一种用液相色谱法分离测定琥珀酸曲格列汀及其光学异构体的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体涉及用液相色谱法分离测定琥珀酸曲格列汀及其 光学异构体的方法。
【背景技术】
[0002] 琥珀酸曲格列汀是一种质量糖尿病的新药，其分子式为C1SH20FN 502 ·(；氏04，其结构式为：
琥珀酸曲格列汀分子屮贫有1个中性碳原于，通过小对称合成生成不同的手性异构体， 在药物合成过程中需要对光学异构体进行质量控制。含有手性碳原子的对映异构体的分离是 手性药物合成和制剂过程中质量控制的难点，因此，实现琥珀酸曲格列汀及其手性异构体的 分离测定在琥珀酸曲格列汀的合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。
[0003] 经反复试验，本发明人发现，用三(S)-ci -甲基苯基氨基甲酸酯直链淀粉为填料的手性 色谱柱，以正己烧一f氏级醇溶液为流动相即可以将琥珀酸曲格列汀手性异构体进行有效分离，该 方法下基线平稳，主峰峰形较好，检测限较高，从而可以准确控制琥珀酸曲格列汀的质量。
[0004]
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种采用高效液相色谱分离测定琥珀酸曲格列汀及其手 性异构体的方法，该方法可有效实现琥珀酸曲格列汀与其手性异构体的分离与测定，基线 平稳，主峰峰形较好，检测限较高。
[0006] 为实现本发明的目的，提供如下实施方案： 在一实施方案中，本发明的采用液相色谱法分离测定琥珀酸曲格列汀及其光学异构 体的方法，包括以三（S)-ct-甲基苯基氨基甲酸酯直链淀粉为填料的手性色谱柱，以正己 烧一低级醇溶液为流动相，其中，正己烷与低级醇的体积比为25:75~75:25。
[0007] 在上述实施方案中，本发明的方法，所说的手性色谱柱选自牌号为Daicel CHIRALPAK AS、Daicel CHIRALPAK AS-H 和 Daicel CHIRALPAK AS-3 的色谱柱，所说的低级 醇选自以下化合物：甲醇、无水乙醇、丙醇和异丙醇，优选为无水乙醇或异丙醇，正己烷中还 进一步含有微量改性剂，所述改性剂选自三乙胺、二乙胺、三氟乙酸和乙二胺，优选乙二胺， 所述微量为〇. 01-1%，优选为〇. 02-0. 1%。
[0008] 在上述实施方案中，本发明的方法，还进一步包括以下步骤： (1) 称取琥珀酸曲格列汀样品适量，用无水乙醇溶解样品，配制成每lml含琥珀酸曲格 列汀0. lmg~5mg的样品溶液； (2) 设置流动相流速为0. 5~2. Oml/min，优选为1. 0 ml/min ;检测波长为 205nnT300nm，优选为276nm，色谱柱的柱温箱温度为25°C ~45°C，优选为40°C ; (3) 取（1)的样品溶液，设置进样量为5ml~100ml，优选20μ 1注入色谱仪，完成琥珀酸 曲格列汀与光学异构体的分离测定。
[0009] 在一具体实施方案中，本发明的采用液相色谱分离测定琥珀酸曲格列汀及其光 学异构体的方法，包括以三（S)-a-甲基苯基氨基甲酸酯直链淀粉为填料的手性色谱柱， 以正己烷一低级醇溶液为流动相，其中，正己烷与低级醇的体积比为60 :40,所述低级醇选 自甲醇、无水乙醇、丙醇和异丙醇，优选为无水乙醇，其中，正己烷中含有微量改性剂，所述 改性剂选自三乙胺、二乙胺、三氟乙酸和乙二胺，优选乙二胺，所述微量为0.01-1%，优选为 0. 02-0. 1%，该方法包括以下步骤： (1) 称取琥珀酸曲格列汀样品适量，用无水乙醇溶解样品，配制成每lml含琥珀酸曲格 列汀0. lmg~5mg的样品溶液； (2) 设置流动相流速为0. 5~2. Oml/min，优选为1. 0 ml/min ;检测波长为 205nnT300nm，优选为276nm，色谱柱的柱温箱温度为25°C ~45°C，优选为40°C ; (3) 取（1)的样品溶液，设置进样量为5ml~100ml，优选20 μ 1注入色谱仪，完成琥珀酸 曲格列汀与光学异构体的分离测定。
