新颖的南瓜属植物的制作方法

专利名称：：新颖的南瓜属植物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及抗病毒的新颖的南瓜属(Ozcw6/")植物。本发明还涉及所述植物的种子和部分，例如果实。本发明还涉及制备和应用这些植物的方法。
背景技术：
：南瓜属是葫芦科的成员，葫芦科(0/cw6/"ceae)包括约90属和700-760种，大部分是热带植物。南瓜属包括四个主要种西葫声(/印o)、ar《7r卿ei"亂倭瓜(迈osc力"s)和夢瓜(鹏i/咖)；一个次要种无花果叶瓜(/7c//W/a);以及一些野生种。南瓜属的主要经济作物是南瓜(squash)和圆橙南瓜(pumpkin)。南^圆橙南瓜是不同的，因为它们代表同一种作物的几个种。它们包括许多夏和冬可食用类型以及观赏葫芦。夏南>^是西葫芦(O/cwW"/e;w),而冬南瓜可以是西葫芦(如'小青南瓜(Acorn)')、倭瓜(C('灰胡杉匕(Butternut)')、灰軒南瓜(C.肌>&)('曰本^泉(JapanesePie)')或夢瓜鹏,/鹏)。Hubbard'等)。杰克灯(Jack'0'Lantern)型圆橙南瓜是西葫声，而市售的罐装圆橙南;^馅酱^M^瓜(如'LibbySelect')或笋瓜。NK58(K)制得。灰籽南#无花果叶瓜(C/7c//W/a)在墨西哥和中南美洲国家^皮作为食物。种植南瓜和圆橙南瓜通常是取其果实，夏南M未成熟时收获而冬南^圆橙南;^成熟时JliLIL夏南瓜最经常被新鲜食用，而冬南瓜可以4絲数月。夏南;^冬南^可以被罐装并冷冻出售。已经有报道，在1979-1981年间每年全球南瓜属植物的产量是5,256,000公i，屯，种植面积是539,000英亩。几种类型的病毒可影响南瓜属植物作物，例如小西葫声黄花叶病毒(ZucchiniYellowMosaicVirus,Z丽)、西;^^叶病毒(WatermelonMosaicVirus,丽)和番木瓜环斑病毒(PapayaRingspotVirus,PRSV)。黄;M^叶病毒(CucumberMosaicVirus,CMV)属于雀麦花叶病毒科("r咖o".r油e)黄>^4￡叶病毒属(Cwc咖OF/r^e)(Roossinck(2002)JournalofVirology76:3382-3387),该病毒也影响南瓜属植物作物。这些病毒对南瓜属作物会造成广泛的破坏，一直需要控制它们的新方法。因此，未实现的需求是针对南瓜属植物中病毒的新的遗传抗性，特别是针对南瓜属植物中CMV的新的抗性。
发明内容本发明实现如下的未实现的需求，即针对南瓜属植物中的病毒的新的抗性，特别是如下的未实现的需求，即针对南瓜属植物中CMV的新的抗性。为了实现这些需求，本发明提供新型南瓜属植物，所述植物含有赋予其病毒抗性的新基因，特别是CMV的抗性。被指定为Cw-2的所述新基因是在Cvar.Seminolepumpkin中被意夕卜发现的，并JLitit^拯救(embyorescue)和回交技术(backcrosstechnique),皮成功地转移到其他南瓜属植物。所述C迈r-2基因位于C/z7cw7A3"var.Seminolepumpkin或自交系90-3588(^RJj性的种子以NCIMB41369的编号保藏)中赋予CMV抗性的基因的染色体基因座上。因此，才娥本发明的植物是含有C-2基因的植物。所述C鮮-2基因赋予南瓜属植物高水平的病毒抗性。C迈7-2基因赋予的所述抗性是稳定的并且可以被转移至其他的南瓜属植物，例如对所述病毒易感的南瓜属植物。在一个实施方案中，所述fiz77—2基因可以从C/zK^cA3favar.Seminolepumpkin的植林中获得。在一个实施方案中，所述0^-2基因可以从90-3588系的植林获得。在一个实施方案中，所述C迈P^基因是显性的。在一个实施方案中，根据本发明的CMV抗性是单基因的。在一个实施方案中，本发明植物是含有C-2基因的南瓜属植物，其中所述南瓜属植物不是C迈o"As"var.Seminolepumpkin的^t株。在一个实施方案中，本发明植物不是倭^4i物。在一个实施方案中，本发明植物是西葫,的植林、夢瓜的才l^Ml灰籽南瓜的,。在一个实施方案中，本发明植物是南;^4t物。在一个实施方案中，本发明植物AX南;Mt物、冬南;物或圆橙南;Mt物。在一个实施方案中，本发明;ti物是西葫芦(C/7印o厶)的植林。在一个实施方案中，本发明植物是C-2基因纯合的。本发明还提供本发明的植物的种子和部分(例如果实)，以及制备和应用这些植物的方法。本发明的C鮮-2基因还可以与其他抗性方法结合以进一步增加对所述病毒的抗性，例如水平抗性(horizontalresistance)。本发明使栽培者预防或减少所述病毒对他们的作物造成的破坏，并JLi^使他们的抗性方法的灵活性提高。从而，获得更高的产量并且可以在更长的时间内M果实。因Jt，^^发明提供一种含有C迈p^基因的南;^属植物，其中如果所述南瓜属植物与自交系90-3588的检眛杂交，所述杂交产生的100y。的Fl植抹是抗CMV的，并且a)如果所述南瓜属植物是C-2基因纯合的，100%的所述Fl*产生100。/。的F2子代^^L;^CMV;或者b)如果所述南瓜属植物是C胖-2基因杂合的，50%的所述Fl植株产生100%的F2代ifc^抗CMV,并且50%的所述Fl植林产生3:1比例的抗CMV的F2子代植#易感CMV的F2子4乂ii林，其中所述植物不是C/z7oycA^acv.SeminoleP咖pHn的植林。在一个实施方案中，所i^t物不是倭;Wi物。在一个实施方案中，所述植物是西葫芦植抹、夢^t^灰籽南;^眛，在一个实施方案中，西葫芦(C;e;wL.)植抹。在一个实施方案中，所述fiz^-2基因可以从61边cwc力a&cv.SeminolePumpkin的植絲者从90-3588系(其^C4性的种子以NCIMB41369的编号保藏)的植抹获得。在一个实施方案中，所述植物是C鞭-2基因纯合的。在一个实施方案中，所述植物是自交系、杂种或双单倍体(dihaploid)。在一个实施方案中，所述植物^^雄性不育的。本发明还提供一种高度抗CMV的西葫,植物，其中所述植物含有a^-2基因。在一个实施方案中，所述植物是西葫声(C/7e/w厶)的植林。在一个实施方案中，所述Of—2基因可以从C边oyc力a^3cv.Se迈inolePumpkin的植株或者从90-3588系(其^JjIi的种子以NCIMB41369的编号保藏)的;|4#^得。在一个实施方案中，所述植物是0p^基因純合的。在一个实施方案中，所述植物是自交系、杂种或双单倍体。在一个实施方案中，所g物是雄性不育的。在一个实施方案中，所述植物经本文描述的等位性测试(allelictest)鉴定和8限定。本发明还提供自交系90-3588(其4仏性的种子以NCIMB41369的编号保藏)的南瓜属本发明还提供上文任一种南瓜属植物的种子和部分。在一个实施方案中，所述部分是细胞、花粉、胚珠或果实。本发明还提供一种产生南瓜属植物果实的方法，包括种^Ji文任一种南瓜属植物直至产生果实；并M所述果实。本发明还提供一种产生南瓜属植物种子的方法，包括种^Ji文任一种南瓜属植物；使所述南瓜属植物自花授粉；并从所述南瓜属植物>11^种子。本发明还提供一种无性繁殖南瓜属植物的方法，包括收集上文任一种南瓜属植物的组织；栽培所述组织以获得增殖的枝；并使所述增殖枝生根以获得生根的小植林。