专利名称：纹缟虾虎鱼人工催产授精繁育方法
技术领域：
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本发明涉及虾虎鱼科鱼类的人工繁殖方法。
背景技术：
鱼类人工繁殖方法主要包括3种①打针催产人工注射催熟催 产药剂，使精卵成熟后进行人工授精；②直接进行人工授精将捕到 的亲鱼进行筛选后，直接取出精子与卵子进行人工授精；③生态繁殖 方法将亲鱼放入人工调控生态因子的养殖箱中，使其自然成熟、发 情、产卵、受精、孵化。人工繁育鱼类苗种时打针催产方法是通过定 期注射特定的外源激素，促进鱼类成熟与产卵，到达效应期后采取特 定的人工授精方法，混合精子与卵子获得受精卵，受精卵发育成胚胎， 在特定的孵化环境中直至仔鱼出膜，仔鱼摄食特定开口饵料后逐渐发 育生长为商品鱼。人工催产授精繁育鱼类苗种的办法看似简单，但自 然界每种鱼类都经历了漫长的进化史，都形成了各自繁育特点，因此 在人工繁殖时，创造发明的人工繁育方法必须适合各自鱼类的生理生 态学特点，才能获得成功。目前许多鱼类苗种的人工繁育方法仍未成 功，人工养殖时仍需依靠捕捞野生苗种。如鳗鲡苗种的人工繁育方法， 虽然国内外众多单位投入大量的人力财力，包括中国也在过去的多个 "国家五年重点科技攻关项目"中进行了研究，也取得了一些进展， 但目前鳗鲡苗种的人工繁育方法仍未完全获得成功，鳗鲡养殖仍是靠 每年捕捞鳗苗维持。当然也有许多鱼类苗种的繁育方法，经过大量研
3究，终于发明成功，并申请了发明专利，如暗纹东方豚、半滑舌鳎、 大弹涂鱼、憾鱼、裂腹鱼、翘嘴红鉑、沙塘鳢、香鱼等。
虾虎鱼类种类繁多，刘群等在1997年报道全世界虾虎鱼类有7 个科，263个属，约1720种左右，其中仅虾虎鱼科就有200个属， 至少1500种之多，成为鱼类中最大的一个科。虾虎鱼科鱼类属鲈形 目、虾虎鱼亚目，各种类之间外部形态相似，无眼睑，背鳍两个，不 相连，左右腹鳍愈合成吸盘状。虾虎鱼科鱼类分布广泛，淡水、海水 品种皆有，且一些虾虎鱼生活在咸淡水水域，盐度适应范围较广。由 于虾虎鱼科鱼类大多为野生品种，经济价值有一定的局限性，因此国 内外对虾虎鱼科鱼类的研究深入很少。目前对虾虎鱼科的繁殖生物学 研究，主要包括个体生殖力、繁殖习性与群体组成、早期生活史等报 道。关于虾虎鱼科鱼类苗种繁育的报道，赵斌，范丽萍，王建等人于 2005年在《渔业现代化》期刊上报道矛尾复虾虎鱼的繁殖情况，主 要依靠天然成熟的矛尾复虾虎鱼亲鱼，在池塘中自然产卵并孵化出鱼 苗后，人工投喂豆浆等饵料，然后捕捞池塘中的鱼苗。他们的繁殖技 术是自然条件下的繁殖技术，其亲本是天然环境中自然成熟的亲鱼。
纹缟鰕虎鱼 (7>iofe/7Z^>er ^ri'^w7oc印力aJ"5")属鲈形目 (Percifo匿s)鰕虎鱼科(Gobiidae)缟鰕虎鱼属(Tridentiger)， 该鱼喜穴居，以小虾、小鱼等为食，雌雄个体有明显差异。纹缟鰕虎 鱼为沿岸广盐性底栖鱼类，主要分布于亚洲东北部的太平洋沿岸，在 我国主要见于黄渤海、东海、南海和台湾海峡等水域，亦是长江口低 盐度区域常见的小型鱼类。纹缟鰕虎鱼的繁殖期较长，性腺成熟度不 统一，精子与卵子存在发育不同步的问题，而且捕到的亲鱼中雌鱼较 多，而雄鱼较少。目前未见有关纹缟鰕虎鱼苗种人工繁育方法的报道。纹缟虾虎鱼作为长江口水域生态系统的关键种之一，在生态系统 的物质传递与能量流动中具有重要作用，亦是长江口中华鲟幼鱼最主 要的饵料生物之一，因此发明纹缟虾虎鱼苗种人工繁育方法，对于长 江口生态环境的可持续发展以及中华鲟物种的保护具有重要的意义。
发明内容
本发明目的在于针对纹缟虾虎鱼人工繁殖与育苗技术所存在的 问题，提供一种纹缟虾虎鱼人工催产授精的苗种繁育方法。
