一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法

文档序号:9882127阅读:707来源:国知局
一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及菌种保藏的技术领域,尤其涉及一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利 亚乳杆菌的方法。
【背景技术】
[0002] 江蓠 (Gracilaria)是多年生的大型红藻,属于红藻门,是我国广东、浙江、台湾沿 海藻类养殖品种之一,主要作为渔业养殖饲料和生产食品胶原料。江蓠菜琼胶寡糖是一种 非消化性低聚糖,对保加利亚乳杆菌的生长具有明显促进作用,并且具有抑制病原菌、腐败 菌等有害菌的生长,能提高人体免疫力,改善内分泌系统,促进营养物质的吸收,对人体亚 健康状态进行改善,对抗生素、激素、细胞毒性药物等所致的菌群失调所引起的肠炎、腹泻、 便秘以及药物的副作用进行治疗,具有延年益寿的作用。因此江蓠菜琼胶寡糖是一种新型 保健品以及食品添加剂或饲料添加剂。
[0003] 目前,在现有技术中还未有江蓠菜琼胶寡糖对益生菌的促进效果的报导,国内外 主要研究寡糖的抗病毒、抗炎症、抗癌症等作用。工业生产益生菌发酵产品,往往出现产品 益生菌数量不达标的问题。有鉴于此,本发明人研究和设计了一种琼胶寡糖作为保护剂保 藏保加利亚乳杆菌的方法,本案由此产生。