本发明还提供一种产生含有Cw-2基因的南瓜属植物的方法，包括上文任一种南瓜属植物与缺乏G^-2基因的南瓜属植物杂交；从所述杂交获得子代逾眛；并在所述子代中选择含有C-2基因的南瓜属植林。本发明还提供通iih文方法可获得的含有C-2基因的南瓜属植物。本发明还提供一种转移C-2基因至缺4^斤i^因的南瓜属植物的方法，包括上文任一种南瓜属植物与缺乏fi^-2基因的南瓜属植物杂交；>^^斤述杂交获得子代植林；并在所述子代中选择含有C-2基因的南瓜属植林。本发明还提供通过上文方法可获得的含有Ozp^基因的南;^属植物。本发明还提供一种赋予南瓜属植物CMV抗性的方法，包括上文任一种南瓜属植物与易感CMV的南瓜属植物杂交；^^斤述杂交获得子4^i林；并在所述子代中选择抗CMV的南瓜属植林。本发明还提供通过上文方法可iy寻的抗CMV的南瓜属植物。本发明还提供一种产生杂种种子的方法，包括上文任一种植物与另一种自交系的員杂交，其中所述植物是自交系；并4级所述杂交产生的种子。本发明还提供通过上文方法产生的杂种种子，其中所述杂种种子含有C-2基因。本发明还提供一种产生含有C/z^-2基因的南瓜属植物的方法，包括获得一种61/z7oyc力"acv.SeminolePumpkin的植抹；所述C銜5"c力"acv.SeminolePu即kin的植林与缺乏C郝-2基因的南瓜属植物杂交;拯救所述杂交形成的胚；^M^斤i^再生^tt林；并选择抗CMV的^L抹。本发明还提供通itJi文方法可获得的南瓜属植物，其中所述植物含有C-2基因。定义基因遗传的单位。基因位于染色体的固a因座上。基因可以以被称作等位基因的系列的替代形式存在。基因可以控制或赋予性状，例如对疾病的抗性。性状特征或表型，例如对疾病的抗性。性状可以以显性或隐性的方式遗传。性状可以是单基因的或多基因的，或者在某些情况下也可以是一个或多个基因与环境相互作用的结果。例如，性状是对一种或多种病毒(如CMV)的抗性。fiz^-2基因赋予南瓜属植物CMV抗性的基因，位于自交系90-3588或C.迈(^c力a^var.Seminolepumpkin中赋予CMV抗性的基因的染色#^基因座。"测试者(tester)"植林用于在遗传上表征被测试植抹中基因或性状的植林。通常，所述被测试植抹与"测试者"植林杂交并统计性状在所述杂交的子^Rit林中的分离比(segregationratio)。等位基因(allele):成对或系列形式的基因中的一个，由于这些基因位于同源染色体的相同基因座，它们在遗传上是互替的。基因座(locus):染色体上的区域，通常包含一个基因，例如控制或赋予一种性状的基因。抗性基于植物基因型的生物学机制，植物通过抗性对抗性植抹中的疾病表现出无症状、微症状或减轻的症状，作为比较的是没有抗性的植抹(易感植林)，其在相同的时间被同样的疾病感染，例如在相同的生产周期(productioncycle)和同样的生产设备(productionunit)中。因此，抗性是优选的才直物减少病原体形成的能力(见例如Robinson,R.A.，1969:ReviewAppliedMycology48，593-606)。CMV抗性限定为植物减少发生CMV爆发的能力，而在同时易感植物被CMV感染，例如在相同的生产周期和同样的生产i殳备中。单基因的由一个单一基因座所决定。多基因的由多于一个基因座所决定。显性的产生一种在杂合或纯合状态下完全的表型显示。然而，在某些情况下可以观察到基因的剂量效应，在纯合状态下产生的表型可以比在杂合状态下略J微强并更加可重复。隐性的M纯合状态显示。遗传连锁(Geneticlinkage):由于基因位置在同一个染色体相近形成的遗传特征的关联。通过多个基因座之间(厘摩(centi-Morgan)，cM)的重组百分率(即重组频率)度量。等基因的除以下一点之外植物在遗传上是相同的，即在赋予性状的基因座或异源DM序列上可以存在或者不存在一个基因。标记辅助选择(markerassistedselection):是指通过检观做物的一个或多个核酸在一种或多种植物中选择一种或多种所需性状的方法，其中所述核酸与所述所需性状关联。双单倍体通过单倍体植林(单染色体组)倍增(例如通过花药培养或小孢子培养)形成的完全纯合的植林。本文使用的术语"植物(植林)"包括植物细胞、植物原生质体、组织培养的植物细胞(能够再生成南瓜属植林)、植物胼胝体、植物簇(plantclump)以4植;^MU直林部分中的完整的植物细胞；所述植抹部分例如花粉、花、种子、果实、叶等等。再生(Regeneration):是指^MJ且织培养发育成植抹。单基因转换的(SingleGeneConverted)(转换(Conversion)):是指通过叫作回交的植物育种技术培育的植物，其中除了单基因被通过回交技术或通过遗传工程转移至一个变种中O卜，所述变种的所有预期的形态和生理特征基本上都在所述子代中复现。具体实施例方式本发明实现如下的未实现的需求，即针对南瓜属植物中的病毒的新的抗性，特别是如下的未实现的需求，即针对南瓜属植物中CMV的新的抗性。为了实现这些需求，本发明提供新型南瓜属植物，所iiit物含有赋予其病^^性的新基因。M地，本发明的新基因赋予所述南瓜属植物CMV的抗性。本发明还提供本发明的植物的种子和部分，例如果实。本发明还提供制备和应用这些植物的方法。本发明的植物含有赋予所述植物CMV抗性的并被命名为fl^-2的基因。所述Gzy2基因是在C/BoscAafavar.Seminolepumpkin(在本文中也作为C迈^fc力a&cv.SeminolePumpkin)中,皮意外发现的，并且已经净皮转移到其他的南瓜属植物中。SeminolePumpkin是一种冬南瓜，倭瓜种。这种南瓜来自东南美国(SoutheasternUnitedStates)，其最初的名字'Chassahowitska，的意思是"悬圓橙南瓜(hangingpumpkin)"。SeminolePumpkin^i林可以作为^^藤沿树生长，圆橙南瓜的果实从枝上垂下，为家畜所不及并腐烂。这种冬南瓜的叶是圓的、微浅裂的、颜色中绿至深绿，在较老的叶上有灰白色斑。它的藤上面悬着钟形、膏质的果实，果实膨;Ut的球茎的宽度约10至12cm。果实一般和"灰胡桃(Butternut)"类似，但更甜并且有结实的、厚的、橙色的果肉。它的花为橙色并且比较大。如大多数的南瓜属植物一样，该植物是，同林并JU^和^^都A^全可育的。所述C迈p^基因被通it^^L和回交技^移至^的南瓜属植物中。首先，SeminolePumpkin通itA工的自花授粉自交繁歹li个循环。然后，所述F5子代与专利的黄色直颈型(yellowstraightnecktype)自交系杂交，从而在西葫芦和倭瓜之间进^^t间杂交。胚拯救技#应用于M些植物的杂交和自授粉种子中获得少数可育*。详细的步骤在下文的实例1中描述。获得种间的子代并应用到几个回交育种程序中，从而产生一系列的不同CMV抗性的群，所述CMV抗性源自Cizcwc力a^var.Seminolepumpkin。所述C抓-2基因赋予的抗性是稳定的，并且可以被转移至絲的南瓜属植物，特别是易感所述病毒的其他南瓜属植物。因此，在一个实施方案中，所述C迈r-2基因可以从G边o"力Wavar.Seminolepumpkin的植林获得，并JL^发明公开一种用于产生抗.CMV的南瓜属植物的方法,包括获得C迈osc力"avar.Seminolepumpkin的植林；把所述C边o"力a^var.Seminolepumpkin植林与易感CMV的南;^属植物杂交；拯救所述杂交产生的胚；>^^斤，再生,；以及选#^抗CMV的植林。