[0010] 在上述具体实施方案中，本发明的方法，所说的手性色谱柱选自牌号为Daicel CHIRALPAK AS、Daicel CHIRALPAK AS-H 和 Daicel CHIRALPAK AS-3 的色谱柱，所说的低级 醇为无水乙醇，正己烷中含有0. 02%的改性剂，所述改性剂为乙二胺。
[0011] 在上述具体实施方案中，本发明的方法，优选的，其中： 高效液相色谱仪:Agilent 1100型高效液相色谱仪 色谱柱：Daicel CHIRALPAK AS-H 手性柱（250mmX4. 6mm, 5 μ m) 柱温：40°C 流动相：正己烷(含0. 02%乙二胺）-无水乙醇（60 :40V/V) 流速：1.0ml/min 检测波长：276nm 进样量：20 μ 1 本发明的方法，能够有效分离测定琥珀酸曲格列汀及其光学异构体；选用低级醇，特别 是无水乙醇为流动相和溶剂溶解样品，保证了溶液的稳定性；优选进样体积为20 μ 1，柱温 为40°C，可获得对称性更好的色谱峰。本发明解决了琥珀酸曲格列汀与其光学异构体分离 困难的定问题，很好的实现了琥珀酸曲格列汀与其光学异构体的基线分离和测定，特别是 在正己烷中加入微量的改性剂后，避免峰出现拖尾现象，基线分离更稳定，从而更好的保证 了琥珀酸曲格列汀的质量可控。
[0012]
【附图说明】
[0013] 图1 :空白溶剂的高效液相色谱图 图2 :琥珀酸曲格列汀原料和琥珀酸曲格列汀对映异构混合液的高效液相色谱图 图3 :琥珀酸曲格列汀原料的高效液相色谱图 图4 :空白辅料的高效液相色谱图 图5 :琥珀酸曲格列汀片的高效液相色谱。
【具体实施方式】
[0014] 以下实施例用于进一步阐明和解释本发明的实质，但不以此限制本发明的范围。
[0015] 实施例1 仪器和条件 高效液相色谱仪:Agilent 1100型高效液相色谱仪 色谱柱：Daicel CHIRALPAKAS-H 手性柱（250mmX4.6mm，5μπι) 柱温：40°C 流动相：正己烷（含〇· 02%乙二胺）-无水乙醇（60 :40) 流速：1. 〇ml/min 检测波长：276nm 进样量：20 μ 1 实施步骤 分别取琥珀酸曲格列汀原料20mg和琥珀酸曲格列汀对映异构体20mg，置同一 10ml量 瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml至25ml量瓶中，无水乙醇稀释至 刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0016] 分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色 谱图，结果见图1和图2,图1为空白溶剂的高效液相色谱图，图2为琥珀酸曲格列汀原料和 琥珀酸曲格列汀对映异构混合液的高效液相色谱图。图2中保留时间为8. 111分钟的色谱 峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体的色谱峰，保留时间为6. 910分钟的色谱峰为琥珀酸曲格 列汀的色谱峰，由图可以看出，琥珀酸曲格列汀与其对映异构体达到基线分离度。
[0017] 实施例2 仪器和条件 高效液相色谱仪:Agilent 1100型高效液相色谱仪 色谱柱：Daicel CHIRALPAKAS-H 手性柱（250mmX4. 6mm, 5 μ m) 柱温：40°C 流动相：正己烷（含〇· 02%乙二胺）-无水乙醇（60 :40) 流速：1.0ml/min 检测波长：276nm 进样量：20 μ 1 实施步骤 取琥珀酸曲格列汀原料25mg，置50ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作 为供试品溶液。
[0018] 取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3。
[0019] 图3表明，琥珀酸曲格列汀的光学纯度达到原料药用级要求，本发明的方法可以 用于琥珀酸曲格列汀原料药的质量检测和控制。