本发明的技术方案由亲鱼筛选、催熟、人工授精、孵化、仔鱼培 育依次结合组成，首先通过亲鱼头部形态与可量性状的比值进行雌雄 鉴定(头部宽平且颊部肌肉突出为雄鱼特征，头部三角形为雌鱼特征； 雄鱼体长/体高、头长/眼径和头长/吻长显著大于雌鱼，而体长/头长、 头长/眼间距显著小于雌性亲鱼)并筛选(雄鱼的胸鳍呈亮黄色，并有 明显黑色斑点在胸鳍上；雌鱼腹部膨大突出，生殖孔外突，呈红色) 发育较好的亲鱼；亲鱼催熟注射用的激素为促黄体素释放激素类似物 (LHRH-A2)、马来酸地欧酮(DOM)和绒毛膜促性腺激素(HCG)， 3种激素用生理盐水溶解混合，其特征是每公斤鱼体重用的激素剂 量为LHRH-A2 IO微克、DOM4.8毫克、HCG 1600IU (国际单位) 这3种激素剂量分两次催熟使用(雌雄鱼剂量相同)，相隔时间为12 小时，第1次催熟使用LHRH-A2 4微克、DOM 4.8毫克和1毫升生 理盐水，第2次催熟使用LHRH-A2 6微克、HCG 1600 IU和1毫升 生理盐水；催熟时养殖环境条件控制在水温18—2rC，盐度2 — 6， 溶解氧3.5 — 6.5 mg/L， pH 7.5 9.0;在第2次催熟后，在水温20°C 条件下，经过8 — 10小时即进行挤卵与挤精，先挤出雌鱼卵子检査其 成熟度，选取卵子圆形呈黄色、油球较多且具有较好光泽度、卵膜外侧粘着丝发达的成熟卵用于人工授精然后检査精子成熟度，选取精 巢饱满呈乳白色、精巢表面充满精液的成熟精子用于人工授精精子 遇水后活力在80%以上，将激活的精子浇于卵子上，用镊子搅动让卵 子与精子充分接触受精，即获得受精卵；将受精卵放在筛绢网上，置 于孵化池中孵化，孵化池池底和池壁铺设黑色瓷砖；孵化条件控制在 温度17—2rC，每昼夜光照12h以上，pH 7.5—9.5，盐度为4一6， 溶氧6mg/L以上，保持水体的流速维持在1厘米/秒以下，经过150 一200小时仔鱼即可破膜而出；将孵出的仔鱼置于培育池中孵化，培 育条件在温度18—21。C，每昼夜光照12h, pH7.5—9.5，盐度为2 — 4,在仔鱼出膜后第3天开始在水中放入小球藻和鸡蛋的蛋黄粉末供 其开口摄食(纹缟鰕虎鱼仔鱼3—4日龄时能够摄食外部食物，发育 进入外源营养和内源营养混合期)，5日龄时仔鱼卵黄囊完全消失， 完成早期仔鱼发育阶段。
本发明的优点表现在选择亲鱼催产所需的激素适宜的剂量以及 有效的催产方法，利用纹缟虾虎鱼生殖的生理和生态特性，选择能够 获得高受精率的成熟卵，并采用内分泌调控和模拟生殖环境的方法， 通过人工授精方法，极大提高了亲鱼的催熟率、受精率与出苗率，使 得纹縞虾虎鱼人工繁殖首次获得成功，取得突破性的积极效果。
具体实施例方式
本发明操作按如下次序进行
l.亲鱼筛选将自然水域捕捞的纹缟鰕虎鱼亲鱼，充氧运回繁殖 地。首先进行雌雄鉴定，头部宽平且颊部肌肉突出为雄鱼特征，头部 三角形为雌鱼特征，在外部形态上可通过肉眼观察亲鱼头部形状直接 区分亲鱼性别，为雌雄鱼的挑选提供快速的鉴定方法。另外雌雄亲鱼体长/体高、体长/头长、头长/眼径和头长/眼间距之间存在极显著差 异，头长/吻长存在显著差异，其中雄鱼体长/体高、头长/眼径和头 长/吻长显著大于雌鱼，而体长/头长、头长/眼间距显著小于雌性亲 鱼，通过形态可量性状的比值亦可以方便的进行雌雄鉴定(见表1)。 雌雄鉴定后，筛选发育较好的考鱼进行繁殖，筛选特征为雌鱼的腹部 膨大突出，生殖孔外突，呈红色；雄鱼的胸鳍呈亮黄色，并有明显黑 色斑点在胸鳍上。
表l纹缟虾虎鱼雌、雄亲鱼形态学可量性状比例值
可量性状比例值雌性亲鱼雄性亲鱼P值(显著性)
全长/体长1.21±0.021.22±0.03P>0.05
体长/体高4.40±0.405.96±0.43P<0.01
体长/头长3.86±0.163.62±0.24PO.01
头长/吻长3.61±0.254.00±0.500.0KPO.05
