一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂及其制备方法与使用方法
【专利摘要】本发明涉及一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂及其制备方法与它的使用方法。本发明的诊断试剂由三羟甲基氨基甲烷、卵磷脂、硅藻土、茶多酚、山梨酸钾组成。本发明诊断试剂与国内外使用的诊断试剂在实际使用中具有良好的一致性，而本发明的诊断试剂在制备成本上显著低于国外试剂，通过让利于民的举措，降低检验收费，减轻患者就医负担，减少医疗保险的支付，因此带来可观的社会效益。
【专利说明】一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂及其制备方法与 使用方法 【技术领域】
[0001] 本发明属于临床医学体外诊断技术领域。更具体地，本发明涉及一种用于检测人 体血液凝集功能的诊断试剂，还涉及所述诊断试剂的制备方法，还涉及所述诊断试剂的使 用方法。 【【背景技术】】
[0002] 人体凝血功能的评估是临床医学上用于术前出血风险排查、术后血栓判断和抗凝 治疗监测的必备环节。目前临床实验室普遍使用全自动凝血仪检测凝血酶原时间（PT)、活 化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间（TT)和纤维蛋白原(Fib)，这些检查项目只涉及血 浆部分，不涉及血小板、红细胞、白细胞，更不涉及纤维蛋白溶解活性，于是造成功能评估的 局限性。
[0003] 血栓弹力图仪在理论上填补了目前标准化实验室在血液凝集过程检测上的空白。 首先，它易于操作可以作为床旁测试，并能在30min内出结果。每一个TEG参数(R、K、a、MA、 LY30,见图1)均代表血凝块物理特性的不同方面。（R是将血放入杯中直到血块形成的时间， K是从血小板弹力图曲线分叉2mm到20mm的时间，a是从R到K的曲线斜率，MA是血小板弹力图 曲线最大的振幅）^、Κ和a评价的是接触活化到纤维蛋白原形成过程中涉及到的所有因子。 MA代表凝块最终的凝集强度，曲线逐渐变窄代表纤溶过程(李健，丛玉隆.中国医疗器械信 息，2006，12(6):1-6)。
[0004] 血液凝集是一个多种凝血蛋白级联反应的过程中，这一过程是不能人为截然分开 的，从曲线获得的参数只是曲线本身的特征，而这些参数是彼此相关的。比如，R延长意味着 凝血因子递次活化到凝血酶形成需要较长的时间，可提示凝血因子或激活剂的不足致使凝 血酶生成速度减慢。R延长能通过注射包含全部凝血蛋白的新鲜冰冻血浆(FFP)纠正。K时间 用来评估血液凝集达到某一强度(20mm的振幅）的速率。a用来评估交联纤维蛋白形成的速 度，即可溶性纤维蛋白聚合物转化为凝胶状纤维蛋白的快慢。K与a均体现纤维蛋白原的功 能和活性，受血小板影响较小。K延长与a减小提示纤维蛋白原水平低下，可通过注射冷沉淀 (含有高浓度纤维蛋白原、VIII因子、XIII因子)与FFP来纠正。MA用来评估血凝块的强度，取 决于血小板数量和功能，纤维蛋白凝集的力量在其中占比较小(吴小利，李健等.中华检验 医学杂志，2013,5(36):400-404)。凝块的粘弹性是由血小板与纤维蛋白形成的合力来决定 的，MA、K和a彼此关联。若MA减低，R、K、a正常，提示血小板数量减少或功能不全，可通过输注 血小板来纠正；MA增高提不手术期血检风险（Gurble PA，et al .Coll Cardiol ,2009,53 (8):647-658)〇
