专利名称：新钯络合物体外抑制n-肉豆蔻酰基转移酶活性和体内抑制癌生长的制作方法
新钯络合物体外抑制N-肉豆蔻酰基转移酶活性和体内抑制癌生长
背景技术：
黑色素瘤是常见的实体瘤，以其高转移率及耐化疗和放射而众所周知。 多种因素可能解释黑色素瘤对现有治疗的耐受。首先，黑色素瘤源自黑色素 细胞，特异性产生黑色素的专门的神经峰细胞。黑色素的产生导致生成毒性 活性氧物质和细胞毒性酚衍生物，因此黑色素细胞具有抵抗这些危害的机
制。近来，已经证明作为黑色素细胞的主控转录开关的小眼畸形基因(MITF) 具有抗凋亡活性，并且以高的频率在转移病灶中发现(25) (26)。第二，多重 信号途径是在黑色素瘤中被激活。B-raf在多种黑色素瘤中突变，导致MAP 激酶信号转导的组成激活(1，27)。 N-ras在黑色素瘤中也常常发生突变，导致 激活MAP激酶、磷酸肌醇-3激酶/akt信号转导以及S6激酶激活(28, 29)。尽 管B-raf和组成型MAP激酶激活足以引起黑色素细胞转化成黑色素瘤(3,4)、 但是其他信号传导事件经常在B-raf突变型黑色素瘤中发现，所述事件例如 肿瘤抑制物PTEN的丧失(29, 30)。 PTEN丧失的结果是磷酸肌醇-3激酶/akt 激活。
已经尝试多种给药方案用于治疗局部进展和转移的黑色素瘤。几十年前 最初的试验使用药物如鞋基脲，更近使用的抗黑色素瘤的药物包括氮烯唑胺 和基于铂的治疗(包括顺铂和卡铂)。包括生物化疗在内的其他治疗包括白细 胞介素-2输注和淋巴细胞输注，该淋巴细胞存在于黑色素瘤病灶中并已被离 体扩增(31)。所有这些治疗在少数患者中已取得适度的成功，但是具有显著 的毒性，包括肺气漏综合征(32-36)。目前，干扰素-a用于高危患者，延长的 治疗产生10%长期存活益处。
靶向治疗已经在黑色素瘤中尝试。基于观察到B-raf突变在黑色素瘤中 是常见的，开发索拉非尼(Sorafenib)作为B-raf抑制剂。然而，黑色素瘤中索 拉非尼的最初实验的结果令人失望(15)。还尝试了依维莫司抗人黑色素瘤， 但作为单一药物尚未成功(37)。信号转导的现有知识可能解释先前的治疗失 败的原因。已表明磷酸肌醇-3激酶激活介导抗凋亡的外部途径，凋亡包括由 于TRAIL、 TNF-a和干扰素引起的凋亡(38)。这些细胞因子的单一治疗在面 对磷酸肌醇-3激酶激活时可能受挫。类似地，肺瘤浸润淋巴细胞引起的凋亡 可能由于磷酸肌醇-3激酶激活而受挫。磷酸肌醇-3激酶还激活VEGF表达，并且除了刺激血管发生之外，VEGF还抑制树突细胞功能，损害对黑色素瘤 的免疫反应(39-43)。
靶向MAP激酶作为黑色素瘤的单一治疗显然不足以清除大多数患者中 的黑色素瘤。MAP激酶在包括缺少B-raf突变(3)在内的大多数的人黑色素瘤 中被激活。在人黑色素瘤的先前研究中，发明人证实一亚类进展性黑色素瘤 具有降低的MAP激酶激活，这意味着另外的信号转导途径是体内起作用的。 这一假设的进一步支持是发明人先前的发现，用抗氧化剂治疗EBV-诱导的 伯基特淋巴瘤导致代偿的MAP激酶激活(17)。使用索拉非尼治疗黑色素瘤 患者导致非MAP激活途径的代偿激活是有可能的。类似地，已经证明由于 雷怕霉素及衍生物的mTOR抑制导致代偿性Akt激活(44)。