在一个实施方案中，本发明还公开可通过这种方法获得的南瓜属植物，其中所，物含有Gz^-2基因。在一个实施方案中，测试并评估所述CMV抗性，如下文中实例2中的描述。然而，本领域技术人员也能够使用其他的方案或方法以确定所述病毒的抗性。例如，也可以测定病毒RNA和蛋白，例如如以下文献中描述的Kaplanetal.(1997)Virology230:343-349和Mayersetal.(2005)MPMI18:428-434。也可以进行叶压印迹(leaf-pressblotting),如例如以下文献中的描述Kaplanetal.(1997)Virology230:343-349。所述C-2基因赋予针对来自不同M的多种CMV林的抗性。例如，所述6Jz^-2基因赋予南;^属植物对CMV的Florida林(UniversityofFlorida,Gainsville，Florida)的抗性。所述C/z^-2基因iB^予南瓜属植物对CMV的Californial^j^(Californiap印perstrain)和对CMV-TL林的抗性，后者是CMV的欧洲林(INRA，VirologyD印artment,Montfavet84，France)。也可以测试CMV的其他抹，如本文所描述。在一个实施方案中，本发明的植物是C-2基因纯合的。在一个实施方案中，所述0^-2基因是显性的。在一个实施方案中，才緣本发明的CMV抗性是单基因的。在一个实施方案中，根据本发明的CMV抗性是单基因的和显性的。自交系90-3588是含有才緣本发明的C-2基因的4谋性的南瓜属系，它在2006年1月11日以编号NCIMB41369被保藏于NCIMB，AberdeenAB219YA，Scotland,UK。系90-3588的植林是C抓-2基因纯合的。在一个实施方案中，所述a^-2基因可以从系90-3588的,获得。在一个实施方案中，本发明的植物是自交系90-3588的植林，其4^性的种子以编号NCIMB41369被保藏(见下文实例3)。所述6iz^-2基因位于Cvar.Seminolepumpkin或自交系90-3588中赋予CMV抗性的基因的染色体位置。在一个实施方案中，含有C抓-2基因的植物通过等位性测^^皮确定并被限定。等位性测试的进行是通过"测试者"系的植抹(即"测试者"检昧)与被测试的植物杂交，并且确定所述杂交子代中抗CMV的植林与易感CMV的,的分离比。一^:评估Fl子>^0*#^Fl子代it抹自花授粉产生的F2子代^t株。也可以评估与所述亲本回交产生的子^POt抹以及回交子〗JUt林的自花授粉获得的植林。所述抗'l^tt林与易感检眛的分离比也可以在自花授粉以及与所述亲本回交的后代中确定。测试者;tt^Ml含有C郝-2基因的植林。在一个实施方案中，测试者植林是自交系90-3588(以NCIMB41369的编号保藏于NCIMB)的植株。在一个实施方案中，如果C-2基因纯合的测"^^^赋予CMV抗性的单基因纯合的被测^i^用作杂交的亲本，并且在Fl和F2子代中仅重现抗性植林(即没有抗性植抹和易感植林的分离)，那么所述被测试的植林含有C评-2基因，被限定为本发明的植物。因此，在一个实施方案中，本发明的植物是含有C迈r-2基因的南瓜属植物，其中如果所述南瓜属植物是C-2基因纯合的，所述南瓜属植物与自交系90-3588的^ti林杂交产生的100%的Fl是抗CMV的，并且100%的所述Fl植林产生100%的F2子代it林抗CMV(1)。在这种情况下，如果Fl和F2子代^i林与所述亲本回交并且所述回交产生的子^Rit株自花授粉，那么所述回交和随后的自花授粉产生的子代植,是抗',林。在一个实施方案中，如果^-2基因纯合的测试者植#赋予CMV抗性的单基因杂合的被测^^MM作杂交的亲本，并JL^F1子代中仅出现抗',株，50。/。的所述F1植林的子代中出现10(^的抗性的F2拔眛，50。/。的所述F1植株的子代it林中出现比例为3:1的抗性的F2植#易感的F2代植抹，那么所述被测^Ut林含有Cw-2基因，被限定为本发明的植物。因此，在一个实施方案中，本发明的植物是含有C-2基因的南M植物，其中如果所述南瓜属植物是a^-2基因杂合的，所述南瓜属植物与自交系90-3588的,杂交产生的100°/。的Fl植抹是抗CMV的，并且5(W的所述F1档^^产生的100%的F2子代植抹抗CMV，且50%的所述Fl植^K产生比例为3:1的抗性的F2植#易感的F2植林(錄l)。相比之下，如果2基因纯合的测试者;fefc^赋予CMV抗性的单基因纯合的被测^L^N皮用作杂交的亲本，并且在F2子代員中发现易感植林，那么被测试的植抹含有的一个基因位于和所述C-2基因不同的一个基因座。因此，所述被测^因不含C-2基因，不是才娥本发明的植物。如果所述,皮测^fet林;U^予CMV抗性的单基因(与所述Cw2基因位于不同的基因座)杂合14的，那么易感植林也可能在F2子代中被JL现。在这种情况下，如果Fl或F2子代植林与所述亲本回交并且所述回交获得的子代自花授粉，那么易感^ifefc回交后自花授粉获得的子代中^m现。本领域技术人员应知晓怎样进行等位性测试，怎样在每代中确定^^Ut量的用于测试的子代it林，以及怎样分析所述测试的结果。例如，如果所述测试者植#被测^^狄予所述病毒抗性的显性单基因纯合子的，但所赵因位于不同的、非连锁的染色体基因座，将可以预期Fl子代^都^l抗'ltW，而F2子代植林中度抗'l^t林和易感植林以15:1分开。在这种情况下，如果所述测试者植抹是C迈p^基因纯合的并且所述被测:i^t^是位于不同的、非连锁的染色体基因座的单显性基因杂合的，那么将可以预期所述F1子代都是抗性植林，并且50%的Fl植林的F2检眛中度抗'1!^4#与易感榼昧以3:1衬，50%的Fl植抹的F2检眛中度抗'I^t林与易感,以15:1M(Ji41)。如果位于不同的、非连锁的染色体基因座的单显性基因赋予温和的或更不稳定的抗性(例如本文描述的中度CMV抗性)，那么这些分离比可以与上文的数字会有不同。在这种情况时，某些含有位于不同的、非连锁的染色体基因座的基因的植株可能被界定为易感的。如果两个染色体基因座是连锁的，那么将预期有更高的抗'ltW与易感植林的比率。本领域技术人员应知晓怎样进行等位性测试，怎样在^^中确定^^itit量的用于测试的子代^i林，以及怎样分析所述测试的结果。也应理解，在很少的情况下由于异常种子萌发或植物不正常发育，含有赋予CMV抗性的基因的植林可能被界定为易感的。然而，这样的植#等位性测试和在确定分离比中不予考虑，并且^:在疾病测试中被去除。其他类型的杂交和等位性测试也是本领域技术人员已知的并且也可以被应用。也可以评估务他的代。测试者杂交也可以用C鮮-2基因杂合的测^"植#被测试的基因杂合的被测^t^Mi行。本领域技术人员应知晓怎样进行这些杂交以及如何解释其结果。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表l:^JU自交系90-3588的植林作为测^植抹的等位性测试的预期结果。R:抗CMV植林，S:易感CMV植株在一个实施方案中，本发明的植物是含有C-2基因的南瓜属植物，其中所述植物不是Cvar.Seminolepumpkin的^L^。