头长/眼径5.42±0.426,39±0.92PO.01
头长/眼间距5.14±0.623.70±0.38P<0.01
体长/尾柄长4.66±0.294.56±0.24P>0.05
尾柄长/尾柄高2.04士0.142.02±0.17P>0.05
2.亲鱼催熟在5平方米水泥池中放入20对纹缟鰕虎鱼亲鱼， 即放入20尾雌纹缟鰕虎鱼亲鱼和20尾雄纹缟鰕虎鱼亲鱼。水泥池中 有25个瓦片等筑成的洞穴，可供纹缟鰕虎鱼亲鱼钻入其中，催熟时 养殖环境条件控制如下水温18 — 2rC，盐度2—6，溶解氧3.5 — 6.5 mg/L， pH7.5 9.0。暂养1周稳定后采用激素催熟，采用的激素为促 黄体素释放激素类似物(LHRH-A2)、马来酸地欧酮(DOM)和绒毛 膜促性腺激素(HCG)， 3种激素用生理盐水溶解混合，对于每公斤 鱼体重采用的激素剂量为LHRH-A2 IO微克、DOM 4.8毫克、HCG 1600IU (国际单位)，雌雄鱼剂量相同，上述剂量分成两次催熟，相 隔时间为12小时，第1次催熟剂量为LHRH-A2 4微克、DOM 4.8毫 克和1毫升生理盐水，第2次催熟剂量为LHRH-A2 6微克、HCG 1600
7200810041572. IU和1毫升生理盐水。
3. 人工授精亲鱼催熟后，在水温2(TC条件下，经过8 —10小
时即可挤卵与挤精。采用半干法进行人工授精。先挤出雌鱼卵子检查
其成熟度，选取具有以下特征的成熟卵用于人工授精卵子圆形呈黄 色；油球较多且具有光泽度；卵膜外侧粘着丝发达。然后检查精子成 熟度，选取具有以下特征的成熟精子用于人工授精精巢饱满呈乳白 色；精巢表面充满精液；精子遇水后活力在80%以上。半干法人工授 精的操作过程如下取雌鱼卵巢，在培养皿中用镊子将卵子分开，同 时取雄鱼精巢，剪成小块，置于研钵内研磨后，加少许4%。海水激活 精子，立即将激活的精子浇于卵子上，用镊子搅动让卵子与精子充分 接触受精，即可获得受精卵。采用这样的人工授精方法具有较高的受 精率(见表2 — 5)
4. 受精卵孵化将受精卵放在筛绢网上，置于孵化池中孵化，孵
化池池底和池壁铺设黑色瓷砖。孵化条件控制如下温度i7—2rc，
每昼夜光照12h以上，pH 7.5—9.5，盐度为4一6，溶氧6mg/L以上， 保持水体具有缓慢的流速，l厘米/秒以下。经过150—200小时仔鱼 即可破膜而出。在这样合适的环境下具有较高的孵化率(见表2 — 5)。
表2不同温度中纹缟虾虎鱼的受精率、孵化率与发育时间
水温rc)受精率(％)孵化率(％)发育时间(h)
1780.37±8.2560.72±2.31257.2±10.8
1978.97±1.4664.77±2.22208.7±12,8
2173.54±4.0559.84±1.54178.5±5.3
2367.02±2.9543.0U4.30168.6±6.8
2531.92±9.4913.35±2.54156.5±7.1表3不同光照条件中纹缟虾虎鱼的受精率、孵化率与发育时间
光照受精率(％)孵化率o)发育时间(h)
自然光照82患4.0059.16±2.99176.9±2.4
长光照81.33±7.0250.63±2.25171.5±2.3
长黑暗82.67±4.1655.19±3.67175.3±2.9
表4不同pH中纹缟虾虎鱼的受精率、孵化率与发育时间pH值受精率(％),.孵化率(％)发育时间(h)
4.581.37±1.4328.93±3.26214.2±6.03
5.584,53±1.7340.92±23.22198.2±4.45
6.583.89±2.9646.46± 15.59187.6±3.43
7.587.23±4.4154.79土12.41188.8±1.89
8.583.81±4.3670.06±8.70180.1±4.58
