专利名称：：无特定病原中国对虾零换水苗种生产方法
技术领域：
：本发明属于对虾苗种生产技术，是在培育无特定病原健康苗种中实现零换水的一种技术方法。背景纟支术目前，在对虫下苗种培育中，随着各发育阶段对理化环境及斜料要求的不同，主要釆用适时满足各发育阶段的理化环境及何料需要，使幼体顺利变态发育。中国水产科学研究院黄海水产研究所王清印起草的'中国对虾养殖技术规范虫下苗培育，(NY/T5059-2001),主要是利用不同辨料满足幼体各阶段发育需要；但是在幼体培育过程中，不同斜料对水质有一定的影响，尤其是配合饲料的使用。因此，为了保持良好的水质，以满足其理化环境的要求，必须进行换水。可是，换水又易导致由进水而造成的污染，同时又把病害带入到对虫下苗种生产过程中；为了建立无特定病原(SPF)对虾种群的选育及应用(《渔业现代化》2006年第6期，17-20)研究中，建立了特定病原检疫技术，在养成和孵化前定时进行严格的病原测试，用以监测对虾养成和成熟过程中的SPF状态。该项研究其工作量非常大，因为在换水过程中，几乎要定时对每个隔离家系进行检测，另外，由于常规换水更易造成水质污染，感染某种病原，即使立即进行隔离和处理，也增加了成本，减少了出苗量。如果再检测不及时或检测不当，并导致病害相互传染，也就难以保证把病害排除在对坏苗种生产过程之外。
发明内容本发明的目的是根据幼体发育的需要对育苗桶内水体进行人工控温、调光和充气，并可根据发育阶段阶段对何料要求，采用合适和适量的动、植物斜料和优质伺料，同时通过对各家系隔离、调整各家系放养密度、利用特定病原检疫技术进行病原检测等措施，实现对虾苗种生产过程中的零换水，排除常规的水交换已导致由进水而造成的污染，同时也把病害排除在对奸苗种生产过程之外。一方面实现大规模苗种生产，另一方面可以向对虾养殖企业提供SPF亲虾和SPF苗种。本发明所采用的技术方法是1、前期的准备；2、生物饵料的培养；3、苗种的培育。1、前期的准备，包括1)、培育苗种海水消毒剂处理；2)、苗种培育池的消毒；1)、培育苗种海水消毒剂处理培育苗种海水经沙滤、过滤袋(80目)二次过滤，用有效氯达O.2-0.3x10—6的含氯消毒剂处理，经曝气水中余氯消失后方可使用；2)、苗种培育池的消毒将苗种培育池用浓度为200ppm漂白粉洗刷内壁，用消毒海水冲洗干净后晒干待用；2、生物饰料的培养，包括1)、何料池的消毒；2)、培养生物饵料海水的消毒；3)、小球藻培养液的配制；4)、金藻培养液的配制；5)、轮虫培养；6)、卣虫脱壳孵化；1)、饰料池的消毒将辨料池的四壁和底部用铁刷洗刷干净，用沙滤海水冲洗，再用水稀释的次氯酸钠(NaC10:H20=1:500左右)对四壁和底部进行消毒，然后用沙滤海水冲洗干净；2)、培养生物何料海水的消毒在每个何料池中，将经过沉淀和沙滤的海水用500目的筛绢网过滤，每立方过滤海水中加入300ml次氯酸钠溶液(有效氯含量8-12°/。，以下同)，搅拌混匀；充气68小时后，再在其中加入^i代^L酸钠30克，以中和余氯；3)、小球藻培养液的配制在上述消毒的每立方海水中依次加入溶解的尿素60克、溶解的磷酸二氢钾(KH2P03)5克、浓度10。/。的柠檬酸铁溶液lml，搅拌混匀；4)、金藻培养液的配制在每立方消毒海水中依次加入溶解的NaNO360g、溶解的KH2P044g、浓度10%的柠檬酸铁溶液50ml、溶解的维生素Bl100毫克、溶解的维生素B120.5毫克；5)、轮虫培养在温度25°C、盐度27~28%。