[0005] 仪器配套的进口试剂检测性能良好，但是存在肉眼可见的试剂沉降现象，与血液 预混过程中不易匀化，导致凝集反应的重现性降低，影响单一患者连续多次监测时医生的 治疗决策。另一方面进口试剂成本过高，给患者和社会，特别是那些接受心血管介入和抗栓 治疗的冠心病患者，造成了巨大的经济负担。他们在就医期间需要接受多次检查，产生数千 元的医疗费用。国产试剂仅能检测R时间，α角和MA，缺乏用于体现血液凝集级联反应的SP和 K，不能全面发挥血栓弹力图仪的技术优势。
[0006] 本发明通过研制配套试剂，利用表面激活机制激发内源凝血途径，在血栓弹力图 仪(TEG)上检测凝集过程中血块粘弹力的强弱，并转换为电子信号，最终形成凝集过程曲 线，反映凝块的形成、收缩以及溶解。 【
【发明内容】
】
[0007] [要解决的技术问题]
[0008] 本发明的目的是提供一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂。
[0009] 本发明的另一个目的是提供所述诊断试剂的制备方法。
[0010] 本发明的另一个目的是提供所述诊断试剂的使用方法。
[0011] [技术方案]
[0012] 本发明是通过下述技术方案实现的。
[0013] 本发明涉及一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂。
[0014] 所述的诊断试剂是每升含有24~400重量份三羟甲基氨基甲烷(Tris)、10~300重 量份卵磷脂、0.5~60重量份娃藻土、0.6~80重量份茶多酸与4~40重量份山梨酸钾的水溶 液。
[0015] 根据本发明的一种优选实施方式，所述的诊断试剂是每升含有99~324重量份三 羟甲基氨基甲烷、68~242重量份卵磷脂、12.5~48.0重量份硅藻土、17~65重量份茶多酚 与11~33重量份山梨酸钾的水溶液
[0016] 本发明涉及一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂的制备方法。
[0017] 所述制备方法的步骤如下：
[0018] 首先，将24~400重量份三羟甲基氨基甲烷固体溶解于水中，并使用浓度为0.1ml/ L的盐酸水溶液将三羟甲基氨基甲烷溶液的pH值调节至7.35~7.45，补充水得到浓度为 0.08~0.12mol/L的三羟甲基氨基甲烷水溶液;然后，
[0019] 将0.6~80重量份茶多酚和4~40重量份山梨酸钾溶于所述的三羟甲基氨基甲烷 水溶液中，得到含有保护剂的工作液;接着
[0020] 将含有保护剂的工作液分成两个相等体积;其中一份含有保护剂的工作液中加入 10~300重量份卵磷脂，而另一份含有保护剂的工作液中加入0.5~60重量份硅藻土;再将 它们混合均匀，得到所述的诊断试剂。
[0021] 本发明还涉及一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂的使用方法。
[0022]该方法步骤如下：
[0023]取40yL所述的诊断试剂装于带盖塑料管中，在低温下保存待用；使用前将所述的 诊断试剂升至室温，再往该塑料管中注入lmL血样，盖瓶盖，颠倒混匀，得到一种混匀血样； [0024]往安装在血栓弹力图仪上的反应杯中加入20yL浓度为以重量计2.5%CaCl 2水溶 液;再往反应杯中添加340yL混匀血样，提拉杯架，将水平杆拨到测试位置，按下启动键，记 录整个凝集过程，获得弹力图曲线；
[0025]由弹力图曲线获得的SP时间、R时间、K时间、α角与最大振幅MA数据用以判断与血 液凝集相关的血液成分活性信息。
[0026] 根据本发明的一种优选实施方式，所述的低温是温度2~8°C。
[0027] 根据本发明的另一种优选实施方式，血样上下颠倒混匀4-6次。
[0028]下面将更详细地描述本发明。
[0029] 本发明涉及一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂。