Tris-DBA具有的益处是其抑制黑色素瘤的肺瘤生成所需的多个途径， 包括MAP激酶激活、磷酸肌醇-3激酶/akt激活、stat-3激活和S6激酶激活。 这些途径参与基本上人肿瘤的所有形式以及自身免疫性疾病如狼疮、湿渗 (特应性皮炎)、哮喘、4艮屑病和关节炎。虽然没有药物作为黑色素瘤的单一 治疗可能完全有效，但是Tris-DBA在小鼠中有很好的全身耐受，并且同其 他临床所用的化学治疗药相比具有新的活性特征。其抑制磷酸肌醇-3激酶激 活的能力可能增强最佳活性需要akt失活的细胞因子的活性，并且可能增强 其他化疗药的活性。Tris-DBA还可以增强索拉非尼的活性，该增强通过阻 断由于MAP激酶阻断而可能体内存在的代偿信号来实现。发明人的研究提 供Tris-DBA在恶性黑色素瘤治疗中进一步研究的理论。
发明概述
黑色素瘤是最常见实体瘤之一，而且众所周知难以治疗。近来，多种信 号途径的组成激活已经在黑色素瘤中证实。许多黑色素瘤在B-raf中具有突 变，其引起MAP激酶的组成激活(l， 2)。甚至不携带激活的B-raf的黑色素 瘤证实MAP激酶的激活，并且激活的MAP激酶激酶的组成表达足以将黑 色素细胞转化成黑色素瘤(3-5)。已知在进展期黑色素瘤中被激活的其他途径 包括磷酸肌醇-3激酶/akt和核因子kb (NFkB) (6-10)。所有这些途径给予黑 色素瘤存活和增殖的优势，例如诱导血管源性因子，该血管源性因子包括血 管内皮生长因子、白细胞介素-8、存活素、IAP和mcl-2 (11-13)。
铂化合物是多种实体瘤治疗方案的支柱，特别是睾丸癌。然而，还表明 包括顺铂和卡铂在内的铂化合物在黑色素瘤中具有活性，并被引入黑色素瘤 治疗方案中(14)。其他抑制剂如索拉非尼、B-raf抑制剂虽然强有力的抑制 B-raf,但是对于具有B-raf突变的黑色素瘤具有适中的作用(15)。这可能归 因于侵袭性肿瘤转换信号转导途径的能力(16)。在伯基特淋巴瘤中观察到这一现象，其中当NFkB下调(17)时MAP激酶激活。类似地，使用万珂4中制
NFkB在黑色素瘤具有适中的功效(18，19)。
在发明人对血管发生抑制剂的筛选中，已经鉴定结构类似姜黄素和查耳 酮的小分子钯络合物，姜黄素和查耳酮是具有已知化学预防活性的化合物 (20,21)。尽管化学预防剂是有效的抗小鼠和人中癌前病变药，但是它们对已 经建立的肿瘤是较少有效的(22,23)。因此，我们研究这种新的钯络合物并发 现其具有体内抗黑色素瘤的活性。Tris DBA的进一步临床前研究得到批准。
图1:三(二亚千基丙酮)二钯体外抑制血管发生。三(dba)二钯在浓度5 吗/ml和10 (ig/ml时降低SVR细胞生存力超过90%。对照是采用载体、 DMSO。各柱形代表三份实验的平均值，误差柱反映了平均值的标准误差。
图2:使用磷酸化形式的MAPK、 Akt (a)、 p70 S6激酶(b)、 Stat-3 (c)进 行的蛋白质印迹分析。用10 ng/ml三(二亚千基丙酮)二钯处理的B16和A 375 细胞在T" T2、 T4、T8、 了24时的蛋白质印迹分析。将细胞裂解并使用特异性 用于非磷酸化形式的MAPk、磷酸化形式的MAPk、 Akt、 p70-S6激酶和Stat3 的抗体进行分析。使用单克隆抗(3微管蛋白抗体，将微管蛋白用作上样对照。