在一个实施方案中，本发明的植物不是倭^t物。在一个实施方案中，本发明的植物是西葫,的植抹、夢瓜的植^il灰籽南瓜的,。在一个实施方案中，本发明的植物是南^4t物。在一个实施方案中，本发明的植物是夏南;^t物、冬南^4t物或圓橙南;^4t物。在一个实施方案中，本发明的植物是西葫芦(C/7e/wZ.)的植抹。西葫,(Ozcw6/"/7e;wL.)经常是指通常已知的夏南瓜，例如扇贝型(scallop)、小西葫芦(zucchini)、直颈型(straightneck)和曲颈型(crookneck);和冬南瓜，例如小青南;M^圆橙南瓜。已知有八组的食用西葫，圆橙南瓜(Cpe/wL.var./7epoL.Bailey)包括匍旬植物的栽培品种，产生球形、卵形或扁圓形的果实，其末端是圆的或扁的。种植的该组南瓜的果实在成熟时旨用，并且有时被用作铜料。扇贝型(C./7e;oL.var.Alefield)具有半灌木习性，果实从扁平至近乎盘形，具有波浪或中绰线的边缘，在成熟之前旨用。小青南瓜(C./7e/oL.var.fwW朋/aParis)是灌;M^匍旬植物，果实是倒卵形的或圆锥形的，锥点在顶部并且具有纵向脉沟。外皮松软，因此所述果实可以在成熟状态时旨用。曲颈型(C.;e/7oL.var.far〃co"/aAlefield)是灌木类型的，具有黄色、妙色或白色果实，其呈棒:^JL^远端或者尖端弯曲，并JJt常有多疚的皮。在未成熟的时候食用，因为成熟的时^^C和肉会变硬。直颈型(C.pe/oL.var.re"/cW/"Paris)是灌;^ti物，具有黄色或金色果实，以及多疵的皮，类似于var^r"co///a。(Vegetablemarrow)(C./e/oL.rar/"a"/g"aParis)作为半灌木具有匍旬枝特征，并且具有短的圆柱状的果实，在顶部略微变粗，其具有光滑的皮且在成熟过程中变硬并变厚，并且具有从霜绿色至深绿色变化。美洲南瓜(cocozzelle)(C./e/7oLvar./o卿Paris)具有圆柱形的细长果实，并且在顶部稍孩^^;在未成熟状态#用并且其最常见名字是Cocozzelle。小西葫声(C./e/oL.var.cWh^kaParis)是目前栽培品种中最常见的组。与前一组类似，小西葫芦组与^T强的亲缘关系，并且它也是在近代出现的(19世纪)。它的植林^A半灌木，并且它的圆柱状的果实不变粗或者仅微小地变粗。在未成熟状态作为蔬菜旨用。在一个实施方案中，本发明的植物是以上八组中的任一组植物，或者来自不同分类的^^可絲组植物，其中所述植物含有C-2基因。多种南^fet物通常发育成在土^Ji前进的藤，而现在的夏南瓜栽培品种已经被开发成矮的、紧凑型的灌木，使之更容易在更小的空间中生长。在使泉的冬南;Mt林上有大的、肾形和锯齿叶的林冠，它的叶可以没有裂片或者有^i^的裂片。果肉可以是多种水平的黄色，或者甚至是从白色至橙色。它的果实可以具有软夕卜壳或硬夕卜壳，颜色从暗到亮。夏南瓜显示特别多样的形状(圆柱状、长的、扁的等)，大小从小到大，颜色从单一色至斑驳。其果肉可以从白色至黄色并且是粗颗粒的，这与具有细粒果肉的冬南瓜不同。南瓜是一个简单的二倍体物种，有20对高度分化的染色体。该植物，同体，在同一个^^上有分开的g和雄花。通常，最先形成的4或5M是^Mt，接着的约8朵是，之后M多的i^t和^^。#^有3-5个竖直的雄露聚集在5片il^一起的花冠中。雌花有3个发散的柱头裂片(stigmalobe)并JL^花被下面有一个幼果(外子房)。有刺的、粘性的花粉需要昆虫进行授粉。主要授旨是蜂，特别是蜜蜂。授M常发生在早晨花开之后。基于本发明的描述，技术人员能够识别本发明的南瓜属植物，例如通itii行一项等位性测试，如上述的等位性测试。因此，在一个实施方案中，本发明还进一步公开一种鉴定本发明的南瓜属植物的方法，包括南瓜属植物与测试者植林杂交并确定在产生的子代中CMV抗性的分离比。基于本发明的描述，技术人员能够识别抗CMV的植株(本文也称为"抗性植林")和易感CMV她(本文也称为"易感"植林)，例如^^l如本文描述的疾病测试。在一个实施方案中，所述c迈^基因赋予南;^植物高水平的CMV抗性，例如根据下文实例2中的描述进fr测试和测定。因此，在一个实施方案中，根据本发明的抗CMV的植物是高度抗CMV的W(本文中也称为"高抗'^W")。在一个实施方案中，^^本发明的高度抗CMV的南瓜属植抹是西葫,的拔眛。在一个实施方案中，所述植林是南^4i物。在一个实施方案中，才Mt本发明的高抗'fi^Mt过一项等位性测^^皮鉴定和限定，例如本文描述的等位性测试。在本文描述的疾病测试中，高抗性植,CMV感染显示不明显的症状。高抗性的M最初两个真叶(true-leaf)可能显示CMV感染的症状，这与易感植糾目同，但是生长的新叶没有任何的花斑症状，没有变形，并且之后所述植林不显示症状。基于本发明的描述，技术人员能够识别本发明的高度抗CMV的植林，通过4吏用本文描述的一项疾病测试例示。高度抗CMV的西葫声拔昧的实例是自交系90-3588的植林(其^Jj性的种子以编号NCIMB41369保藏)或者是本文描述的杂种RSQ2193的植林。因此，在一个实施方案中，高度抗CMV的植林显示高水平的抗性，与自交系90-3588的^M^杂种RSQ2193的;H^M^性7jc平相当，例如在如本文描述的疾病测试中。在一个实施方案中，本发明的西葫,植物比syL可以获得的西葫芦植物更加抗CMV,M是在用本文描述的疾病测试进行的测试中。例如，本发明的西葫,植物比中度抗CMV的西葫声植林(本文中M为"中度抗'ItW，)的抗性更高。在本文描述的疾病测试中，中度抗性西葫声,显示CMV感染症状的减少，例如在最初两片真叶之后的叶的CMV感染症状(有时在所有叶上)、延i^4现的CMV感染症状以;s^植林生长过程中一直,的症状。在某些情况下，中度抗'l^i抹可能被所述疾病胜过并且被界定为易感的。中度抗CMV的西葫声植物例如南瓜杂种'Dividend'(SyngentaSeeds,Inc.的商业品种)的植株。杂种'Dividend'^^有杂合状态的(3zw-J基因。'Dividend'还已经被描述为CMV耐受。因此，在一个实施方案中，本发明的西葫芦植物比含有C-J基因的西葫声植物更加抗CMV。在含有西葫声植物和含有C迈^基因的西葫,植物之间已经进行等位性测试，并在下文的实例5中描述。所述等位性测*明，0p^基因位于与C迈r-7基因不同的染色体位置。因此，在一个实施方案中，C迈^基因比0^-7基因赋予西葫声植物更高7jc平的CMV抗性，M是在本文描述的疾病测试中。在一个实施方案中，C-2基因比C-7基因赋予西葫芦植物更稳定7JC平的CMV抗性，^^是在本文描述的疾病测试中。也寸^J1C迈o〃c力"scv.SeminolePumpkin和C.cv.NigerianLocal进行疾病领'J试。C迈osc力"acv.NigerianLocal是冬南瓜，倭;Mt,记载于Brown,2003(Euphytica129:253-258)。所述疾病测试在下文的实例4中描述。C/!kwc力a^cv.SeminolePumpkin的;WM殳有显示出任啊的疾病症状，被界定为对CMV免疫(本文中也称为"免疫植林")。相比之下，C.Mi"c力a^cv.NigerianLocal的植#^所有测试的植物中显示CMV感染的症状，被界定为CMV的中度抗性。