[0030] 本发明诊断试剂用于在体外激活橘橼酸钠抗凝血，当凝血因子递次激活后，纤维 蛋白原形成纤维蛋白，由于反应杯在杯架上以4度45分往复转动，使凝集曲线呈2线性的音 叉形。通过曲线分叉点到来的时间，分叉角度，和分叉曲线张开最大宽度判断与凝集相关的 血液成分的功能信息，从而了解患者止血功能或者是抗凝疗效的情况。
[0031] 所述的诊断试剂是每升含有24~400重量份三羟甲基氨基甲烷(Tris)、10~300重 量份卵磷脂、0.5~60重量份娃藻土、0.6~80重量份茶多酸与4~40重量份山梨酸钾的水溶 液。
[0032]三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多 重要用途。Tris是弱碱，在室温(25°C)下它的pKa为8.1;根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效 缓冲范围在PH7.0到9.2之间。
[0033]作为传统的接触激活剂，高岭土已成为公认的经典参照试剂，但是，对于血栓弹力 图这种需要人工混匀后检测的技术，非匀相反应将影响试剂的重现性，采用质轻、比表面积 大的硅藻土具有方法学优势。与高岭土不同，硅藻土具有特殊的多孔性构造，主要成分Si〇2 对活性组分起稳定作用，参与凝血激活时其活性与分散度及孔结构有关。本发明使用商品 硅藻土，比高岭土增加了接触面积，提高了反应效率。除了孔隙度大，吸附性能强之外，硅藻 土悬浮性能好，有利于剂型保持，不易沉降，能够较快地与血液充分混合接触，提高了反应 的重现性。
[0034] 硅藻土作为主要激活剂，对凝集曲线形成全过程都有影响，SP、R、a、K和MA各参数 均与硅藻土的剂量相关，但是没有明确的剂量效应关系，当硅藻土达到一定浓度后，凝集曲 线形不再发生显著变化。
[0035] 本发明使用的硅藻土是目前市场上销售的产品，例如由石家庄长利矿产品有限公 司以商品名长利超细硅藻土销售的硅藻土。
[0036] 卵磷脂在本发明诊断试剂中的基本作用是提供血液凝集的反应条件。卵磷脂对 SP、R、a、K和MA各参数的影响与硅藻土类似，在血液凝集过程中难以截然分开各个反应，特 别是R、Alpha、K和Μ的结果都有卵磷脂参与。
[0037] 本发明使用的卵磷脂是目前市场上销售的产品，例如由西安天正药用辅料有限公 司以商品名天正蛋黄卵磷脂销售的卵磷脂。
[0038] 茶多酚和山梨酸钾不参与凝集反应，它们主要用于使本发明诊断试剂保持其稳定 性，对SP、R、a、K和ΜΑ各参数没有显著影响。
[0039] 本发明使用的茶多酚是目前市场上销售的产品，例如由浙江东进生物科技有限公 司以商品名东进茶多酚粉销售的茶多酚。本发明使用的山梨酸钾也是目前市场上销售的产 品，例如由宁波王龙集团有限公司以商品名王龙销售的山梨酸钾。
[0040] 优选地，所述的诊断试剂是每升含有99~324重量份三羟甲基氨基甲烷、68~242 重量份卵磷脂、12.5~48.0重量份娃藻土、17~65重量份茶多酸与11~33重量份山梨酸钾 的水溶液
[0041]本发明涉及一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂的制备方法。
[0042]所述制备方法的步骤如下：
[0043] 首先，将24~400重量份三羟甲基氨基甲烷固体溶解于水中，并使用浓度为0.1ml/ L的盐酸水溶液将三羟甲基氨基甲烷溶液的pH值调节至7.35~7.45，补充水得到浓度为 0.08~0.12mol/L的三羟甲基氨基甲烷水溶液;然后，
[0044] 将0.6~80重量份茶多酚和4~40重量份山梨酸钾溶于所述的三羟甲基氨基甲烷 水溶液中，得到含有保护剂的工作液;接着
[0045]将含有保护剂的工作液分成两个相等体积;其中一份含有保护剂的工作液中加入 10~300重量份卵磷脂，而另一份含有保护剂的工作液中加入0.5~60重量份硅藻土;再将 它们混合均匀，得到所述的诊断试剂。