、小球藻培养密度达到1000~1500万/ml的消毒海水池中，接轮虫50个/ml，第二天开始投喂面包酵母，每亿轮虫分4~6次投喂融化鲜酵母200g;6)、卣虫脱壳孵化闺虫卵放入盐度27~28%。海水中，每升海水加100克左右的面虫卵浸泡3~4小时；首先上述浸泡囟虫卵的每升海水加入13克固态Na0H;然后在其中加入500ml次氯酸钠溶液；迅速置于流水中冷却，不断摇动混匀；20分钟后，混合物变为红色或粉红色，将混合物倒入消毒海水中；IOO目滤袋滤出卵；用消毒海水洗涤3遍即可孵化；孵化16小时后(將化液表面的光照在2000勒)孵化出，用消毒海水洗涤3遍即可投喂；卣虫孵化温度2830。C;3、苗种的培育包括1)、亲奸的人工培育；2)、集卵；3)、幼体选优及消毒；4)、病原检测；5)、第一次幼体培育密度调整；6)、第二次幼体培育密度调整；7)、对虾出苗；1)、亲虾的人工培育亲虾入池前用福尔马林消毒，培养用水用沙滤水并经有效氯含量达0.2-0.3xl(T的含氯消毒剂处理，选择个体较大(体长15cm以上)、健壮(身体饱满、弹跳力强)、无外伤、纳精嚢洁白饱满的人工培育成熟亲虾，按照性腺发育情况的好差，分别饲养；其中，对性腺发育差(性腺为黄色在背部呈细条状)的雌虾采用摘除眼柄的方法促熟，性腺发育好(性腺扩展到背部两边，有较大侧叶)的雌坏进行精荚移植，3-4天后放入室内的育苗池中；已交尾亲虾性腺发育到第四期，直接放到育苗池中；亲虾性腺发育到第四期，即产卯开始前，每个育苗池中加入2ppmEDTA(乙二胺四乙酸)，连续充气，水温为15°C，投喂经检测不携带特定病原体的鲜活沙蚕，投喂量为对虾总体重的10%;用遮光帘遮光；2)、集卵亲虾产卵后，将亲虾捞出，用有效氯含量达O.2-0.3x10—6的含氯消毒剂处理过且不含余氯的沙滤水充分清洗坏卵，并不断沖洗去除粪便、残饰等污物，并每隔2h用搅卵器搅卵一次，充气量调到气流刚好达到水表面即可；36小时后，卵孵化成无节幼体；3)、幼体选优及消毒孵化结束后，停止充气，待死卵和污物全部沉于池底后，用虹吸法吸取表层无节幼体；再用有效碘浓度为5x1(TPVP碘消毒处理30秒，在经消毒海水清洗l-2分钟后移入育苗池内培育；4)、病原;险测利用核酸探针法和PCR法进行病原体的检测，对孵化为无节幼体的各家系取样进行病原检测，结果为阴性的家系继续培育，检测为阳性的家系弃之；在亲奸和幼体培育过程中使用的鲜活斜料，如沙蚕、轮虫、卣虫等均需抽样纟企测；5)、第一次幼体培育密度调整受精卵孵化成无节幼体后记为第一天，进行第一次幼体培育密度调整，每个家系幼体以每立方水20万尾密度放入育苗池中，温度每天升高2。C，最后稳定至24。C;第一次幼体培育密度调整后，投O.3卯m利福平，以抑制细菌的繁殖，保持良好的水质；第一次幼体培育密度调整程序充气至整育苗池成沸腾状把整池的无节幼体打匀，用200L的烧杯从中间和边上各取三杯，计取杯中数量，计算无节幼体密度后，利用外推法求出幼体总数，然后用吸管吸出所需的量，使其达到每立方水20万尾幼体的密度；在苗种培育的第6天，即由无节幼体变成蚤状幼体，投喂金藻(浓度保持在l万个细胞/ml)，到第10天后停止投喂；第7天(幼体完全变为蚤状幼体)投喂轮虫，保持在3个/ml，到第12天(即变成糠虾幼体)后停止投喂；第8天(即蚤状幼体第三天)，投喂O号颗粒饰料(用100目的网过滤)，投喂量为每万尾幼体O.lg/次(每天投喂4次)；水温保持在24。