图3:用10 jag/ml三(二亚节基丙酮)二钯处理的B16和A375细胞降低 VEGFmRNA(对于18S RNA校正)的水平。显示的柱形表示三份实验的平均 值，误差柱表示平均值的标准误差。
图4: 三(dba)二钯体内对黑色素瘤的作用。六只小鼠注射1000000的 B16,六只小鼠注射A375细胞，并腹膜内注射三(dba)二钯及载体对照。继 发于对照动物中肿瘤负荷，将动物在第15天处死。以上照片表示A 375组 中每一个的平均肿瘤负荷，并用图表描述肺瘤体积(mm3)。误差柱表示平均 值的标准误差。
图5:三(dba)二钯对于肉豆蔻酰基转移酶活性的作用。Trisdba钯是有效 的NMT-1抑制剂，具有大约1微摩尔的抑制浓度(IC50)。
发明详述
以下术语将应用于整个说明书以描述本发明。
术语"患者"在整个说明书中用于描述对其提供用本发明的化合物治疗 的动物，优选人，所述治疗包括预防治疗。对于那些对于特定的动物如人患 者所特有的感染、病症或疾病状态的治疗，术语患者指的是特定的动物。在 大多数实例中，术语患者指的是人患者。术语"有效量"在整个说明书中用于描述本发明化合物的浓度或量，该浓 度或量在治疗的疾病或病症中可用于产生良好的改变，不论该改变是緩解、
降低癌症的生长或大小、肿瘤或其他生长，有益的生理学结果包括皮^yu且
织的清洁等，其取决于治疗的疾病或病症。
术语"血管发生，，在整个说明书中用于描述导致生物体中血管形成或组 织中血管形成增加的生物学过程。关于本发明，术语血管发生定义作这样的 过程，即通过该过程肿瘤或其他快速增殖组织通过微血管产生获得血液供 给。
术语"肿瘤"用于描述组织中异常生长，其在细胞增殖快于正常组织时存 在并在启动新生长停止的刺激之后继续生长。肿瘤通常显示出部分或完全缺 乏正常组织的结构组成和功能协调，通常形成良性的(良性肺瘤)或恶性的(癌) 显著量的组织。肿瘤趋向于高度血管化。术语"癌"在此用作一般术语用于描 述恶性肿瘤或癌。这些恶性肺瘤可以^曼入周围组织，可以转移至多个部位， 以及在尝试除去之后可能复发，并且如果不充分治疗造成患者死亡。如在此 所用，术语癌是包含在术语肿瘤中。
术语"血管源性疾病"、"血管源性病症，，以及"血管源性皮肤病症"在整个 说明书中用于描述作为组织中血管化增加的结果发生的或导致组织中血管 化增加的病症，通常是皮肤病症或相关病症。经常地，血管源性疾病的病因 是未知的。然而，不论血管发生是疾病状态的实际原因还是疾病状态的病症
银屑病、i疮、酒渣鼻、'疣、脂溢性皮炎、；湿瘆(特应性皮'^、血管瘤和淋 巴管生成，以及其他，包括斯德奇-韦伯综合征、神经纤维瘤病、结节性硬 化症、慢性炎症性疾病和关节炎。具有原发性和继发性特征、增加的血管化 的任何皮肤疾病被认为是用于本发明目的的血管源性皮肤疾病并且可釆用 本发明的化合物治疗。
术语"酒渣鼻"用于描述痤疮酒渣鼻或红斑痤疮，其特征在于涉及鼻和面 颊的连续部分的血管和小嚢扩张。酒渣鼻可以从非常轻微但是持久的红斑变 成皮脂腺的广泛增生且具有深在的丘渗和脓疱并伴有受侵袭的红斑部位的 毛细管扩张。也称为增生性酒渣鼻或肥大性酒渣鼻，取决于病症的严重程度。