[0046]有关三羟甲基氨基甲烷、卵磷脂等试剂的情况已在前面描述，因此在此不再赘述。 [0047]本发明还涉及一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂的使用方法。
[0048]该方法步骤如下：
[0049]取40yL所述的诊断试剂装于带盖塑料管中，在低温下保存待用;优选地，所述的低 温是温度2~8 °C。
[0050]使用前将所述的诊断试剂升至室温，再往该塑料管中注入lmL血样，盖瓶盖，颠倒 混匀，得到一种混匀血样;优选地，血样上下颠倒混匀4-6次。
[0051 ]往安装在血栓弹力图仪上的反应杯中加入20yL浓度为以重量计2.5%CaCl2水溶 液;再往反应杯中添加340yL混匀血样，提拉杯架，将水平杆拨到测试位置，按下启动键，记 录整个凝集过程，获得弹力图曲线。
[0052]在本发明中，所述的血栓弹力图仪是目前市场上销售的产品，例如由美国 Haemonetics公司以商品名Thrombelastograph TEG5000、北京乐普医疗科技有限责任公司 以商品名西芬斯销售的产品。
[0053]由弹力图曲线获得的SP时间、R时间、K时间、α角与最大振幅MA数据用以判断与血 液凝集相关的血液成分活性信息。
[0054] SP(Split time)是从反应开始到曲线出现分叉的时间，反映了纤维蛋白原被激活 之前所需的时间。
[0055] R时间是从反应开始到曲线分叉幅度达2mm所需的时间，记录了从反应开始到纤维 蛋白凝块形成的时间，使用抗凝剂或凝血因子缺乏的患者R时间延长，血液呈高凝状态时R 缩短。
[0056] K时间是从R的终点至曲线分叉幅度达20mm时所需要的时间，反映的是血液凝集强 度达到某一水平(张幅20mm)的速率。纤维蛋白原和血小板的数量或活性增高时K缩短，抑制 血小板功能或纤维蛋白原活性的抗凝剂使K延长。
[0057] α角度是从曲线分叉点向曲线最大弧度所做的切线与水平线的夹角，反映血液凝 集的动力学特性，与Κ时间密切相关，两者影响因素相同，都反映血液凝集的速率；区别在 于:血液凝集功能极弱时，曲线张开幅度达不到20_，将得不到Κ时间。
[0058] 最大幅度ΜΑ是曲线分叉的最大幅度，即凝块产生的最大切应力系数，反映的是血 凝块的最大强度或硬度及其稳定性。ΜΑ主要受纤维蛋白原及血小板的影响，其中血小板的 作用要比纤维蛋白原大，血小板质量或数量的异常都会影响到Μ值。
[0059] 本发明诊断试剂具有下述特点：
[0060] 1、本发明诊断试剂呈悬浮性状，便于在有限次数内迅速与受试血液充分混匀，有 利于凝集反应的重现性。
[0061] 2、本发明诊断试剂的促凝活性减少了普通试剂混匀后需要静置的步骤，提高检测 效率。
[0062] 3、本发明诊断试剂稳定性有利于边远单位在检测数量少的情况下保证试剂存放 质量。
[0063] 4、本发明诊断试剂大幅降低检测成本，减轻了患者的就医负担，减少进口试剂依 赖。
[0064] 通过大量实验确定，本发明用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂与国内外使用 的诊断试剂在实际使用中具有良好的一致性，它们的相对偏差在临床意义上都是可接受 的，而本发明的诊断试剂在制备成本上显著低于国外试剂，在同等销售条件下，制造商有巨 大的利润空间。其次，通过让利于民的举措，降低检验收费，减轻患者就医负担，减少医疗保 险的支付，因此带来可观的社会效益。
[0065][有益效果]