C;在苗种培育的第ll天，投喂卣虫，保持3ml—个卣虫幼体；第12天改投l号颗粒何料(用80目的网过滤)，投喂量为每万尾幼体O.15g/次(每天投喂4次)；水温保持在24。C;6)、第二次幼体培育密度调整在苗种培育的第16天，进行第二次幼体培育密度调整，即把原先育苗池中的幼体进行分池，以每立方水10万尾的密度》丈入育苗池，并继续投l号颗粒斜料(用80目的网过滤)，投喂量为每万尾幼体O.66g/次(每天4次)，投喂卣虫，保持3ml—个；水温保持在24。C;第二次幼体培育密度调整程序充气至整池成沸腾状把整池的幼体打匀，用"OL的烧杯从中间和边上各取三杯，计取杯中数量，计算幼体密度后，利用外推法求出幼体总数，然后用吸管吸出所需的量，使其达到每立方水10万尾幼体的密度；7)、出苗在苗种培育的第25天虾出苗，每天水温下降低于rc情况下，逐步降至室温出苗。本发明的特点是1、实现了在整个对奸苗种培育过程中不用换水，从而避免进水而造成的污染，切断由换水造成的病害在各家系间相互传染，并能培育出满足生产需要的苗种；2、根据幼体发育的需要，可通过人工控制满足幼体各发育阶段对理化环境及辨料种类和用量的需要；3、利用建立的特定病原检疫技术，只需在孵化后进行一次病原检测即可，既节约了成本，也增加了出苗量。具体实施例方式下面通过实例对本发明技术进行详细香又述为了排除常规的水交换已导致由进水而造成的污染，本发明提供了一种零换水健康苗种生产技术，本技术不仅能满足幼体各发育阶段对理化环境及何料要求，同时也把病害排除在对奸苗种生产过程之外，培育出无特定病原中国对奸健康苗种。本实验是在青岛市国家海洋研究中心即墨市鳌山卫引种育种中心进行的，本发明其技术方法包括1、实验前期的准备；2、生物铒料的培养；3、苗种的培育。1、实验前期的准备，主要包括培育苗种海水消毒剂处理、苗种培育桶等器具的消毒。苗种培育方式为室内200L育苗桶育苗，首先用浓度为200ppm漂白粉洗刷育苗桶内壁，用消毒海水沖洗，干净后晒干待用。消毒海水是用沙滤水并经有效氯含量达O.3x10—6的含氯消毒剂处理，经曝光水中余氯消失后使用。所有所用的器具要用水稀释的NaClO(NaC10:H20=1:500)进行消毒，然后用消毒海水冲洗，干净后晒干待用。所用器具经过有效氯的消毒处理，晒干后，将不携带任何的病原，因为次氯酸钠主要是通过它的水解形成次氯酸，次氯酸再进一步分解形成新生态氧[O],新生态氧的极强氧化性使菌体和病毒的蛋白质变性，从而使病原微生物致死。2、生物斜料的培养，包括1)、斜料池的消毒；2)、培养生物何料海水的消毒；3)、小球藻培养液的配制；4)、金藻培养液的配制；5)、轮虫培养；6)、卣虫脱壳孵化。1)、斜料池的消毒用铁刷将斜料池的四壁和底部刷干净，再用沙滤海水冲洗干净。用水稀释的次氯酸钠(NaC10:H20=1:500左右)对四壁和底部进行消毒，然后用沙滤海水冲洗干净。这样以来饰料池内的病原樣吏生物也将被杀死。2)、培养生物何料海水的消毒在每个饰料池中，将3m'经过沉淀和沙滤的海水用500目的筛绢网过滤，加入900ml次氯酸钠溶液(有效氯含量12°/。，以下同)，搅拌混匀。充气6~8小时后，再在其中加入硫代硫酸钠90克，以中和余氯。如果不中和余氯将因为氯的含量过高，直接杀死接种到其中的生物饵料，并影响幼体的发育。3)、小球藻培养液的配制在31113上述消毒的海水中依次加入溶解的尿素180克、溶解的磷酸二氬钾(KH2P03)15克、浓度10%的柠檬酸铁溶液30ml,搅拌混匀。这里加入的尿素、磷酸二氬钾是用蒸馏水溶解后，直接均匀泼到3m"肖毒的海水中。