9.586.47±2.7759.09±8.26177.3±3.45
表5不同盐度中纹缟虾虎鱼的受精率、孵化率和孵化时间盐度受精率(。/。)孵化率(％)出膜时间(h)
070.75±3.5657.61±3.01230.6±5.5
272.57±4.4061.34±2.55236.6±4.5
476.28±2.7366.95±2.99228.8±5.9
674.63±5.4962.15±2.18221.5±5.2
870.97±4.1654.66±8.29239.1±3.7
1071.7肚3.9755.43±10.15232.8±3.6
5.仔鱼培育将孵出的仔鱼置于培育池中孵化，培育条件控制如
下温度18—21。C，每昼夜光照12h， pH 7.5—9.5，盐度为2—4， 在此条件睛仔鱼具有较高的生存活力指数(表6—9)。在仔鱼出膜后第 3天开始在水中放入小球藻和鸡蛋的蛋黄粉末供其开口摄食。刚出膜 的纹缟鰕虎鱼仔鱼身体透明，全长2.534 ± 0.078 mm，体高0.559 ± 0.053 mm，卵黄囊长径0.421 ± 0.047 mm，卵黄囊短径0.369 ± 0.038 mm，油球偏近于卵黄囊前端，仍处于内源营养时期，3—4日龄时能 够摄食外部食物，发育进入外源营养和内源营养混合期，5日龄时仔 鱼卵黄囊完全消失，完成早期仔鱼发育阶段。
表6饥饿时不同温度中纹缟虾虎鱼仔鱼的成活率和生存活力指数SAI
9仔鱼在不同天数中的存活率(％)
皿/义、w12345678910111213
17100085 0訓訓80 0訓75.075.070.050.030.00.00.042.95
19隨075 075 075.075.075 075.075 075.025.015.015.00.039.95
21跳o85085.0訓80.080.0訓訓65.020.015,05.00-039 35
23薩o90,0卯.O85.085 085.080.060.050.05.05.00.00.034.20
25100.0訓75.075.075.075 t)'65.060.0訓5.00.00.00026.85
表7饥饿时不同光照条件下纹缟虾虎鱼仔鱼的成活率和生存活力指数SAI
光照
仔鱼在不同天数中的存活率(％)
1
4
6
89 10 11 12 13 14 15
自然光照 100.083.383.383.383.380 080 080.073.360.053.353.3 6.7 0.0 0.0 55.20
长光照 100.083.380 076 776.776.776.776.776.770.060.040.016.7 6,7 0.0 56.47
K;黑暗 100 076.773.370 070.070.066.766.720.0 3.3 3.3 0.0 0.0 0.0 0 0 27.73
表8饥饿时不同pH中纹缟虾虎鱼仔鱼的成活率和生存活力指数SAI
PH
仔鱼在不同天数中的存活率(。/。)
SAI
123456891011213
4 5100 0訓訓76.760 060 053.346 710.010.0"0.00.024.40
100.076.776 776.776 776 773.363.316.70.0000028.37
6.5100.073.370.063.363 363.360.056 736.713.30.0000.027.43
100.073.373.373.373.373.373 373.363.3御26.716.70041 30
8.5100.063.360.056 756.756.756.756.740 023 323.3"0.029.97
9 5100 076.770.070 070.070.070 070.050.020.03.30.00.032.50