[0066]本发明的有益效果是:本诊断试剂与国外进口的诊断试剂在实际使用中具有良好 的量值一致性，两者间的相对偏差没有统计学意义，参考区间和临床意义一致，完全适用于 临床应用，也为开发新型国产检测系统奠定了基础。另一方面，本发明诊断试剂在制备成本 上显著低于国外试剂，在同等销售条件下，制造商享有更大利润空间。其次，通过让利于民 的举措，降低检验收费，减轻患者就医负担，减少医疗保险的支付，具有重要的现实意义和 巨大的社会效益。 【【附图说明】】
[0067]图1是血栓弹力图仪检测临床血液标本实例。
[0068] 图2是静脉血凝集曲线反应时间(R)的相对偏差分布图；
[0069] 图3是静脉血凝集曲线中α角的相对偏差分布图；
[0070] 图4是静脉血凝集曲线中Κ时间的相对偏差分布图；
[0071] 图5是静脉血凝集曲线最大幅度(ΜΑ)的相对偏差分布图。 【【具体实施方式】】
[0072]通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
[0073]实施例1:本发明诊断试剂的制备 [0074]该实施例的实施步骤如下：
[0075]首先，将24重量份三羟甲基氨基甲烷固体溶解于水中，并使用浓度为0.1ml/L的盐 酸水溶液将三羟甲基氨基甲烷溶液的pH值调节至7.35，补充水得到浓度为0.08mol/L的三 羟甲基氨基甲烷水溶液;然后，
[0076] 将17重量份茶多酚和18重量份山梨酸钾溶于所述的三羟甲基氨基甲烷水溶液中， 得到含有保护剂的工作液;接着
[0077]将含有保护剂的工作液分成两个相等体积;其中一份含有保护剂的工作液中加入 300重量份卵磷脂，而另一份含有保护剂的工作液中加入37重量份硅藻土;再用水补充至1 升，将它们混合均匀，得到所述的诊断试剂；
[0078]该实施例制备的诊断试剂每升含有24重量份三羟甲基氨基甲烷、300重量份卵磷 月旨、37重量份娃藻土、17重量份茶多酸与18重量份山梨酸钾。
[0079]实施例2:本发明诊断试剂的制备 [0080]该实施例的实施步骤如下：
[0081]首先，将99重量份三羟甲基氨基甲烷固体溶解于水中，并使用浓度为0.1ml/L的盐 酸水溶液将三羟甲基氨基甲烷溶液的pH值调节至7.40，补充水得到浓度为0.10m〇l/L的三 羟甲基氨基甲烷水溶液;然后，
[0082] 将33重量份茶多酚和40重量份山梨酸钾溶于所述的三羟甲基氨基甲烷水溶液中， 得到含有保护剂的工作液;接着
[0083]将含有保护剂的工作液分成两个相等体积;其中一份含有保护剂的工作液中加入 184重量份卵磷脂，而另一份含有保护剂的工作液中加入48重量份硅藻土;再用水补充至1 升，将它们混合均匀，得到所述的诊断试剂；
[0084]该实施例制备的诊断试剂每升含有99重量份三羟甲基氨基甲烷、184重量份卵磷 月旨、48重量份硅藻土、33重量份茶多酚与40重量份山梨酸钾。
[0085]实施例3:本发明诊断试剂的制备 [0086]该实施例的实施步骤如下：
[0087]首先，将174重量份三羟甲基氨基甲烷固体溶解于水中，并使用浓度为O.lmVL的 盐酸水溶液将三羟甲基氨基甲烷溶液的pH值调节至7.45，补充水得到浓度为0.12mol/L的 三羟甲基氨基甲烷水溶液;然后，
[0088] 将80重量份茶多酚和25重量份山梨酸钾溶于所述的三羟甲基氨基甲烷水溶液中， 得到含有保护剂的工作液;接着
[0089] 将含有保护剂的工作液分成两个相等体积;其中一份含有保护剂的工作液中加入 242重量份卵磷脂，而另一份含有保护剂的工作液中加入0.5重量份硅藻土;再用水补充至1 升，将它们混合均匀，得到所述的诊断试剂；
[0090] 该实施例制备的诊断试剂每升含有174重量份三羟甲基氨基甲烷、242重量份卵磷 脂、0.5重量份娃藻土、80重量份茶多酸与25重量份山梨酸钾。
[0091] 实施例4:本发明诊断试剂的制备 [0092]该实施例的实施步骤如下：