而柠檬酸铁是预先用电炉把水煮沸然后加入柠檬酸铁配成浓度10%的柠檬酸铁溶液。配制小球藻培养液，其尿素中的N、磷酸二氬钾中的P、柠檬酸铁中的Fe都是小球藻生长所需的营养。4)、金藻培养液的配制在lm^消毒海水中依次加入溶解的硝酸钠(NaN03)60g、溶解的磷酸二氢钾(KH2P04)4g、浓度10。/。的柠檬酸铁溶液50ml、100毫克溶解的维生素Bl、0.5毫克溶解的维生素B12。NaN03、KH2P04、维生素Bl和B12也是用蒸馏水溶解后，直接均匀泼到lm"肖毒的海水中；配制的金藻培养液，其硝酸钠中的N、磷酸二氢钾中的P、柠檬酸铁中的Fe以及维生素Bl和B12都是金藻生长所需的营养。5)、轮虫培养在温度25。C、盐度28%。、小球藻培养密度达到1500万/ml的消毒海水池中，接轮虫50个/ml,第二天开始投喂面包酵母，l亿轮虫分6次投喂鲜酵母200g(投喂前先在少量水中将水冻的酵母块融化，充分搅拌成酵母悬液，然后施入培养轮虫的水体)。小球藻主要作为轮虫的饰料，加入酵母主要是满足轮虫繁殖的营养需要。6)、卣虫脱壳孵化在20L塑料袋中，200克卣虫加到2000ml盐度为28%。海水中浸泡4小时；首先加入固态NaOH26克；然后加入1000ml次氯酸钠溶液；迅速置于流水中冷却，不断摇动混匀；20分钟后，混合物变为红色或粉红色，将混合物倒入水中；IOO目滤袋滤出卵；用消毒海水洗涤3遍即可孵化。孵化16小时(孵化液表面的光照在2000勒)后將化出，用消毒海水洗涤3遍即可投喂。卣虫將化温度3(TC。3、苗种的培育，包括1)、亲虾的人工培育；2)、集卵；3)、幼体选优及消毒；4)、病原检测；5)、第一次幼体培育密度调整；6)、第二次幼体培育密度调整；7)、对虾出苗。1)、亲蚱的人工培育亲虾入池前用福尔马林消毒，培养用水用沙滤水并经有效氯含量达0.3xl(T'的含氯消毒剂处理。选择个体较大(体长15cm以上)、健壮(身体饱满、弹跳力强)、无外伤、纳精嚢洁白饱满的人工培育成熟亲虫下；雌虾性腺发育过程中，根据发育情况的好差，分为差、好、较好、最好四种，其对应发育四个时期性腺的外部特征黄色—褐色—黑褐色-墨黑色，黄色期时性腺在背部呈细条状，褐色期性腺在背部条状较粗，至黑褐色期性腺更粗，在靠近头胸曱处向两侧扩展，出现侧叶，墨黑色期卵巢宽大，性腺发育良好，扩展到背部两边，有较大侧叶。按照性腺发育情况，分别伺养；其中，对性腺发育差的雌奸采用摘除眼柄的方法促熟；性腺发育好的雌虫下进行精荚移植，4天后放入室内的育苗桶(200L)中，水量为150L。已交尾亲虾性腺发育到第四期，直接放到育苗桶中。雌虾性腺发育到第四期，即产卵开始前，每个桶中加入0.3gEDTA(乙二胺四乙酸)，加入EDTA主要目的是络合海水中的重金属离子，因为重金属离子对受精卵的孵化有较大的影响。连续充气，水温为15°C，投喂经检测不携带特定病原体的鲜活沙蚕，投喂量为对奸总体重的10%。2)、集卵亲虾产卵后，将亲奸捞出，用有效氯含量达O.3xl(T的含氯消毒剂处理过且不含余氯的沙滤水充分清洗虾卵，并不断沖洗去除粪便、残倂等污物，并每隔2h用搅卵器搅卵一次，充气量调到气流刚好达到水表面即可。搅卵的目的是防止受精卵间互相积压，便于受精卵的孵化。而如果充气量太大将导致卵破裂。水温15。C,36小时后，受精卵孵化成无节幼体。3)、幼体选优及消毒孵化结束后，停止充气，待死卵和污物全部沉于桶底后，用虹吸法吸取表层无节幼体。再用有效硪浓度为5x10—卞VP碘消毒处理30秒，在经消毒海水清洗2分钟后移入育苗桶内培育。