表9饥饿时不同盐度中纹缟鰕虎鱼仔鱼的成活率和生存活力指数SAI
;t卜
JUL
仔鱼在不同天数中的存活率(％)
度1234567891011121314
0跳086.786.786.783.383.376.770.056.750.040.020.03.30.046.27
100.086.783.383.380.080.076.770.060.043.333.316.710.00.045.03
4100.090.090.090.086.786.776.770.056.743.333.320.013.30.046.83
6跳086.786.786.783.383.373.360.046.740.030.016.73.30.041.83
8100.080.080.076.770.070.056.750.033.316.76.70.00.00.029.13
10100.076.773.373.363.356.743.333.320.013.33.30.00.00.023.43
10
权利要求
1、纹缟虾虎鱼人工催产授精繁育方法，由亲鱼筛选、催熟、人工授精、孵化、仔鱼培育依次结合组成，首先进行雌雄鉴定并筛选发育较好的亲鱼；亲鱼催熟用的激素为促黄体素释放激素类似物(LHRH-A2)、马来酸地欧酮(DOM)和绒毛膜促性腺激素(HCG)，其特征是每公斤鱼体重用的激素剂量为LHRH-A2 10微克、DOM 4.8毫克、HCG 1600IU(国际单位)，这3种激素剂量分两次催熟使用，两次相隔时间为12小时，第1次催熟使用LHRH-A24微克、DOM 4.8毫克和1毫升生理盐水，第2次催熟使用LHRH-A26微克、HCG 1600IU和1毫升生理盐水；催熟时养殖水温18-21℃，盐度2-6，溶解氧3.5-6.5mg/L，pH 7.5～9.0；在第2次催熟后，在水温20℃条件下，经过8-10小时即进行挤卵与挤精，先挤出雌鱼卵子，选取卵子圆形呈黄色、油球较多且具有较好光泽度、卵膜外侧粘着丝发达的成熟卵用于人工授精然后选取精巢饱满呈乳白色、精巢表面充满精液的成熟精子用于人工授精将激活的精子浇于卵子上，让卵子与精子充分接触受精，即获得受精卵；将受精卵放在筛绢网上，置于孵化池中孵化，孵化池池底和池壁铺设黑色瓷砖；孵化条件控制在温度17-21℃，每昼夜光照12h以上，pH 7.5-9.5，盐度为4-6，溶氧6mg/L以上，保持水体的流速维持在1厘米/秒以下，经过150-200小时仔鱼即可破膜而出；将孵出的仔鱼置于培育池中孵化，培育条件在温度18-21℃，每昼夜光照12h，pH 7.5-9.5，盐度为2-4，在仔鱼出膜后第3天开始在水中放入小球藻和鸡蛋的蛋黄粉末供其开口摄食，5日龄时仔鱼卵黄囊完全消失，完成早期仔鱼发育阶段。
全文摘要
纹缟虾虎鱼人工催产授精繁育方法，涉及虾虎鱼的人工繁殖，需要提供一种纹缟虾虎鱼人工繁育方法，本发明由亲鱼筛选、催熟、授精、孵化、仔鱼培育组成，亲鱼催熟用促黄体素释放激素类似物、马来酸地欧酮和绒毛膜促性腺激素，其特征是3种激素分两次催熟使用；催熟时养殖水温18-21℃，盐度2-6，溶解氧3.5-6.5mg/L，pH 7.5～9.0；在第2次催熟后，经过8-10小时，选取成熟卵、成熟精子用于人工授精将激活的精子浇于卵子上充分接触获得受精卵；将受精卵置于孵化池中孵化；将孵出的仔鱼置于培育池中孵化，在仔鱼出膜后第3天开始在水中放入小球藻和鸡蛋的蛋黄粉末供其开口摄食。本发明用于纹缟虾虎鱼人工繁育。
文档编号A01K61/00GK101647412SQ20081004157
公开日2010年2月17日 申请日期2008年8月11日 优先权日2008年8月11日
发明者冯广朋, 刘鉴毅, 平 庄, 章龙珍 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所