C迈o"力3"cv.NigerianLocal中的症状局限于在所有或大部分叶上有花斑；无被测试的植昧出m育障碍(表9)。因此，在一个实施方案中，抗CMV的南瓜属植物可以进一^^皮限定为高度抗CMV、中度抗CMV或对CMV免疫。易感CMV的西葫芦植物例如'Gentry'(SyngentaSeeds,Inc.的商业品种)的植抹。C胖-2基因被转移至A^t类型的南瓜属植物中。例如，fiz^-2基因被转移至黄色曲颈型植物和小西葫芦植物中。基于本发明的描述，技术人员也能够转移&7-2基因至缺4^斤&因的其他南瓜属植物中，例如易感CMV的南瓜属植物，并且产生含有所述Cw2基因的植物。因此，在一个实施方案中，本发明还鄉一种转移C-2基因至缺4^斤組因的南瓜属植物中方法，包括a)获4f^有Cw2基因的植物；b)把它与缺4L^斤錄因的植物杂交；c)获得步骤b)的杂交的植抹；d)选择步骤c)中含有C鮮-2基因的植林。在一个实施方案中，所述方法还包括e)把步骤d)中获得的,与南瓜属植物回交，以及f)选择含有(:鮮-2基因的南瓜属*。在一个实施方案中，所述方法还包括获#^有(3^-2基因的自交南瓜属植抹，并_§^一个实施方案中，所述方法还包括把所述自交南瓜属植物与另一种南瓜属植物杂交以产生含有6Jz^-2基因的杂种南瓜属植林。在一个实施方案中，步骤a)中含有flzp^基因的植物是系90-3588的員或者是所述^^的后代或祖先。在一个实施方案中，本发明公开可通过上文的任一种方法获得的南瓜属植物，其中所述植物含有6Jz^-2基因。在一个实施方案中，这种植物是西葫芦植物，在一个实施方案中，这种植物是高度抗CMV的西葫芦。在一个实施方案中，本发明还皿产生含有6Jz^-2基因的南瓜属植物的方法，例如包括上文列出的步骤。在一个实施方案中，本发明还公开应用C迈F^基因赋予易感CMV的南瓜属植物CMV抗性。在一个实施方案中，所述C-2基因在所述南瓜属植物中自作纯合状态。在一个实施方案中，本发明还皿一种赋予易感CMV的南瓜属植物CMV抗性的方法，包括a)获#^有Cw-2基因的植物；b)把它与易感CMV的植物杂交；c)获得步骤b)的杂交的检眛；d)选择步骤c)中抗CMV的植林。在一个实施方案中，所述方法还包括e)把步骤d)中获得的植林与南瓜属植物回交，以及f)选择抗CMV的南瓜属检昧。在一个实施方案中，所述方法还包括获得抗CMV的自交南^w属植林，并且在一个实施方案中，所述方法还包括把所述自交南瓜属检眛与另一种南瓜属植物杂交以产生抗CMV的杂种南瓜属植林。在一个实施方案中，含有0^-2基因的步骤a)中的植物是系90-3588的植林或者是所述植林的后代或祖先。在一个实施方案中，本发明皿通过上文的任一种方法获得的南瓜属植物，其中所述植物抗CMV。在一个实施方案中，这种植物是西葫,植物，在一个实施方案中，这种植物是高度抗CMV的西葫芦。在一个实施方案中，本发明的南瓜属植物含有C迈r-2基因和aw-7基因。例如，这种植物是通过自交系90-3588的植#杂种'Dividend'的植林杂交并选择含有所述两个基因的植抹获得的，例如使用本文描述的等位性测试。市售的南瓜属植物^A两个亲本品系(自交系)杂交产生的Fl子代。杂种的开发通常需要纯合自交系的开发、这些系的杂交和所述杂交的评估。语系育种和轮回^^择育种(recurrentselectionbreeding)方法^[^用于>^繁殖种群中开发自交系。育种人员把两个或多个自交系或多种其他种质资源(germplasmsource)的遗传背景与育种工具相结合，通过自交和所需表型的选择从中开发新的自交系。所述新自交系与其他自交系杂交，评估这些杂交的杂种以确定哪些具有商业的潜力。植物育种和杂种开J^1昂贵且费时的过程。因此，在一个实施方案中，本发明还z^开一种产生杂种种子的方法，该方法包括将本发明的植物与另一种自交系的植^Mi行杂交，其中所^物是自交系；以及iim所述杂交形成的杂种种子。在一个实施方案中，所述杂交中的两个自交系都是本发明的植物。在一个实施方案中，本发明还公开由上文方法产生的杂种种子，其中所述杂种种子含有0^-2基因。在一个实施方案中，该杂种种子以自交系90-3588作为亲本。在一个实施方案中，本发明的杂种种子是杂种RSQ2193的种子(见下文的实例3)。语系育种起始于两种基因型的杂交，每种基因型具有一种或多种所需的特征，所述特征在另一基因型中没有或者与之互补。如果所述两个原始亲本没有提供所有所需的特征，在所述育种种群中可以包含其他的源。在谱系法(pedigreemethod)中，优势检眛自交并JL^相继的代中选择。在所勘目继的代中，同型系(homogeneouslines)为自;^^#选择的结果，而不是杂合情况。在育种谱系法中^1进行五代或五代以上的自花授#选择Fl至F2;F3至F4;F4至F5等。单杂交杂种通过两个自交系的杂交形成，所述每个自交系都具有与另一种自交系互补的基因型。第一代的杂种子代^L命名为F1。在商业杂种的开发中，仅寻找F1杂种植物。优选的Fl杂种可能比其自交亲本更加茁壮。这种杂种优势(hybridvigor)或杂交优势(heterosis)可以在许多的多基因性状中得到证实，包括营养生长(vegetativegrowth)增强和产量增加。可以容易地进行南瓜属植林的异;yt粉。性状,錄易地从一种南瓜属植物转移到另一种南M植物以进一步获得商业的系。在一个系中渗入性状可以通过例如轮回选择育种完成，例如通过回交。在这种情况下，所述系(轮回亲本)首先与携带所述性状的供体自交系(非轮回亲本)杂交。然后，该杂交的子代反过来与所述轮回亲本杂交，之后在产生的子代中选择所述性状。在与轮回亲本回交三代，优选四代、更优i4i代或五代以上并选择所逸性状后，所述子代对于携带所述抗性的基因座是杂合的，虽然大部分或几乎所有的其他基因与所述轮回亲杣目似(见例如，Poehlman&Sl印er(1995)BreedingFieldCrops,4thEd.，172-175;Fehr(1987)PrinciplesofCultivarDevelopment,Vol.1:TheoryandTechnique,360-376，通过引用的方式纳A4^文)。在每次杂交^选择所述性状。因此，在一个实施方案中，本发明的植物还包—种或多种性状，例如一种或多种转基因。例如，在一个实施方案中，自交系90-3588的植fe包t种或多种性状，例如一种或多种转基因。所述性状是从，南瓜系渗入的，并且产生的植物除具有渗入到所述自交系的一种或多种性状外，还具有自交系90-3588植物的几乎所有的形态和生理特征。本发明还涉及渗入了一种或多种性状的自交系90-3588的种子，并涉及渗入了一种或多种性状的自交系90-3588的植林。本发明还涉及通过如下方式产生南^4t物的方法，即扭滲入了一种或多种性状的自交系90-3588与其自身或者与另一种南瓜系杂交。本发明还涉及通过如下方式产生的杂种南瓜种子和植物，即扭滲入了一种或多种性状的自交系90-3588与另一种南瓜系杂交。被转移至自交系90-3588的性状的实例包括但不限于除草剂抗性；细菌、真菌或病毒疾病抗性；昆虫抗性。在一个实施方案中，本发明的南瓜属植物是雄性不育的。雄性不育系不产生可育的花粉，不能自花授粉。通过除去一个亲代品种的花粉，植物育种人员可保ii^得品质一致的杂种种子。因此，本发明公开雄性不育南瓜属植物，包括所述植物的种子和材料以及其子代。