[0020] 实施例3 仪器和条件 高效液相色谱仪:Agilent 1100型高效液相色谱仪 色谱柱：Daicel CHIRALPAKAS-H 手性柱（250mmX4.6mm，5μπι) 柱温：40°C 流动相：正己烷（含〇· 02%乙二胺）-无水乙醇（60 :40) 流速：1. 〇ml/min 检测波长：276nm 进样量：20 μ 1 实施步骤 取琥珀酸曲格列汀片适量，约相当于琥珀酸曲格列汀20mg，置10ml量瓶中，加无水乙 醇超声处理使溶解，并用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5ml至25ml量瓶中，无水乙 醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0021] 取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，并同法进行空白 辅料试验，结果见图4、图5。
[0022] 图4为空白辅料的高效液相色谱图，图4表明，空白辅料不干扰琥珀酸曲格列汀及 其手性异构体的测定，图5为琥珀酸曲格列汀片的高效液相色谱图，图5表明本发明的方法 可以用于琥珀酸曲格列汀片的质量检测和控制。
[0023] 实施例4 参照实施例1的试验操作和条件参数，分别改变色谱条件中的流动相的比例、改性剂 的比例和色谱柱，其它条件及参数不变，考察琥珀酸曲格列汀与对映异构体的分离情况。结 果见下表：
根据上表的结果表明，本发明的方法均能使琥珀酸曲格列汀与对映异构体达到有效分 离，从而实现琥珀酸曲格列汀与对映异构体有效的分离测定。本发明的方法专属性强，准确 度高，操作简便。
【主权项】
1. 一种采用高效液相色谱法分离测定琥珀酸曲格列汀及其对映异构体的方法，包括以 三（S) - Ct -甲基苯基氨基甲酸酯直链淀粉为填料的色谱柱，和以正己烷-低级醇溶液为流 动相，其中，正己烷与低级醇的体积比为25:75~75:25。2. 根据权利要求1所述的方法，所述手性色谱柱选自下列牌号的色谱柱：Daicel CHIRALPAKAS、Daicel CHIRALPAKAS-H 和 Daicel CHIRALPAKAS-3。3. 根据权利要求1所述的方法，所述低级醇选自甲醇、无水乙醇、丙醇和异丙醇。4. 根据权利要求3所述的方法，所述低级醇为无水乙醇或异丙醇。5. 根据权利要求3所述的方法，所述流动相，其中，正己烷中含有0. 01%-1%的改性剂。6. 根据权利要求1所述的方法，所述正己烷与低级醇的体积比为60:40,其中，正己烷 中含有0. 02%的改性剂。7. 根据权利要求5或6所述的方法，所述改性剂选自三乙胺、二乙胺、三氟乙酸和乙二 胺。8. 根据权利要求1所述的分离测定方法，还包含以下步骤： a) 供试品溶液的配制：称取琥珀酸曲格列汀或含琥珀酸曲格列汀的制剂，加无水乙醇 溶解样品，配制成每lml含琥拍酸曲格列汀0. lmg至5mg的样品溶液作为供试品溶液； b) 设置流动相的流速为0· 5~2. Oml/min，设置检测波长为200nm至300nm，设置色谱 柱的柱温为25°C至45°C ; c) 取a)的样品溶液设置进样量为5ml~100ml，注入液相色谱仪，记录色谱图，完成琥 珀酸曲格列汀与光学异构体的分离测定。9. 根据权利要求9所述的分离测定方法，其特征在于步骤b)所述的柱温箱温度为 40。。。10. 根据权利要求9所述的分离测定方法，其特征在于步骤b)所述的检测波长为 276nm，或步骤c)的进样量为20ml。
【专利摘要】本发明提供了一种采用高效液相色谱法分离测定琥珀酸曲格列及其汀光学异构体的方法，包括以三（S）-α-甲基苯基氨基甲酸酯直链淀粉为填料的色谱柱，和以正己烷-低级醇溶液为流动相，其中，正己烷与低级醇的体积比为25:75~75:25，分离测定琥珀酸曲格列汀及其手性异构体的含量。采用该方法可以很好的将琥珀酸曲格列汀与其对映异构体进行有效分离和测定。该本法用于琥珀酸曲格列汀的质量控制，专属性强，准确度高，操作简便。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105675733
【申请号】
【发明人】熊娟, 张道林, 彭良臣, 但春燕
【申请人】重庆医药工业研究院有限责任公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2014年11月17日