[0093]首先，将400重量份三羟甲基氨基甲烷固体溶解于水中，并使用浓度为0.1ml/L的 盐酸水溶液将三羟甲基氨基甲烷溶液的pH值调节至7.38，补充水得到浓度为0.08mol/L的 三羟甲基氨基甲烷水溶液;然后，
[0094]将49重量份茶多酚和33重量份山梨酸钾溶于所述的三羟甲基氨基甲烷水溶液中， 得到含有保护剂的工作液;接着
[0095]将含有保护剂的工作液分成两个相等体积;其中一份含有保护剂的工作液中加入 10重量份卵磷脂，而另一份含有保护剂的工作液中加入12.5重量份硅藻土;再用水补充至1 升，将它们混合均匀，得到所述的诊断试剂；
[0096]该实施例制备的诊断试剂每升含有400重量份三羟甲基氨基甲烷、10重量份卵磷 月旨、12.5重量份娃藻土、49重量份茶多酸与33重量份山梨酸钾。
[0097]实施例5:本发明诊断试剂的制备 [0098]该实施例的实施步骤如下：
[0099]首先，将249重量份三羟甲基氨基甲烷固体溶解于水中，并使用浓度为0.1ml/L的 盐酸水溶液将三羟甲基氨基甲烷溶液的pH值调节至7.42，补充水得到浓度为0.12mol/L的 三羟甲基氨基甲烷水溶液;然后，
[0100]将65重量份茶多酚和4重量份山梨酸钾溶于所述的三羟甲基氨基甲烷水溶液中， 得到含有保护剂的工作液;接着
[0101] 将含有保护剂的工作液分成两个相等体积;其中一份含有保护剂的工作液中加入 68重量份卵磷脂，而另一份含有保护剂的工作液中加入25重量份硅藻土;再用水补充至1 升，将它们混合均匀，得到所述的诊断试剂；
[0102] 该实施例制备的诊断试剂每升含有249重量份三羟甲基氨基甲烷、68重量份卵磷 月旨、25重量份娃藻土、65重量份茶多酸与4重量份山梨酸钾。
[0103] 实施例6:本发明诊断试剂的制备
[0104] 该实施例的实施步骤如下：
[0105] 首先，将324重量份三羟甲基氨基甲烷固体溶解于水中，并使用浓度为0.1ml/L的 盐酸水溶液将三羟甲基氨基甲烷溶液的pH值调节至7.40，补充水得到浓度为0.10m 〇l/L的 三羟甲基氨基甲烷水溶液;然后，
[0106] 将0.6重量份茶多酚和11重量份山梨酸钾溶于所述的三羟甲基氨基甲烷水溶液 中，得到含有保护剂的工作液;接着
[0107] 将含有保护剂的工作液分成两个相等体积;其中一份含有保护剂的工作液中加入 126重量份卵磷脂，而另一份含有保护剂的工作液中加入60重量份硅藻土;再用水补充至1 升，将它们混合均匀，得到所述的诊断试剂；
[0108] 该实施例制备的诊断试剂每升含有324重量份三羟甲基氨基甲烷、126重量份卵磷 月旨、60重量份硅藻土、0.6重量份茶多酚与11重量份山梨酸钾。
[0109] 实施例7:本发明诊断试剂临床应用的经济效益
[0110] 某男性车祸多发伤患者在接受治疗期间，为了评估止血功能的情况先后接受4次 血栓弹力图检测，如果使用目前进口试剂，需缴纳检验费用280元X4次= 1120元，其中不计 其他损耗单纯试剂成本约190元X4次= 760元。换用同等性能的本发明试剂后，收取费用时 以国产试剂折减的方式收取90元X 4次=360元，试剂成本约60元X 4次=240元。在治疗过 程中，患者节省880元支出，医院减少试剂购置成本400元。
[0111] 试验实施例1:两种诊断试剂的偏差分析
[0112] 为了比较本发明诊断试剂与国外诊断试剂的应用性能，选取与本试剂诱导激活能 力相关的四个R、K、a、MA主要参数进行常规试验以及偏差分析，其偏差分析结果分别列于附 图2-5中，在偏差分布图中标注两种方法检测偏差的95%置信区间（1.96SD)，用于判断偏离 的具体量值。
[0113] 附图2-5中的分析结果表明：全部24例受试标本采用本发明诊断试剂测试的结果 与国外诊断试剂测试结果具有良好的一致性，所有数据都在±1.96SD范围内，同时，各参数 的相对偏差在临床意义上不影响决策。
[0114] 试验实施例2:两种诊断试剂的重复性与稳定性分析