用遮光帘遮光，主要在无节幼体期光线不要太强，以便无节幼体均匀分布到育苗桶水体内。因为无节幼体有趋光性，如果光线太强，它们将集群，不利于其生长和变态。4)、病原;险测利用核酸探针法和PCR法进行病原体的检测，对孵化为无节幼体的各家系取样进行病原检测，结果为阴性的家系继续培育，检测为阳性的家系弃之。在亲奸和幼体培育过程中使用的鲜活饰料，如沙蚕、轮虫、卣虫等均需抽样检测。进行病原的检测是为了彻底去除带病幼体，并切断其他病源的传播途径。5)、第一次幼体培育密度调整受精卵孵化成无节幼体后记为第一天，进行第一次幼体培育密度调整，每个家系取3万尾放入育苗桶中，温度每天升高2。C,最后稳定到24。C。第一次幼体培育密度调整后，每桶投o.03g利福平，以抑制细菌的繁殖，保持良好的水质。第一次幼体培育密度调整程序充气至整桶成沸腾状把整桶的无节幼体打匀，用200L的烧杯从中间和边上各取三杯，计取杯中数量，计算无节幼体密度后，利用外推法求出幼体总数，然后用吸管吸取3万尾幼体转移至另一育苗桶。培育密度调整是根据水体的大小调节幼体的数量，这样即利于幼体的生长发育，又利于保持幼体生长发育的水质环境。在苗种培育的第6天为1.l期(见附表l),即由无节幼体变成蚤状幼体，投喂金藻(金藻在育苗桶中浓度保持在l万个细胞/ml)，到第10天后停止投喂；第7天为1.2期(幼体完全变为蚤状幼体)投喂轮虫，保持在3个/ml，到第12天(即变成糠坏幼体)后停止投喂；第8天(即蚤状幼体第三天1.3期)，投喂O号颗粒辨料(用100目的网过滤)，每桶投喂量为0.3g/次(每天4次)。水温保持在24。C。各种斜料的投喂量是根据幼体的数量进行的调整，这样的投喂量，整个育苗过程中，不需要换水。在苗种培育的第ll天(即1.6期)，投喂卤虫，保持3ml—个卤虫幼体；第12天(即1.7期)改投l号颗粒何料(用80目的网过滤)，每桶投喂量为0.45g/次(每天4次)(具体投喂是时间和投喂量详见附表l)。水温保持在24°C。6)、第二次幼体培育密度调整在苗种培育的第16天(即2.l期)，进行第二次幼体培育密度调整，即把原先桶中的幼体进行分桶，每桶放入l.5万尾，并继续投l号颗粒饼料(用80目的网过滤)，每桶投喂量为O.99g/次(每天4次)，投喂卣虫，保持3ml一个；水温保持在24。C。进行第二次幼体培育密度调整，也是根据幼体的变态后水体对幼体的容纳量和何料需要量进行的调整，这样的操作和投喂量，也保证了整个育苗过程中的零换水。第二次幼体培育密度调整程序充气至整桶成沸腾状把整桶的幼体打匀，用200L的烧杯从中间和边上各取三杯，计取杯中数量，计算幼体密度后，利用外推法求出幼体总数，然后用吸管吸取l.5万尾幼体转移至另一育苗桶。7)、出苗在苗种培育的第25天(即3.0期)虫下出苗，每天水温下降低于rc情况下逐步降至室温出苗。苗种经检测无特定病原率达100%,苗种规格为1.01.2cm,单位水体产量10万尾。表1无特定病原中国对奸零换水苗种培育的技术操作规程<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注a)、幼体识别E表示卵；N表示无节幼体；Z表示蚤状幼体；M表示糠虾；P代表仔虾;b)、饰料投喂时间早5:00;10:00;下午4:00;晚10:00;c)、配合饲料为思福德(Seafood)生产的幼体配合詞料。总之，本技术生产全程均是在无特定病原情况下的生产工艺。