在一个实施方案中，本发明的植物^1保持系植物(maintainerplant)。在一个实施方案中，本发明的植物是自交系、杂种或双单倍体。在一个实施方案中，它是通过谱系育种或通过轮回选择育种产生的。在一个实施方案中，本发明的植物具有商业上可接受的农学特征。在一个实施方案中，本发明公开一种产生本发明植物的果实的方法，包括种植^^发明的植物直到产生果实；以及M所述果实。在一个实施方案中，本发明公开一种产生本发明植物的种子的方法，包括a)种鉢发明的植物；b)使所她物自微粉；c)W斤組物條种子。也可以^J^本领域熟知的方法无性繁殖南瓜属植物，所述方法例如体外组织培养、侧枝生根(rootingsideshoot)或原生质体融合。在一个实施方案中，一种无性繁殖本发明的植物的方法包括a)收集本发明的植物的组织；b)栽培所述组织以获得增殖的枝；c)生根所述增殖的枝以获得生根的小植林；d)种植所述生根的小植抹获得植株；以及^J斤述植林Jlt^种子。^JI本领域熟知的技术，本发明的南瓜属植物也可以利用所感兴趣的基因以遗传方式进行转化。因此，本发明还公开额外含有所感兴趣的基因的根据本发明的南;^属植物。本文引用的所有参考文献通过引用的方式全文纳4申请中。下面的实例旨在提供应用本发明的示例。下面的实例并非旨在完全限定或另外限制本发明的范围。实例实例l:种间杂交种间杂交的示意描述4^供如下。CWwA//"附仍c/f她var.Seminolepumpkin,，5代自交CX4xSEM.6(西葫芦x倭瓜)，，胚拯救技术和自交在CMV的抗性的选择下，回交育种至适合的专有的系详细过程提供如下亲^#料的栽培和人工杂交两个亲本的植#^植于标准栽培技术的温室中。CX4^!黄的直颈型专利的自交系。Gvar.Seminolepumpkin通iiA工自^ti^粉自交五个循环获得SEM.6。植M植于聚乙烯盆(容积=10-15L)中，盆中装满无土M(泥炭、珍珠岩、虫U、处理的松树皮)和NPK(14:14:14)平衡的緩释月&^。在花期，用倭瓜的#^花粉手工授粉西葫芦的#^。用镊子(twizer)除去雄花的花冠并且M花药刷在雌花的柱头上以转移花粉。种子提^^p胚移植(embryoexplant)授粉20至25天后在果实成熟(set)的时候M所述果实。用乙醇消毒果实，然后沿垂直轴切成两半。提Wt子并iL^解剖显微镜下切开。^^I镊子和针从种子中分离出胚。棵露的胚种植于V3人工培养基(表2-5)上，处于人工条件下(t=25lC,16小时光照/天)的生长室中。种子剥离、胚移植和体外培养在层流无菌罩下进行。所有应用于剥离和把胚转移^A工培养基中的工具都是无菌的。幼苗硬化在才艮形成以后，所述幼苗被转移至装满泥炭的聚乙烯盆(4x4cm)中。所述幼苗种植于生长室的人工务降下(t=25lC,16小时光照/天)，并且用聚乙烯袋子*个盆罩住以保持高湿度。才娥需要用杀真菌剂Previcur的水溶液[2.5mL/L]每天对所述幼苗施水。五天之后在聚乙烯袋子开孔(3-5咖)以减少湿度并且使幼苗在除去所述袋子前适应环境。植抹栽培和授粉如果才M'J达盆的i4^,那么所述培养基^1殖，招L;^M皮转移至温室中或者室外并被移賴月于自花授粉。植^Nt植于标准栽培技术下并被自花授粉，产生第一代含有63z^-2基因的西葫芦植林。表2.用于培养来自西葫,X倭瓜的种间杂交的移植胚的V3培养基。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表3.用于制备V3培养基的Murashige&Skoog常量元素的10X储液制剂,<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表4.用于制备V3培养基的Murashige&Skoog微量元素的IOOX储液制剂,<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表5.用于制备V3培养基的羊肚菌(Morel)维生素的500X储液制剂。实例2:疾病测试接种物(inoculum)的^M!"和增殖黄瓜花叶病毒(CMV)的Florida#^应用于疾病测试中。该CMV林对南;^是高致病的，被7乂久M于Syngenta，Naples,Florida。感染南瓜的新鲜叶在聚乙烯袋中保存于t--72t:。为了增殖可获得的接种物的量，接种易感的南瓜植抹，如下文所述，如果出现严重的症状(花斑叶和色斑叶，以及,的发育障碍)》^#受感染的成熟叶。来自冷藏器的南瓜叶在pH7.1±0.1的冷0.02M磷缝緩冲液(表6)中用组织捣碎器耕。调整所述接种溶液的浓度至1:6(g组织:緩冲液体积)。在接种过程中，4^ft物置于冰上。通过接触^A过接种物溶液的戴手套的手指，在第一真叶阶段接种植林的两个子叶。^^I胶乳实验室型的手套，在操作者每次中断接种过^^行其他必需操怍(即移动育苗盘)的时候更换手套。生长糾把南瓜植林播种于装满无土基质(泥炭、珍珠岩、蛭石、处理的松树皮)的72孔泡沫f^乙烯维生(speedling)托盘中。才艮据需^^周用溶解的月C^(NPK20:20:20)手工对托盘浇水和^J巴。接种的托盘于生长室中人工条降下(白天t-85。C,晚上t-75。C，16小时光照/天)孵育。所述生长室由六个架量(mg)_====5細00.05000.05000.05O00.05000.0005至100mL素元酸素丁钩素G醇哆古胺酸物*肌吡尼硫泛生I26组成，每层三个，分成上下两层。每个架可以容纳六个托盘，以长边并列的方式排列。每个架上方有荧狄，距离所述植林的距离可调节并站生长周期中每周都移动灯以保持if^t株上层叶10-20cm的平均距离，从而防止所述^fe林的生理应激以;5^助长(stretching)和抑制(weakening)所述幼苗。疾病评4古在接种2-3周后如果易感',查显示很严重的叶花斑和叶色斑以及植林发育障碍，所述植##:界定为易感，的。单Wif过区^^皮计数为抗性的或易感的。如果在幼苗阶段的CMV感染后显示症状,依赖于如下的感染严重度鉴定易感植株叶变形并且大小严重变小。叶上形成黄色花M块，接着在严重情况下出现大面积坏死。在严重情况下，易感植林发育障碍。根据如下鉴定抗，^t林A.高抗'hMt林显示不明显的CMV感染症状最初两片真叶可以显示CMV感染症状，与易感;te^M目同。生长的新叶没有任何的花斑症状，不变形。之后所述;fe眛不显示症状。B.中度抗'I^t林显示减轻的CMV感染症状CMV感染症状出现在最初两片真叶之后的叶上，有时在大部分或4^的叶上。CMV感染症Mi^^现并且症M整个植物生长期中,。在某些案例中，中度抗'I^ti林可能被疾病胜过并被界定为易感的。C.免疫植林不显示CMV感染症状植林的叶和^^f其他器官都不显示CMV感染症状，例如花^iUfc^发育障碍。通过如下的方式减小了实验的变异性，在接种时去除那些发芽比大多数幼苗迟3天以上的幼苗以及^^杀真菌剂防止真菌疾病。在Florida,可能感染生长室中的植林的病原体包括泻根亚隔孢壳菌(//d^e//a6/y朋/ae)引起的蔓枯病(gu呵stemblight)和^^单丝壳菌(砂A2er0Meca/i///#//7ea)引起的白粉病(powderymildew)。实鋭计栽培种(cuUigen)(栽培种(cuUivar)、实验杂种(experimentalhybrid)和实验自交系(experimentalinbred))被种錄30植株的块(plot)上(图1)。