴代丁二酰亚胺(NBS)，160ml苯混合加热回 流80°C分批加入570mg AIBN，回流搅拌4h，冷却至0°C搅拌20-30min，抽滤，滤饼用甲苯洗 涤，滤液旋干，用正己烷30ml回流提取，结晶三次后得到白色针状晶体，即化合物十七； [0027] (12)氮气保护下将0.89g化合物十七溶入5ml二氯甲烷中冷却至0-5°C加入2滴 DMF，滴加0.76g草酰氯，保温反应10min，然后于20°C下反应2h，另取一三颈瓶，氮气保护下 将0.74g化合物十四，1.25g三乙胺，10ml二氯甲烷混合冷却至0°C，滴加入上述反应好的酰 氯溶液中，缓慢滴加控温为〇_5°C，滴加完毕反应30min，加入饱和氯化铵溶液中，用二氯甲 烷萃取，干燥后旋干后进行柱层析分离，使用二氯甲烷：甲醇体积比= 40:1以及30:1的混合 溶液进行梯度洗脱，得到油状产品，即化合物十五；
[0028] (13)氮气保护下将0.35g化合物十五溶入8ml四氢呋喃中，冷却至0-5°C，加入1