本技术经生产应用，对奸苗种生产无特定病原率达100%，苗种规格为1.0~1.2cm,单位水体产量高达10万尾，技术操作规程简单，适合应用于大规模苗种生产，并可以向对奸养殖企业提供SPF亲奸和SPF苗种。权利要求1、一种无特定病原中国对虾零换水苗种生产方法，其特征在于它的方法，包括(1)、前期的准备；(2)、生物饵料的培养；(3)、苗种的培育；(1)、前期的准备，包括A、培育苗种海水消毒剂处理；B、苗种培育池的消毒；A、培育苗种海水消毒剂处理培育苗种海水经沙滤和80目过滤袋二次过滤，用有效氯达0.2-0.3×10-6的含氯消毒剂处理，经曝气水中余氯消失后方可使用；B、苗种培育池的消毒将苗种培育池用浓度为200ppm漂白粉洗刷内壁，用消毒海水冲洗干净后晒干待用；(2)、生物饵料的培养，包括A、饵料池的消毒；B、培养生物饵料海水的消毒；C、小球藻培养液的配制；D、金藻培养液的配制；E、轮虫培养；F、卤虫脱壳孵化；A、饵料池的消毒将饵料池的四壁和底部用铁刷洗刷干净，用沙滤海水冲洗，再以NaClO∶H2O＝1∶500稀释的次氯酸钠对四壁和底部进行消毒，然后用沙滤海水冲洗干净；B、培养生物饵料海水的消毒在每个饵料池中，将经过沉淀和沙滤的海水用500目的筛绢网过滤，每立方过滤海水中加入300ml有效氯含量8-12％的次氯酸钠溶液，搅拌混匀；充气6～8小时后，再在其中加入硫代硫酸钠30克，以中和余氯；C、小球藻培养液的配制在上述消毒的每立方海水中依次加入溶解的尿素60克、溶解的磷酸二氢钾5克、浓度10％的柠檬酸铁溶液1ml，搅拌混匀；D、金藻培养液的配制在每立方消毒海水中依次加入溶解的NaNO360g、溶解的KH2PO44g、浓度10％的柠檬酸铁溶液50ml、溶解的维生素B1100毫克、溶解的维生素B120.5毫克；E、轮虫培养在温度25℃、盐度27～28‰、小球藻培养密度达到1000～1500万/ml的消毒海水池中，接轮虫50个/ml，第二天开始投喂面包酵母，每亿轮虫分4～6次投喂融化鲜酵母200g；F、卤虫脱壳孵化卤虫卵放入盐度27～28‰海水中，每升海水加100克左右的卤虫卵浸泡3～4小时；首先上述浸泡卤虫卵的每升海水加入13克固态NaOH；然后在其中加入500ml有效氯含量8-12％的次氯酸钠溶液；迅速置于流水中冷却，不断摇动混匀；20分钟后，混合物变为红色或粉红色，将混合物倒入消毒海水中；100目滤袋滤出卵；用消毒海水洗涤3遍即可孵化；孵化液表面的光照在2000勒，孵化16小时孵化出，用消毒海水洗涤3遍即可投喂；卤虫孵化温度28～30℃；(3)、苗种的培育包括A、亲虾的人工培育；B、集卵；C、幼体选优及消毒；D、病原检测；E、第一次幼体培育密度调整；F、第二次幼体培育密度调整；G、对虾出苗；A、亲虾的人工培育亲虾入池前用福尔马林消毒，培养用水用沙滤水并经有效氯含量达0.2-0.3×10-6的含氯消毒剂处理，体长15cm以上、身体饱满、弹跳力强、无外伤、纳精囊洁白饱满的人工培育成熟亲虾，按照性腺发育情况的好差，分别饲养；其中，对性腺发育差即性腺为黄色在背部呈细条状的雌虾采用摘除眼柄的方法促熟，性腺发育好即性腺扩展到背部两边，有较大侧叶的雌虾进行精荚移植，3-4天后放入室内的育苗池中；已交尾亲虾性腺发育到第四期，直接放到育苗池中；亲虾性腺发育到第四期，即产卵开始前，每个育苗池中加入2ppm乙二胺四乙酸，连续充气，水温为15℃，投喂经检测不携带特定病原体的鲜活沙蚕，投喂量为对虾总体重的10％；用遮光帘遮光；B、集卵亲虾产卵后，