【发明内容】

[0004] 本发明的目的在于提供一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法,利 用江蓠菜琼胶寡糖作为保加利亚乳杆菌的碳源,保护保加利亚乳杆菌在低温贮藏下的活 性,保护保加利亚乳杆菌在人体胃肠液中存活率,提高保加利亚乳杆菌的菌活力。
[0005] 为了实现上述目的,本发明解决其技术问题所采取的技术方案是:
[0006] -种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法,包括以下步骤:
[0007] 步骤一、制备琼胶寡糖:将江蓠清洗除杂,烘干,加入江蓠重量30倍的水使江蓠充 分溶胀,置于80°C的水浴中加热2h;高压灭菌,121°C灭菌20min;将江蓠趁热挤胶,用滤布包 裹江蓠,并利用压力机挤压,收集挤胶滤出的多糖溶液,冷却、烘干、粉碎成颗粒,即得江蓠 粗多糖;将冷却的粗多糖溶解水中,制成浓度为5g/L的多糖溶液,加入琼胶酶处理;加酶量 为15 % (v/v),酶活为300U/mL;酶解20-1280min,以制备寡糖溶液,冷冻干燥,或真空干燥成 固体粉末,制得聚合度为3-8的琼胶寡糖;
[0008] 步骤二、菌种培养:制备MRS培养基,琼胶寡糖作为碳源,接种保加利亚乳杆菌0D_ 值为〇. 8的菌液,接种量为2 %,无氧环境下,42 °C,静置培养2-3天;
[0009] 步骤三、液体菌保藏:在OD600值为1.2保加利亚乳杆菌液体中,添加浓度为l-10g/L 且聚合度为3-8的琼胶寡糖,放置4 °C下贮藏;
[0010] 步骤四、固体菌剂保藏:在〇D6QQ值为1.2保加利亚乳杆菌液体中,添加浓度为5g/L 且聚合度为3的琼胶寡糖,喷雾干燥制备固体菌剂,喷雾干燥条件为:麦芽糊精添加量25 %, 进风温度130°C,进风速度4m3/min,进料速度700mL/h,空气压力0.3Pa,制备固体菌剂,制备 好的固体菌剂放置在常温或-20°C贮藏。
[0011] 作为实施例的优选方式,所述步骤一中,酶解时间为20min,制得聚合度为8的琼胶 寡糖。
[0012] 作为实施例的优选方式,所述步骤一中,酶解时间为80min,制得聚合度为5的琼胶 寡糖。
[0013] 作为实施例的优选方式,所述步骤一中,酶解时间为1280min,制得聚合度为3的琼 胶寡糖。
[0014] 作为实施例的优选方式,所述步骤二中,MRS培养基的组成为:牛肉蛋白粉10g、鱼 肉汁l〇g,酵母浸出汁粉5g,琼胶寡糖20g,醋酸钠 5g,柠檬酸二铵2g,吐温SOO.lg,硫酸镁 0.58g,硫酸猛0.28g,蒸溜水 1000ml; 121 °C 高压灭菌 15min,调节pH6.2-6.4。
[0015] 采用本发明的技术方案后,具有以下有益效果:
[0016] 1.本发明利用江蓠菜琼胶寡糖作为保加利亚乳杆菌的生长碳源,有效提高了保加 利亚乳杆菌在低温贮藏下和菌制剂下的活性以及在胃肠消化环境下的保护作用。
[0017] 2.本发明所使用的江蓠菜琼胶寡糖不会产生任何污染成分,更不会污染环境。本 方法在实际生产中投资少见效快,适合推广应用。
[0018] 3.采用高压灭菌加热处理,可以有效的对江蓠菜进行加热处理,减少水浴加热时 间,减少热能损耗,相应国家节能减排的号召。
【附图说明】
[0019] 图1为本发明不同聚合度琼胶寡糖对保加利亚乳杆菌在固态菌剂中的作用;
[0020] 图2为本发明不同浓度琼胶寡糖对保加利亚乳杆菌在固态菌剂中的作用;
[0021] 图3为本发明琼胶寡糖提高保加利亚乳杆菌在胃液模拟液中的耐受性作用;
[0022] 图4为本发明琼胶寡糖提高保加利亚乳杆菌在肠液模拟液中的耐受性作用。
【具体实施方式】
[0023] 酶活单位定义为每分钟产生lyg还原糖所需酶量。
[0024]空白对照组:制备MRS培养基,MRS培养基的组成为:牛肉蛋白粉10g、鱼肉汁10g,酵 母浸出汁粉5g,葡萄糖20g,醋酸钠5g,柠檬酸二铵2g,吐温80 O.lg,硫酸镁0.58g,硫酸锰 0.28g,蒸溜水1000ml; 121°C高压灭菌15min,调节pH6.2-6.4;葡萄糖作为碳源,接种保加利 亚乳杆菌0D6QQ值为0.8的菌液,接种量为2%。无氧环境下,42°C,静置培养2-3天。
[0025]江蓠菜琼胶寡糖组:制备江蓠菜琼胶寡糖,将琼胶寡糖代替MRS培养基中的葡萄 糖,并利用不同聚合度的寡糖(DP3、DP5、DP8)和不同浓度寡糖(lg/L、3g//L、5g/L、7g/L、10g/ L)来对保加利亚乳杆菌进行培养。接种保加利亚乳杆菌0D6(k)值为0.8的菌液,接种量为2%。 无氧环境下,42 °C,静置培养2-3天。
[0026]实施例1: 一种保加利亚乳杆菌生长的江蓠菜琼胶寡糖制备方法
[0027]步骤一、江蓠除杂:将江蓠清洗除杂,至没有泥沙,水样清澈,烘干,加入江蓠重量 30倍的水使江蓠充分溶胀,然后置于80 °C的水浴中加热2h;
[0028] 步骤二、高压灭菌:对加热处理后的江蓠进行高压灭菌,将微生物杀灭,高压灭菌 温度为121°C,灭菌时间为20min;
[0029] 步骤三、挤胶:将江蓠趁热挤胶,用滤布包裹江蓠,并利用压力机对装有江蓠的滤 布进行挤压,收集挤胶滤出的多糖溶液;将收集的多糖溶液进行冷却、烘干、粉碎成颗粒装 袋备用,放置在阴凉干燥处保存,即得江蓠粗多糖;
[0030] 步骤四、酶处理:将冷却的粗多糖溶解水中,制成浓度为5g/L的多糖溶液,加入琼 胶酶处理;加酶量为15% (v/v),酶活为300U/mL;酶解20-1280min,以制备寡糖溶液;
[0031 ]步骤五、干燥:寡糖溶液进行冷冻干燥,或真空干燥成固体粉末,制得琼胶寡糖。 [0032]作为实施例1的优选方式,所述步骤四中,酶解时间为20min,制得聚合度为8的琼 胶寡糖。
[0033]作为实施例1的优选方式,所述步骤四中,酶解时间为80min,制得聚合度为5的琼 胶寡糖。
[0034]作为实施例1的优选方式,所述步骤四中,酶解时间为1280min,制得聚合度为3的 琼胶寡糖。
[0035] 实施例2:不同聚合度琼胶寡糖对提高保加利亚乳杆菌在低温贮藏下菌活力的影 响
[0036] 利用以上制备寡糖方法制备出不同聚合度的琼胶寡糖,将其添加至已发酵达到 〇D6QQ值为0.8的保加利亚乳杆菌的MRS
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