一种索拉非尼及其有关物质的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种索拉非尼或其盐有关物质的测定方 法。 【背景技术】
[0002] W02000/42012A公开了一类ω -羧基芳基取代的二苯脲化合物4-{4-[ ({[4-氯-3-(三氟甲基）苯基]氨基}羰基)氨基]苯氧基}-Ν_甲基吡啶-2-甲酰胺，其结构式如式（I)所 示：
[0003
[0004] W02000/42012A还公开了该化合物及其盐，例如对甲苯磺酸盐如结构式（II)，其可 用于抑制Raf激酶所介导癌细胞生长。
[0005]
[0006] W02003/068228A尤其涉及式（II)化合物在治疗VEGF信号转导通路介导的疾病（例 如肿瘤）的应用，可用于异常血管生成或高渗透性病症。W02003/0475979A公开了式（II)化 合物与细胞毒或细胞抑制化合物联合用于治疗Raf激酶介导的疾病，例如癌症，如肺癌、胰 腺癌、甲状腺癌、肾癌、肠癌或癌细胞生长。W02006/034796A公开了一种索拉非尼对甲苯磺 酸盐的制备方法，其反应路线如下：
[0007]
[0008] 在药物的制备和贮存过程中，对合成方法可能产生的杂质(包括中间体、副产物等 有机杂质)进行监测，对于原料药及其制剂的质量控制非常重要。W02006/034796A制备的对 甲苯磺酸索拉非尼的有关物质，包括起始原料(RC1、RC2、RC4、RC9)，中间体(RC3)，乙醇解产 物(RC5)，降解产物(RC110，副产物(RC6、RC7)，水解产物(RC8)，N氧化物副产物(RC10)，索拉 非尼(RC12)。索拉非尼进口药品注册标准(标准号:JX20070240)公开了一种对甲磺酸索拉 非尼的含量测定方法，是用十八烷基键合硅胶为填充剂(Waters Symmetry C18，3.5μηι，4.6 X 50mm);以ρΗ2.4磷酸盐缓冲液(取1.0g二水合磷酸二氢钾，加水使溶解并稀释至1000ml， 以磷酸调节pH值至2.4)为流动相A，乙腈-乙醇(60:40)为流动相B，检测波长为235nm;色谱 柱温为40°C，进行梯度洗脱程序操作。该方法所用仪器设备昂贵且不具有普遍适应性，并且 对所用试剂、色谱柱要求苛刻，实用性和适用性差。
[0009] 0附047614924(公开日2015.07.08)公开了一种索拉非尼的测定方法，是以11^111〇 八(^11(3〇代乂1^(：18(150\4.6臟，4以〇为色谱柱 ；以?!12.4磷酸盐缓冲液(取1.(^二水合磷酸 二氢钾，加水使溶解并稀释至l〇〇〇mL，以磷酸调节pH=2.4)为流动相A;以乙腈-乙醇（60: 40)为流动相B;检测波长为235nm，进行梯度洗脱程序操作。该方法无法实现对索拉非尼及 其杂质的检测，且灵敏度低，不能良好地反应系统的检测能力。因此，需要开发更高灵敏度 的索拉非尼或其对甲苯磺酸盐及它们有关物质HPLC测定方法。
【发明内容】
[0010] 本发明的目的是提供一种索拉非尼及其有关物质的检测方法，其可用于索拉非尼 或其盐的合成过程和终产品及制剂的质量控制。
[0011] 本发明的索拉非尼及其有关物质的检测方法，是采用高效液相色谱法实现，选用 十八烷基键合硅胶色谱柱；以PH2.0~3.0的缓冲液为流动相A，乙腈和乙醇混合物为流动相 B;检测波长为230nm~240nm，按照下述梯度洗脱程序操作，
[0012]
[0013] 在本发明的一些实施方案中，所述流动相A为pH2.4磷酸盐缓冲液，所述流动相B为 体积比为60:40的乙腈:乙醇混合溶液。
[0014] 在本发明的一些实施方案中，所述检测波长为235nm。
[0015] 在本发明的一些实施方案中，所述检测方法的流速为0.9~1. lmL/min，优选 1·0mL/min〇
[0016] 在本发明的一些实施方案中，所述十八烷基键合硅胶色谱柱填料粒径为3_5μπι，优 选4·6μηι〇
[0017] 在本发明的一些实施方案中，所述柱温为30°C~45°C，优选30°C。
[0018] 在本发明中，所"pH" ±0.1、"流速" ±0. lmL/min、柱温±5°C、"流动相比例" ±2%、 "检测波长" ±2nm对本发明的实施无影响，且均落入本发明的保护范围内。