术语"疣"用于描述皮肤上小的，.通常硬的肿瘤样生长物。疣也称为瘊， 是皮肤的肉色生长物，其特征在于真皮乳头的局限性肥大，表皮的生发层、 颗粒形成层和角质层增厚。寻常疣是疣或瘊的亚类，其特征在于人乳头瘤病 毒感染角质形成细胞。术语"银屑病"用于描述皮肤病症，其特征在于局限性的、离散的和融合 性的出渗、淡红色的银色鳞状斑丘渗，病灶主要发生于肘、膝、头皮和4区干， 显微镜下显示特征性的角化不全和网峰的延伸。
术语"痤瘠"用于描述皮肤的病症，其特征在于涉及分泌皮脂的器官的炎 性滤泡、丘渗和小脓疱的出渗。尽管存在多种形式的痤疮，但是最常见的形 式已知是单纯性痤疮或寻常痤疮，其特征在于脸部、背和胸的上部出渗，主 要包括炎症基础上的粉刺、囊肿、丘渗和脓疱。该病症主要发生在青春期和 青少年期，由认为是受激素活性影响的过于活跃的分泌皮脂的器官所导致。 术语"湿渗"是用于描述皮肤的急性或慢性炎性病症的一般术语，典型的 是红斑的、水肺性、丘渗的、泡状的和起痂，之后通常有苔藓样变和脱皮， 有时有红斑变黑，不常有色素沉着过多。湿渗通常伴有瘙痒和灼烧的感觉。 湿疹小嚢泡是由表皮内棘细胞层水肿形成。湿渗有时俗称皮渗、干性湿渗和 鳞屑性湿渗。存在湿渗的大量亚类，其全部通过本发明的一种或多种化合物 治疗。湿渗的另一个术语是特应性皮炎。
本发明的化合物用于治疗良性和恶性肿瘤，包括多种癌症如颈部、肛门 和口腔癌、胃、结肠、膀胱、直肠、肝、胰、肺、胸、子宫颈、子宫体、卵
巢、前列腺、睾丸、肾、脑/中枢神经系统(cns)(例如，胶质瘤)、头颈、目艮
或眼睛、咽喉、皮肤黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌和癌前病变(包括基底细 胞癌、鳞状细胞癌和光化性角化病)、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞 性白血病、尤因氏肉瘤、卡波西氏肉瘤、基底细胞癌和鳞状细胞癌、小细胞 肺癌、绒毛膜癌、横紋肌肉瘤、血管肉瘤、血管内皮瘤、肾母细胞瘤、成神 经细胞瘤、口/咽、食管、喉、肾和淋巴瘤等等。此外，可以用本发明的化合 物有效地治疗例如神经纤维瘤病、结节性硬化症(各个病症产生皮肤的良性 肿瘤)、血管瘤和淋巴管生成等等病症。
本发明的治疗肿瘤和/或癌症的方法包括向需要其的患者给药有效量的 本发明的 一种或多种化合物。
的其他创造性方面，所述病症包括银屑病、痤齊、酒渣鼻、疣和湿渗，以及 其他，包括斯特奇-韦伯综合征及相关病症。此外，本发明的化合物也可以 用于治疗皮肤的静脉性溃瘙。这些方法包括向需要处理或治疗的患者给药有 效量的至少 一种本发明的化合物。
本发明进一 步的创造性方面涉及在治疗关节炎和慢性炎症性疾病中使 用本发明的组合物，所述病症包括风湿性关节炎和骨关节炎等，包括狼疮和 硬皮病。这些方法也涉及向需要处理或治疗的患者给药有效量的本发明的至 少一种化合物。本发明进一步的方面涉及在HIV治疗中所考虑的组合物的应用。HIV蛋白nef的活性需要肉豆蔻酰化。
本发明的组合物包括与具有已知化学预防活性的姜黄素和查耳酮具有结构相似性的小分子钯络合物。特别地，本发明考虑三(二亚千基丙酮)二钯及包含这种化合物的组合物。
本发明的组合物还包括类姜黄素(curcuminoid)和查耳酮的钯络合物。所述类姜黄素和查耳酮是众所公知的并已经描述在文献中，所述文献包括Bowen等人的美国专利
发明者杰克·阿比瑟 申请人:杰克·阿比瑟