[0115] 为了了解本发明诊断试剂的重现性，使用同一批号试剂对志愿者标本在两台 TEG5000分析仪上，以四个通道同时检测R、K、a和MA，并计算各自均值、基于给定样本标准差 和变异系数。四者的标准差分别为〇.24、0.11、2.88和1.48,在各自均值水平上不仅不影响 临床判断，考虑到其中包括仪器测试通道的差异，试剂部分的实际差异更低。
[0116] 表1:对同一来源标本测试的重复性
[0118] 将受试试剂放置于室温（22-24Γ)下，在两周内分5次同一来源匀质血浆进行检 测，每个时间点重复检测四次，计算均值、给定样本标准差和变异系数，并对20个数据进行 AN0VA统计分析，其结果列于表2中。
[0119] 表2:在室温条件下保存试剂各主要参数的稳定性
[0122] *P>0.05,差异无统计学意义
[0123]表2的结果表明本发明诊断试剂在受试期间内的性能无显著改变，稳定性良好。
【主权项】
1. 一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂，其特征在于所述的诊断试剂是每升含 有24~400重量份三羟甲基氨基甲烷、10~300重量份卵磷脂、0.5~60重量份硅藻土、0.6~ 80重量份茶多酚与4~40重量份山梨酸钾的水溶液。2. 根据权利要求1所述的诊断试剂，其特征在于所述的诊断试剂是每升含有99~324重 量份三羟甲基氨基甲烷、68~242重量份卵磷脂、12.5~48.0重量份硅藻土、17~65重量份 茶多酚与11~33重量份山梨酸钾的水溶液。3. 根据权利要求1所述诊断试剂的制备方法，其特征在于所述制备方法的步骤如下： 首先，将24~400重量份三羟甲基氨基甲烷固体溶解于水中，并使用浓度为0. lml/L的 盐酸水溶液将三羟甲基氨基甲烷溶液的pH值调节至7.35~7.45，补充水得到浓度为0.08~ 0.12mo 1/L的三轻甲基氨基甲烧水溶液;然后， 将0.6~80重量份茶多酚和4~40重量份山梨酸钾溶于所述的三羟甲基氨基甲烷水溶 液中，得到含有保护剂的工作液;接着 将含有保护剂的工作液分成两个相等体积;其中一份含有保护剂的工作液中加入10~ 300重量份卵磷脂，而另一份含有保护剂的工作液中加入0.5~60重量份硅藻土;再将它们 混合均匀，得到所述的诊断试剂。4. 根据权利要求1所述诊断试剂的使用方法，其特征在于该方法步骤如下： 取40yL权利要求1所述的诊断试剂装于带盖塑料管中，在低温下保存待用;使用前将所 述的诊断试剂升至室温，再往该塑料管中注入lmL血样，盖瓶盖，颠倒混匀，得到一种混匀血 样； 往安装在血栓弹力图仪上的反应杯中加入20yL浓度为以重量计2.5 % CaCl2水溶液;再 往反应杯中添加340yL混匀血样，提拉杯架，将水平杆拨到测试位置，按下启动键，记录整个 凝集过程，获得弹力图曲线； 由弹力图曲线获得的SP时间、R时间、K时间、α角与最大振幅MA数据用以判断与血液凝 集相关的血液成分活性信息。5. 根据权利要求3所述的使用方法，其特征在于所述的低温是温度2~8°C。6. 根据权利要求3所述的使用方法，其特征在于血样上下颠倒混匀4-6次。
【文档编号】G01N33/86GK106093440SQ201610390425
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月6日 公开号201610390425.7, CN 106093440 A, CN 106093440A, CN 201610390425, CN-A-106093440, CN106093440 A, CN106093440A, CN201610390425, CN201610390425.7
【发明人】李健, 何昆仑, 王珊珊, 徐菡
【申请人】中国人民解放军总医院