[0019] 本发明中，术语"索拉非尼"在没有明确区分的情况下，可以是索拉非尼的纯品、原 料药、合成品、索拉非尼的盐(如对甲苯磺酸索拉非尼)等以索拉非尼作为主成分的产品。本 发明的测定方法均适用于上述产品的质量控制，并且这些产品的有关物质的测定方法也保 护在本发明的保护范围内。
[0020] 本发明中，术语"有关物质"是指在药物制备和贮存过程中，对合成方法可能产生 的杂质（包括中间体、副产物等有机杂质）。
[0021] 本发明的方法具有空白基线平稳、专属性强、分离度好、灵敏度高（L0D数量级为 0.01ng、L0Q数量级为O.lng)、准确度高（回收率在96%~100%)、精密度良好、线性范围宽 (0.3~3000μg/ml)等特点，其适用于索拉非尼或其盐及其中间体杂质的检测，亦可用于索 拉非尼及其中间体的定性和定量分析，或进一步用于监测索拉非尼合成反应工艺、终产品 或原料药及制剂的质量。
【附图说明】
[0022] 图1为实施例1的空白溶液的色谱图。
[0023] 图2为实施例1的甲苯磺酸索拉非尼混合对照品的色谱图。
[0024] 图3为实施例1的甲苯磺酸索拉非尼样品的色谱图。
[0025] 图4为实施例2的甲苯磺酸索拉非尼样品的色谱图。
[0026] 图5为实施例3的甲苯磺酸索拉非尼样品的色谱图。
[0027] 图6为对比例1的甲苯磺酸索拉非尼样品的色谱图。
[0028] 图7为对比例2的空白溶液的色谱图。
[0029] 图8为对比例2的甲苯磺酸索拉非尼混合对照品的色谱图。 具体实施方案
[0030] 下面用具体实施例来进一步解释和说明本发明，但并不以任何方式限制本发明的 范围。
[0031] 本发明所使用的试剂均可以从市场上购得。
[0032] 实施例1
[0033] (1)检测条件
[0034] 仪器:Thermo U3000高效液相色谱仪，检测器:紫外检测器，检测波长:235nm;
[0035] 色谱柱：Waters Xbridge C18(250X4.6mm，5ym);
[0036] 流动相:pH 2.4磷酸盐缓冲液（取l.Og二水合磷酸二氢钾，加水使溶解并稀释至 1000ml，以磷酸调节pH=2.4)为流动相A，以乙腈-乙醇(60:40)为流动相B;
[0037] 柱温：30 Γ;
[0038] 流速：lmL/min;
[0039] 进样量：5yL。
[0040] 按表3的条件进行线性梯度洗脱程序。
[0041] 表 3
[0042]
[0043] (2)检测方法
[0044] 定性对照溶液的配制:精密称取RC1、RC2、RC3、RC4、RC9、RC12各5mg，置于1 OmL量瓶 中，用甲醇溶解并稀释至刻度;精密称取此5、此6、此7、此8、1^10、此11各11^，置于1〇1^量瓶 中，用甲醇溶解并稀释至刻度;再精密称取索拉非尼30mg，置于20mL量瓶中，用甲醇溶解并 稀释至刻度，即得各定性对照溶液。
[0045] 混合对照品溶液的配制:精密称取甲苯磺酸索拉非尼样品30mg，置于20mL量瓶中， 先加入5mL的甲醇溶解再分别加入上述定性对照溶液各lmL，用甲醇定容至刻度，摇匀，作为 供试品溶液。
[0046]供试品溶液的配制:精密称取甲苯磺酸索拉非尼样品30mg，置于20mL量瓶中，用甲 醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0047] 空白溶液:稀释剂。
[0048] 分别取空白溶液、混合对照品溶液和供试品溶液，按照上述条件进行HPLC分析并 记录色谱图，见图1、图2和图3。结果表明，该方法可实现索拉非尼及其杂质的完全分离，且 空白基线平稳，灵敏度高。
[0049] 实施例2
[0050] 按照实施例1类似的检测方法，其中，波长替换为230nm。其甲苯磺酸索拉非尼样品 的色谱图见图4。
[0051] 结果表明，该方法可实现索拉非尼及其杂质的完全分离，且空白基线平稳，灵敏度 尚。
[0052] 实施例3
[0053]按照实施例1类似的检测方法，其中，波长替换为240nm。其甲苯磺酸索拉非尼样品 的色谱图见图5。
[0054] 结果表明，该方法可实现索拉非尼及其杂质的完全分离，且空白基线平稳，灵敏度 尚。
[0055] 对比例1
[0056] (1)检测条件
[0057]仪器:Waters高效液相色谱仪，检测波长:235nm;
[0058] 色谱柱：Thermo Accucore XL C18(250X4.6mm，4yL);
