专利名称：：大核淡水珠的培育方法
技术领域：
：本发明涉及一种养殖珍珠的方法，特别是一种淡水大核珍珠的培育方法。技术背景现在，一般的淡水河蚌养殖珍珠的方法中，是在河蚌的外套膜中插入用外套膜制成的细胞小片，用此方法养殖迟来的珍珠称为无核珍珠，其直径较小,市场售价较低，经济效益不高。国内的有核珍珠的生产以海水有核珍珠为主，原因是海水珍珠母贝较大，插核部位也不在外套膜而以内脏囊为主。淡水河蚌插核，无论是在外套膜还是在内脏囊都难以取得成功。在大规模生产上还没有得到实际应用，因为在手术时存在死亡率高、吐核率高核成圆率低等问题。在日本，有的采用针式送核器将珠核与细胞小片送入河蚌体内育珠，但其送核时必须在珠核上钻孔才能插入，所以成珠有明显的凹形孔位，影响质量，使经济效益降低。为此，中国专利号为00117190.9发明的用淡水河蚌养殖珍珠的插核方法，先将细胞小片紧贴在珠核上，然后用无创送核器将贴有细胞小片的珠核送入河蚌的外套膜或者内脏囊中的核位上。此种方法简单，可一次性完成插核过程，成活率增高，适合大规模生产，但是，由于一次成型，故成珠的直径虽比无核珍珠大，但是要达到珠宝级的大珍珠就有一定难度。
发明内容本发明的目的是提供一种操作简单、成活率高、成珠大、珠层厚、经济效益好的淡水有核珍珠的培育方法。本发明的技术方案是如此实现的大核淡水珠的培育方法，包括选核一插核一养殖，插核分两次进行第一次，先培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞，将其粘着于珠核上，然后将此珠核送入河蚌的外套膜或内脏囊中的核位上，养殖10-20个月，进行活蚌取珠；第二次，将15mm以上的珠核，插入珍珠囊中，养护30-50个月。作为优选，培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞应配制平衡盐溶液和培养基，其配方为(一)平衡盐溶液(g/L)A液:NaClKC13.5—8.00.15—0.55Na2HP0412H200.05-0.09MgSO40.Ol-O.05MgC126H200.02—0.11NaIiC030.01—0.05KH2P040,5%酚红0.01-0.050.4-0.80.4-1.0ml以上药品溶于800-1200ml双蒸水中，35.59-44.48N灭菌12-25分钟。B液CaCl20.02-0.08CaCL用90-110ml双蒸水单独溶解，35.59-44.48N灭菌12-25分钟。将A液和B液混合，用lmol/LK0H调PH值至6.7-7.0。(二)培养基1640原液18-30ml，牛血清7-15ml。上述培养基用lmol/LK0H调整PH值为6.7-7.0。加入清链霉素使其终浓度达到每毫升青霉素95-115IU,链霉素95-115ug，分装入培养用的小方瓶，每瓶中滴入鸡胚汁2-4滴，并加入少量细胞生长刺激剂。作为优选，用于插入的珠核先在清水中浸泡24-36个小时，然后放在70-80'C的热水中浸泡30-40分钟。作为优选，第一次插核选用扁平纽扣珠核为内核。作为优选，第二次插核选用直径为15mm以上的圆形珠核。作为优选，所述第二次插核是将珠核插入第一次培育珍珠后形成的珍珠囊中，在珠核表面上无需粘着细胞小片或生物细胞。作为优选，第二次插核之前，取出蛘内第一次插核形成的珍珠的方法为:用开壳器从蚌的腹后端插入，慢慢撑开并加塞固定，使其双壳不能闭合，用拔鳃板把内脏团拨向暂不取珠的一侧，用弯针将珍珠固定，后用手术刀在珍珠囊上划一伤口，轻推珍珠将其从珍珠囊中取出。本发明将插核过程分为两次进行，先用平衡盐溶液和培养基培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞，第一次采用扁平纽扣珠为内核，其上粘有细胞组织小片或生物细胞，将其送入外套膜或内脏囊的核位上，第二次采用15mm以上的圆形珠核，插入第一次培育珍珠后形成的珍珠囊中。本发明具有操作简单、成活率高、成珠直径大、珠层厚的特点。通常可培育出直径达20mm以上的珠宝级珍珠。具体实施方式下面通过实施例，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。实施例l:大核淡水珠的培育方法，包括选核一插核一养殖，插核分两次进行第一次，先培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞，将其粘着于扁平纽扣珠核上，然后将此珠核送入河蚌的外套膜或内脏囊中的核位上，养殖15个月，进行活蚌取珠；第二次，将15mm的圆形珠核，插入第一次培育珍珠后形成的珍珠囊中，养护40个月。用于插入的珠核先在清水中浸泡30个小时，然后放在75"C的热水中浸泡35分钟。培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞应配制平衡盐溶液和培养基，其配方为(一)平衡盐溶液(g/UA液NaCl5.5Na2HP(^12H200.09KC10.35KH2P040.04MgS040.04MgC126H200.03葡萄糖0.5%酚红0.40.7mlNaHC030.35以上药品溶于1000ml双蒸水中，40N灭菌18分钟。B液CaCl20.08CaCL用100ml双蒸水单独溶解，40N灭菌18分钟。将A液和B液混合，用lmol/LKOH调PH值至7.0。