将亲虾捞出，用有效氯含量达0.2-0.3×10-5的含氯消毒剂处理过且不含余氯的沙滤水充分清洗虾卵，并不断冲洗去除粪便、残饵等污物，并每隔2h用搅卵器搅卵一次，充气量调到气流刚好达到水表面即可；36小时后，卵孵化成无节幼体；C、幼体选优及消毒孵化结束后，停止充气，待死卵和污物全部沉于池底后，用虹吸法吸取表层无节幼体；再用有效碘浓度为5×10-6PVP碘消毒处理30秒，在经消毒海水清洗1-2分钟后移入育苗池内培育；D、病原检测利用核酸探针法和PCR法进行病原体的检测，对孵化为无节幼体的各家系取样进行病原检测，结果为阴性的家系继续培育，检测为阳性的家系弃之；在亲虾和幼体培育过程中使用的鲜活饵料，如沙蚕、轮虫、卤虫等均需抽样检测；E、第一次幼体培育密度调整受精卵孵化成无节幼体后记为第一天，进行第一次幼体培育密度调整，每个家系幼体以每立方水20万尾密度放入育苗池中，温度每天升高2℃，最后稳定至24℃；第一次幼体培育密度调整后，投0.3ppm利福平，以抑制细菌的繁殖，保持良好的水质；第一次幼体培育密度调整程序充气至整育苗池成沸腾状把整池的无节幼体打匀，用200L的烧杯从中间和边上各取三杯，计取杯中数量，计算无节幼体密度后，利用外推法求出幼体总数，然后用吸管吸出所需的量，使其达到每立方水20万尾幼体的密度；在苗种培育的第6天，即由无节幼体变成蚤状幼体，投喂金藻，浓度保持在1万个细胞/ml，到第10天后停止投喂；第7天幼体完全变为蚤状幼体，投喂轮虫，保持在3个/ml，到第12天即变成糠虾幼体后停止投喂；第8天即蚤状幼体第三天，投喂0号颗粒饵料，用100目的网过滤，投喂量为每万尾幼体0.1g/次，每天投喂4次；水温保持在24℃；在苗种培育的第11天，投喂卤虫，保持3ml一个卤虫幼体；第12天改投1号颗粒饵料，用80目的网过滤，投喂量为每万尾幼体0.15g/次，每天投喂4次；水温保持在24℃；F、第二次幼体培育密度调整在苗种培育的第16天，进行第二次幼体培育密度调整，即把原先育苗池中的幼体进行分池，以每立方水10万尾的密度放入育苗池，并继续投1号颗粒饵料，用80目的网过滤，投喂量为每万尾幼体0.66g/次，每天4次，投喂卤虫，保持3ml一个；水温保持在24℃；第二次幼体培育密度调整程序充气至整池成沸腾状把整池的幼体打匀，用200L的烧杯从中间和边上各取三杯，计取杯中数量，计算幼体密度后，利用外推法求出幼体总数，然后用吸管吸出所需的量，使其达到每立方水10万尾幼体的密度；G、出苗在苗种培育的第25天虾出苗，在每天水温下降低于1℃情况下，逐步降至室温出苗。全文摘要一种无特定病原中国对虾零换水苗种生产方法，其操作程序是首先首先是前期的准备，主要包括培育苗种海水消毒剂处理、苗种培育桶等器具的消毒和生物饵料的培养；其次进行亲虾的人工培育、集卵和幼体选优及消毒；同时用特定病原检疫技术对使用的鲜活饵料和集取的无节幼体进行严格的病原测试，结果阴性者继续培育；然后调整各家系放养密度，人工控制环境条件，并根据发育阶段阶段对理化环境及饵料要求，采用合适和适量的动、植物饵料和优质饲料。本技术操作规程简单，适合应用于大规模苗种生产，对虾苗种生产无特定病原率达100％，向对虾养殖企业提供SPF亲虾和SPF苗种或高健康苗种。文档编号A01K61/00GK101185426SQ20071011501公开日2008年5月28日申请日期2007年11月20日优先权日2007年11月20日发明者杰孔,张天时,生栾,坤罗申请人:中国水产科学研究院黄海水产研究所