[0059] 流动相:pH 2.4磷酸盐缓冲液（取l.Og二水合磷酸二氢钾，加水使溶解并稀释至 1 OOOmL，以磷酸调节pH=2.4)为流动相A，以乙腈-乙醇(60:40)为流动相B;
[0060] 柱温：40 Γ;
[0061] 流速:0.5mL/min;
[0062] 进样量：10yL。
[0063] 按表2的条件进行线性梯度洗脱程序。
[0064] 表 2
[0065]
[0066] (2)检测方法
[0067]按照实施例1的检测方法项下进行操作。其甲苯磺酸索拉非尼样品的色谱图见图 6〇
[0068] 结果表明，索拉非尼中RC2(4.172min)出峰较早，与溶剂峰不能完全分离，无法实 现索拉非尼样品的检测。
[0069] 对比例2 [0070] (1)检测条件
[0071] 仪器:Thermo U3000高效液相色谱仪，检测波长:235nm;
[0072]色谱柱：Thermo Accucore XL C18(150X4.6mm，4yL);
[0073]流动相:pH 2.4磷酸盐缓冲液（取l.Og二水合磷酸二氢钾，加水使溶解并稀释至 1 OOOmL，以磷酸调节pH=2.4)为流动相A，以乙腈-乙醇(60:40)为流动相B;
[0074]柱温：3(TC;
[0075] 流速：lmL/min;
[0076] 进样量：10yL。
[0077] 按表3的条件进行线性梯度洗脱程序。
[0078] 表 3
[0079]
[0080] (2)检测方法
[0081] 按照实施例1的检测方法项下进行操作。其空白溶液的色谱图、甲苯磺酸索拉非尼 混合对照品的色谱图见图7和图8。
[0082] 结果表明，索拉非尼（R12)中RC1与溶剂峰不能完全分离，RC5、RC6重合，不能达到 完全分离，且空白基线不太平稳，噪音较大，灵敏度低。
【主权项】
1. 一种索拉非尼及其有关物质的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法实现，选 用十八烷基键合硅胶色谱柱；WpH2.0~3.0的缓冲液为流动相A，乙腊和乙醇混合物为流动 相B;检测波长为230nm~240nm，按照下述梯度洗脱程序操作，2. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于，所述流动相A为pH2.4憐酸盐缓冲液，所述 流动相B为体积比为60:40的乙腊:乙醇混合溶液。3. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于，所述检测波长为235nm。4. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于，所述检测方法的流速为0.9~1. ImL/min。5. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于，所述检测方法的流速为1. OmL/min。6. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于，所述十八烷基键合硅胶色谱柱填料粒径为 3-姐HId7. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于，所述十八烷基键合硅胶色谱柱填料粒径为 4.化m。8. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于，所述柱溫为25°C~35°C。9. 根据权利要求1的检测方法，其特征在于，所述柱溫为30°C。
【专利摘要】本发明涉及一种索拉非尼及其有关物质的检测方法，其采用高效液相色谱法梯度洗脱实现，选用十八烷基键合硅胶色谱柱；以pH2.0～3.0的缓冲液为流动相A，乙腈和乙醇混合物为流动相B；检测波长为230nm～240nm。该方法具有空白基线平稳、专属性强、分离度好、灵敏度高、准确度高、精密度良好、线性范围宽等特点，其适用于索拉非尼或其盐及其中间体杂质的检测。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/34
【公开号】CN105651877
【申请号】
【发明人】杨晓玲, 郝福, 邵玉平
【申请人】神威药业集团有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年12月30日