栽培种被随才她分配于块中，并且块(每托盘两个)被顺序地分配到生长室中的架上。易感性检查(Susceptiblecheck)以16.6%的频率种植于托盘上(每6抹中l林)。抗',查(resistantcheck)被种植于30植林的块中，在生长室中每个架上的其中一个块中有最4氐的频率。在筛选F2和回交分离群之后，更改为4M单^1林的块。表6.用于南瓜幼苗CMV接种的0.02M磷^緩冲液的1OX储液制剂。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>图1.在南瓜的CMV抗性筛选实验过程中，每个托盘中易感检查(S)和栽培种的位置。实例3:杂种RSQ2193杂种RSQ2193RSQ2193是黄的曲颈型夏南瓜(西葫声)的实验杂种。RSQ2193适宜在东南美国种植，它在那里有高产量和高质量的果实(表7)。RSQ2193的果实类型与'Gentry'(SyngentaSeeds,Inc.的商业品种)类似，但匸是有更高的果实质量，有广谱的疾病抗性，并且是一种更茁壮的植物。RSQ2193的亲本是自交系90-3588和90-3590。RSQ2193植株是稀疏的并且是直立到半匍旬的。这些植林可以产生少量的外侧枝。叶和茎是中绿色并且与'Sunglo，(SyngentaSeeds,Inc.的商业品种)和'Gentry'等栽培品种相比有更少的和更小的刺。叶是浅裂的，具有锯齿状的扁平边#圆形的叶尖。RSQ2193有橙色的i^和难t,都是可育的。RSQ2193的果实是黄色的，具有绿色的蒂和半曲的颈。所述果实表面很平滑，几乎Ait滑的，具有很光亮的表面。花根^艮小并且是平至轻微凸起的。所述果实是棒状的，它的颈比果实主*细约2/3。所1形果实被大大#长。处于市场销售阶段的果肉质量可以与'Gentry'比拟，具有精细的、干的和松软的质地。RSQ2193的种子的颜色为奶油色，四周有微暗的边。种子大小的测量约是14mm长、8咖宽和3咖厚。种皮平滑、无光泽，并且具有曲的和圆的边缘。种子在M时容易与果肉分离。RSQn93高度抗黄錄叶病毒(CMV)(表8)以及科单丝壳菌引起的白粉病。RSQ2193的CMV抗性来源于C边c^c力a^var.Seminolepumpkin,并JUfit^申请描述的种间杂交转移至该杂种中。RSQ2193是2基因纯合的。表7.2005年夏季Georgia农场种植RSQ2193的产量的收集数据。DestinyIII和PreludeII是Seminis，Inc.的商业品种。29<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>aNo.l，#2=杲实品质分类，通过'USDA-ARS夏南瓜等级标准(USDA-ARSStandardsforGradesofSummerSquash)'U984年l月6日生效(1997年l月重印))确定。自交系90—3588自交系90-3588是黄的曲颈型夏南瓜(西葫芦)的专利的自交系。系90-3588是上述的杂种RSQ2193的亲本。系90-3588具有类似于'Gentry'的果实类型，并且含有纯合状态的抗黄g叶病毒的C-2基因。90-3588的叶是完整的、圆形的和中绿色的。系90-3588的果实另:黄色的，具有绿色的蒂和弯曲的颈。系90-3588的种子颜色为奶油色，四周有微暗的边。种子大小的测量约是13咖长、8mm宽和3咖厚。种皮平滑、无光泽，并且具有弯曲的和圆的边缘。种子在收获时容易与果肉分离。系90-3588it传中存在的CMV抗性来源于G迈Mc力a"var.Seminolepumpkin,并且是通过该申请描述的种间杂交转移至该杂种中。表8.2005年在Florida的Naples进;f亍的筛选中RSQ2193和亲本自交系的CMV抗性。a被应用于把抗性渗入至RSQ2193中的初始抗性源是C逝o"力a/avar.Seminolepumpkin。实例4:Ccv.SeminolePumpkin和NigerianLocal的疾病测试观'J试C迈osc力"3cv.SeminoleP卿kin和cv.NigerianLocal的CMV抗性，如上文实例2的描述。NigerianLocal是冬南瓜，倭^t,记载于Brown，2003(E叩hytica129:253-258)中。C边c5"c加^cv.SeminolePumpkin的档，^M皮界定为CMV免疫的，它不显示所述疾病的任何症状。Ccv.NigerianLocal朝L界定为中度抗CMV的，虽然在所有测试植林中都显示CMV感染的症状。Ccv.NigerianLocal中的症状仅限于叶花斑,没有出现测^W的发育障雄表9)。表9.在Florida的Naples进4亍的筛选中，61cv.SeminoleP卿kin和NigerianLocal的CMV抗性水平。进行了6次重复并界定了抗CMV的植株。示出每次重复中被界定的植林的数目。被用于易感检查的是对所有疾病都易感的，内部称为"万能易感的(Universalsusc印tible)，，自交系90—3871。抗性数目/接种数目重复l重复2重复3重复4重复5重复628/2827/2728/2827/27.30/3029/2924/2425/2521/2125/2526/2622/2229/2930/3029/2929/2928/2830/3036/3636/3636/3636/3636/3636/360/260/300/260/290/290/293a,、ar的的2本本种性咸"g母父杂f一私易R检重复l重复2重复3重复4重复5重复6C.wcxyc/w3tocv.NigerianLocal免疫的000000中度抗性的243030262930易感的000000测试总数243030262930C.wosc/wtocv.SeminolePumpkin免疫的293030302924中度抗性的000000易感的000000测试总数293030302924易感性测试免疫的000000中度抗性的000000易感的293030302924测试总数293030'302924实例5:等位性测试在含有6W-2基因的育种系西葫声的^N^含有(3z^-7基因的育种系西葫芦的植沐t间进行等位性测试。在上文的实例2描述的疾病测试中，疾病有时能够胜过由C/z^-J基因赋予的抗性，导致对含Cw-7基因的植^ii行界定的困难。因此，这样的,可能被界定为抗性的或易感的。相比之下，2基因赋予更高水平并更稳定的抗性，被清楚Ak^定为抗性的。另外，在抗性植抹中症^^型的表现是不同的。含有6)z^-7基因但不含C群-2基因的个^i株可能在接种后最新形成的两片叶上有抗性反应，而后面的叶可能看^M^是易感的，并且整个植株可能最终出现发育障碍并且随后枯萎。而C-2基因纯合的或杂合的植林可肖t^接种的叶上出现初始的症状。;S^M^^^愈并JL^第3真叶开始它们不再显示CMV感染的做其他的症状。基于抗性的这种分化的表达以及所述Gz^-2基因的更强的效果，预期的表型频率(表10)在抗性的人工试验中可能不容易被观察到。C-2基因赋予的更高水平的抗性被界定的以下植抹的表型证明，即在两个基因座都是杂合的Fl杂种(表ll，条目5)和C迈r-2基因显性纯合的且C脾-7基因座隐性纯合的自交系(表ll，条目2)。在C迈r-7基因显性纯合的自交系和C-2基因的显性纯合的自交系的杂交32aC迈r-7和C迈r^基因座的基因型。