(二)培养基1640原液22ml，牛血清8ml。上述培养基用lmol/LKOH调整PH值为7.0。加入清链霉素使其终浓度达到每毫升青霉素IOOIU，链霉素100ug，分装入培养用的小方瓶，每瓶中滴入鸡胚汁3滴，并加入少量细胞生长剌激剂。第二次插核之前，取出蚌内第一次插核形成的珍珠的方法为用开壳器从蚌的腹后端插入，慢慢撑开并加塞固定，使其双壳不能闭合，用拔鳃板把内脏团拨向暂不取珠的一侧，用弯针将珍珠固定，后用手术刀在珍珠囊上划一伤口，轻推珍珠将其从珍珠囊中取出。实施例2:参考实施例1，大核淡水珠的培育方法包括选核一插核一养殖，插核分两次进行第一次，先培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞，将其粘着于扁平纽扣珠核上，然后将此珠核送入河蚌的外套膜或内脏囊中的核位上，养殖20个月，进行活蚌取珠；第二次，将15mm的圆形珠核，插入第一次培育珍珠后形成的珍珠囊中，养护46个月。用于插入的珠核先在清水中浸泡35个小时，然后放在75。C的热水中浸泡40分钟。培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞应配制平衡盐溶液和培养基，其配方为(一)平衡盐溶液(g/UA液:NaClKC17.50.45Na2HP0412H20KH2P04MgS040.03MgC126H200.070.5%酚红0.060,050.70.8mlNaHC030.45以上药品溶于1100ml双蒸水中，40N灭菌22分钟<B液:Ca_Cl20.06CaCL用100ml双蒸水单独溶解，40N灭菌20分钟。将A液和B液混合，用lmol/LK0H调PH值至6.9。(二)培养基1640原液24ml，牛血清12ml。上述培养基用lmol/LK0H调整Hi值为7.0。加入清链霉素使其终浓度达到每毫升青霉素IIOIU，链霉素110ug，分装入培养用的小方瓶，每瓶中滴入鸡胚汁4滴，并加入少量细胞生长剌激剂。第二次插核之前，取出蚌内第一次插核形成的珍珠的方法为用开壳器从蚌的腹后端插入，慢慢撑开并加塞固定，使其双壳不能闭合，用拔鳃板把内脏团拨向暂不取珠的一侧，用弯针将珍珠固定，后用手术刀在珍珠囊上划一伤口，轻推珍珠将其从珍珠囊中取出。权利要求1、大核淡水珠的培育方法，包括选核—插核—养殖，其特征在于插核分两次进行第一次，先培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞，将其粘着于珠核上，然后将此珠核送入河蚌的外套膜或内脏囊中的核位上，养殖10-20个月，进行活蚌取珠；第二次，将15mm以上的珠核，插入珍珠囊中，养护30-50个月。2、根据权利要求1所述的一种淡水有核珍珠的培育方法，其特征在于所述培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞应配制平衡盐溶液和培养基，其配方为<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table>以上药品溶于800-1200ml双蒸水中，35.59-44.48N灭菌12-25分钟。B液CaCl20.02-0.08CaCL用90-110ml双蒸水单独溶解，35.59-44.48N灭菌12-25分钟。将A液和B液混合，用lmol/LK0H调PH值至6.7-7.0。(二)培养基1640原液18-30ml，牛血清7-15ml。上述培养基用lmol/LK0H调整PH值为6.7_7.0。加入清链霉素使其终浓度达到每毫升青霉素95-115IU，链霉素95-115ug，分装入培养用的小方瓶，每瓶中滴入鸡胚汁2-4滴，并加入少量细胞生长刺激剂。3、根据权利要求1所述的一种淡水有核珍珠的培育方法，其特征在于所述用于插入的珠核先在清水中浸泡24-36个小时，然后放在70-8(TC的热水中浸泡30-40分钟。4、根据权利要求1所述的一种淡水有核珍珠的培育方法，其特征在于所述第一次插核选用扁平纽扣珠核为内核。5、根据权利要求1所述的一种淡水有核珍珠的培育方法，其特征在于所述第二次插核选用直径为15mm以上的圆形珠核。6、根据权利要求1所述的一种淡水有核珍珠的培育方法，其特征在于所述第二次插核之前，取出蚌内第一次插核形成的珍珠的方法为用开壳器从蚌的腹后端插入，慢慢撑开并加塞固定，使其双壳不能闭合，用拔鳃板把内脏团拨向暂不取珠的一侧，用弯针将珍珠固定，后用手术刀在珍珠囊上划一伤口，轻推珍珠将其从珍珠囊中取出。全文摘要本发明涉及一种淡水大核珍珠的培育方法，包括选核—插核—养殖，插核分两次进行，第一次，先培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞，将其粘着于珠核上，然后将此珠核送入河蚌的外套膜或内脏囊中的核位上，养殖10-20个月，进行活蚌取珠；第二次，将15mm以上的珠核，插入珍珠囊中，养护30-50个月；培养具有增殖能力的细胞组织小片或生物细胞应配制平衡盐溶液和培养基。本发明具有操作简单、成活率高、成珠直径大、珠层厚的特点。通常可培育出直径达20mm以上的珠宝级珍珠。文档编号A01K61/00GK101248772SQ20081005973公开日2008年8月27日申请日期2008年2月20日优先权日2008年2月20日发明者阮铁军申请人:浙江阮仕珍珠股份有限公司