技术编号:11145359
提示:您尚未登录,请点 登 陆 后下载,如果您还没有账户请点 注 册 ,登陆完成后,请刷新本页查看技术详细信息。本发明涉及高效sgRNA筛选系统和方法。背景技术现有的sgRNA活性检测是通过针对靶基因组序列设计多条sgRNA并克隆到表达载体(瞬时表达系统/慢病毒系统)中,再通过转染/慢病毒感染的方法导入目的细胞中,荧光蛋白(GFP)/嘌呤霉素(Puro)筛选的阳性细胞提取基因组后PCR扩增靶基因组序列进而通过错配酶(CEL1或T7E1酶)将识别错配的杂合双链剪切,产物DNA电泳后经过灰度分析评价sgRNA活性,电泳显示切割条带灰度越高活性越高。或者,直接将PCR扩增靶基因组序列进行深度测序(deepseq...
注意:该技术已申请专利,请尊重研发人员的辛勤研发付出,在未取得专利权人授权前,仅供技术研究参考不得用于商业用途。
该专利适合技术人员进行技术研发参考,增加技术思路,做技术知识储备,不适合论文引用。