R-显性纯合；S-隐性纯合；H-杂合的；Seg=根据孟德尔定律分离。的F2群中，易感CMV的植^M皮重现(表H)。ii^明在使用的西葫芦的群中，fi^-2是两个不同的基因。记录到的206:48(抗性的易感的)的胁分离比偏离两个单显性基因的15:1的预期分离比。然而，携带(3z^-7基因的Fl杂种和自交系(分别处于杂合状态和纯合状态)也有在所述测试中被界定为易感,的个体。总之，等位性测试表明Ci^-2基因位于与C舒-7基因不同的染色体位置。2基因也比fiz『-7基因赋予西葫;^ti抹更高水平的抗性。在被测试的F2群中记录到的不平衡分离比可以通过以下解释，即在不存在2基因的情况下C-J基因赋予的温和的和不稳定的抗性。a^-^基因座隐性纯合的个体应该从基因只接收了温和的和不稳定的抗性，因jt沐时候被界定为易感的。所i^应该已经包括32个Cw一基因纯合的并且C迈"2基因隐性纯合的个体，16个Cw-7基因显性纯合并且0^-2基因隐性纯合的个体，和16个双隐性个体(基于孟德尔遗传定律(Mendel'sinheritancerules)和两个非连锁基因等效的表型预期)。由于ar-7基因产生的抗性的不稳定性或者温和的表现，双隐性个体的表型可能与属于务他两种基因型种类的几个个糾目混淆。而且，该假设被如下的证据强烈地支持，即/基因隐性纯合的并且不含0^-2基因的自交系出现易感个体的频率较高(0.42)。表10.基于两个基因的独立遗传模型(孟德尔)，C-7和fi^-2基因在西葫芦中的分离。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>bM工接种的CMV的表型数据。R-抗性的；S-易感的。c预期的基因型频率。d基于孟德尔遗传定律的预期表型。e由于C-7基因赋予温和的和不稳定的抗性可能出现的表型。表ll.在Florida的Naples测定的C迈F-i和C迈^基因在西葫声中的分离。基因型3代cOmv-7Omv-2总数aResSusDeada7和C-2基因座的基因型。R-显性纯合；S-隐性纯合；H-杂合的；Seg-根据孟德尔定律分离。b駄工接种的CMV的表型数据。Res-抗'f她眛的数目；Sus-易感胁的数目;Dead-死亡植株的数目。c代。IB-自交；Fl,F2-F1和F2杂交。d被测微株总数。1o2-o1016281112199212o004006o28552sRsHHsRsHsH&FFFF123456目目目目目目条条条条条条权利要求1.一种含有Cmv-2基因的南瓜属植物，其中，如果所述南瓜属植物与自交系90-3588的一个植株进行杂交，从所述杂交产生的100％的F1植株是抗CMV的，并且a)如果所述南瓜属植物是Cmv-2基因纯合的，100％的所述F1植株产生100％的抗CMV的F2子代植株；或者b)如果所述南瓜属植物是Cmv-2基因杂合的，50％的所述F1植株产生100％的抗CMV的F2子代植株，并且50％的所述F1植株以31的比例产生抗CMV的F2子代植株和易感CMV的F2子代植株，其中所述植物不是C.moschatacv.SeminolePumpkin的植株。2.权利要求l的南瓜属植物，其中所述植物不是倭瓜植林。3.权利要求1的南瓜属植物，其中所述植物是一种西葫芦植林、一种夢瓜植林或一种灰籽南瓜植林。4.权利要求l的南瓜属植物，其中所述植物是一种/7印oL.植物。5.根据权利要求1-4任一项的南瓜属植物，其中所述C迈r-2基因可以从一种C迈osc力"acv.SeminolePumpkin的植林中获得。6.根据权利要求1-4任一项的南瓜属植物，其中所述flz^-2基因可以从一个系90-3588的植林中获得，所述系90-3588的代表性的种子以NCIMB41369的编号,皮保藏。7.根据权利要求1-6任一项的南瓜属植物，其中所述植物是所述2基因纯合的。8.根据权利要求1-7任一项的南瓜属植物，其中所述植物是一种自交系、一种杂种或一种双单倍体。9.根据权利要求1-8任一项的南瓜属植物，其中所述植物是雄性不育的。10.根据权利要求l-9任一项的南瓜属植物的种子。11.根据权利要求l-9任一项的南瓜属植物的部分。12.根据权利要求11的部分，其中所述部分是一个细胞、花粉和胚13.根据权利要求ll的部分，其中所述部分是一个果实。14.一种产生南瓜属植物果实的方法，包括a)种植根据权利要求1-9任一项的一种南瓜属植物直至产生一个果实；并且b)收获所述果实。15.—种产生南瓜属植物种子的方法，包括a)种植根据权利要求1-9任一项的一种南瓜属植物；b)使所述南瓜属植物自花授粉；并且c)从所述南瓜属植物收获种子。16.—种无性繁殖南瓜属植物的方法，包括a)收集根据权利要求1-9任一项的一种南瓜属植物的组织；b)栽培所述组织以获得增殖的枝；c)使所述增殖的枝生根以获得生根的小植林。17.—种产生含有Cw2基因的南瓜属植物的方法，包括a)将根据权利要求1-9任一项的一种南瓜属植物和缺乏C迈r^基因的一种南瓜属植物进行杂交；b)从步骤a)的杂交获得一个子代植株；以及c)在步骤b)的所述子代中选择含有C/^-2基因的一个南瓜属植抹。18.将一种fiz^-2基因转移至缺乏所述基因的一种南瓜属植物的一种方法，包括a)将根据权利要求1-9任一项的一种南瓜属植物和缺乏Ciz^-2基因的一种南瓜属植物进行杂交；b)从步骤a)的杂交获得一个子代植株；以及c)在步骤b)的所述子代中选择含有Oz^基因的一个南瓜属植林。19.一种含有6iz^-2基因的南瓜属植物，所述植林可以通过权利要求17或18的方法获得。20.—种将CMV抗性转移到南瓜属植物的方法，包括a)将根据权利要求1-9任一项的一种南瓜属植物和易感CMV的一种南瓜属植物进行杂交；b)从步骤a)的杂交获得一个子代植林；以及c)在步骤b)的所述子代中选择抗CMV的一个南瓜属植林。21.—种抗CMV的南瓜属植物，所述植物可以通过权利要求20的方法获得。22.—种产生杂种种子的方法，包括a)将根据权利要求1-9任一项的一种植物和另一种自交系的植抹进行杂交，其中所述植物是一种自交系的植林；并且b)收获从步骤a)的杂交产生的杂种种子。23.通过权利要求22的方法产生的杂种种子，其中所述杂种种子含有fiz^-2基因。24.—种产生含有Ciz^-2基因的南瓜属植物的方法，包括a)获得r'迈osc力afacv.SeminolePumpkin的一个植林；b)将所述C迈osc力"acv.SeminolePumpkin的植林和缺乏C脾-2基因的一种南瓜属植物进行杂交；c)拯救步骤b)的杂交产生的一个胚；d)从步骤c)的所述的胚再生出一个植林；以及e)选择步骤d)中的抗CMV的一个植林。25.—种通过权利要求24的方法可获得的南瓜属植物，其中所述植物含有&"2基因。26.—种高度抗CMV的西葫芦植物，其中所述西葫芦植物含有2基因。27.根据权利要求26的植物的种子。28.根据权利要求26的植物的部分。全文摘要本发明涉及含有新基因的新型南瓜属植物，所述基因赋予所述植物病毒抗性，特别是抗黄瓜花叶病毒(CMV)的抗性。指定所述新基因为Cmv-2。本发明还涉及所述植物的种子，例如果实。本发明还涉及制备和应用这些植物的方法。文档编号A01H1/00GK101505588SQ200780001631公开日2009年8月12日申请日期2007年1月10日优先权日2006年1月13日发明者G·格斯米尼,J-L-M·E·尼可拉特,K·库克,M·J·尼克拉斯申请人:先正达参股股份有限公司