专利名称：一种酒红土褐链霉菌菌剂及制备方法
技术领域：
本发明涉及到酒红土褐链霉菌菌剂及制备方法，属于微生物肥料和发酵工程技术 领域，特别是连作障碍防治制剂技术领域。
背景技术：
设施栽培是现代农业最重要的生产方式之一，在丰富人们菜篮子的同时，还提高 了农民收入。目前，设施蔬菜生产已经成为我国种植业的第二大支柱产业，设施蔬菜产值占 蔬菜总产值的50%以上。由于设施栽培具有设施固定，倒茬困难，设施土壤缺乏雨水溶淋等 特点，再加上栽培技术的滞后，随着种植年限的延长，会普遍发生病虫害加剧、产量和品质 下降等连作障碍现象。一般连茬种植5年后，减产损失在20%以上，严重地块达到经济阈 值以下，甚至会绝收，连作障碍已经成为制约设施栽培可持续发展的瓶颈。研究表明，土壤 次生盐渍化、土壤病原物和自毒物质积累是发生连作障碍的主要成因，由于连作障碍的构 成多样，防治非常困难，是一国际性难题。以有益微生物为核心的生物防治是国内外研究的 热点，链霉菌是目前研究和应用最广泛的生防因子之一，开发应用的产品涉及杀菌、杀虫、 除草、生长调节、抗病毒等多种制剂。但大多以抗生素、激素等次级代谢产物的开发利用为 主，将活菌体作为生防或生物调控剂的还较少。由于自然土壤中该菌的密度较低，需要通过 人为扩大培养，将其回接到植物根际才能发挥其生物功效，这就需要研制适于规模化生产 的高效菌剂及其发酵工艺和条件。较高的活菌密度是提高生产效率，提高应用效果，降低生 产和使用成本的关键。只有在模拟土壤自然环境条件下，该菌株才可以正常生长繁殖，并产 生大量的分生孢子，因此，制备链霉菌S506菌剂采用固体发酵工艺比液体发酵工艺更有前 途。但是，目前国内外还没有成熟的链霉菌固体发酵工艺，主要难题在于，固体发酵效率低， 容易污染，难以实现封闭接种。另外，发酵设备也是制约固体发酵工业化的难题之一，但近 几年已有较为成熟的固体发酵罐面市。但目前应用的菌株及其产品功能单一，且防效低，效果不稳定，缺乏针对连作障碍 成因的优势菌株和高效应用技术。
发明内容
本发明的目的在于针对上述问题，提供一种具有防病、促生和解毒等多种功能的 根际益生菌菌株一酒红土褐链霉菌作为菌剂有效成分，并给出一套模拟土壤自然环境条件 下适于酒红土褐链霉菌生长发酵工艺。本发明给出的技术方案是这种酒红土褐链霉菌菌剂是以保藏编号为 CGMCCNo. 2664的酒红土褐链霉菌活菌菌种通过液体深层发酵或固体发酵制备的活菌培养 物为有效成份组成。链霉菌属酒红土褐链霉菌(Str印tomycesvinaceusdrappus)，暂定名为 S506，已于2008年9月11日提交中国普通微生物保藏中心保藏，该菌种是从河北省栾城县 番茄根际土壤分离获得的。所述的酒红土褐链霉菌菌剂中酒红土褐链霉菌菌种DNA序列测定结果为
GGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGATGAACCACTTCGGTGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAA CACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATACTGATCCTCGCAGGC ATCTGCGAGGTTCGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCAC CAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGG AGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGG TTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGC AGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAG GCGGCTTGTCACGTC GGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAA TTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGA CGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCACTAGG TGTGGGCAACATTCCACGTTGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCT AAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTT ACCAAGGCTTGACATACACCGGAAAACCCTGGAGACAGGGTCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGT CGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCTT GTGGTGCTGGGACTCACGGGAGACCGCCGGGTCACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCTTAT GTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGC CGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCT GCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCC CAACCCCTTGTGGGAGGGGAGCTGTCG。所述的酒红土褐链霉菌活菌培养物还可以加入草炭粉作为载体或辅料。所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，其特征在于步骤包括A、菌种活化将酒红土褐链霉菌接种至高氏合成培养基平板上，28-35°C培养，反 复转接2-3次，培养1周，使菌种活化；B、酒红土褐链霉菌的液体种子制备种子培养物料由质量比为2-8%的麸皮或米糠粉、2-4%玉米粉、0. 5_2%豆饼粉、 0. 5-2%甘油、0. 硝酸钠、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫酸镁、 0. 05%硫酸亚铁和其余的水组成，自然pH，分装于三角瓶121-130°C高压灭菌30-60分钟， 冷却至25-35°C，接种步骤A得到的酒红土褐链霉菌菌种，在25-30°C下，摇瓶培养48-72小 时；C、酒红土褐链霉菌的液体深层发酵以步骤B的培养物为种子，以3-10%的比例接种于液体发酵罐的液体培养物料 中，液体培养物料和培养条件与步骤B相同，通气搅拌培养72小时，加入两倍体积的草炭粉 吸附制得链霉菌菌剂。所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，步骤B和步骤C所述的酒红土褐链霉菌 的液体种子培养物料由质量比为2%的麸皮粉、2%玉米粉、豆饼粉、0. 5%甘油、0. 硝 酸钠、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫酸镁、0. 05%硫酸亚铁和其 余的水组成。所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，步骤B和步骤C所述的酒红土褐链霉菌 的液体种子培养物料由质量比为4%的麸皮粉、4%玉米粉、2%豆饼粉、0. 5%甘油、0. 硝酸钾、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫酸镁、0. 05%硫酸亚铁和其 余的水组成。所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，所述的步骤包括A、菌种活化将酒红土褐链霉菌接种至高氏合成培养基平板上，28-35培养，反复转接2-3次，培养1周，使菌种活化；B、酒红土褐链霉菌的液体种子制备种子培养物料由质量比为2-8%的麸皮或米糠粉、2-4%玉米粉、0. 5_2%豆饼粉、 0. 5-2%甘油、0. 硝酸钠、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫酸镁、 0. 05%硫酸亚铁和其余的水组成，自然pH，分装于三角瓶121-130°C高压灭菌30-60分钟， 冷却至25-35°C，接种步骤A得到的酒红土褐链霉菌菌种，在25-30°C下，摇瓶培养48-72小 时；C、酒红土褐链霉菌的固体发酵固体发酵物料由质量比为35-50%的麸皮或米糠，5-10%的麦饭石粉、页岩粉或沸 石粉，1-2%的豆饼粉，0. 05%的硝酸钾、0. 15%的磷酸氢二钾、0. 15%的氯化钠、0. 4%的碳 酸钙和其余的水组成，121-130°C高压灭菌，冷却至25-35°C，按3-10%的比例接入步骤B的 液体菌种，搅拌均勻，分装于无菌曲盘，在30士5°C条件下，间断通气培养72小时，35-50°C 低温风干至物料含水量在12%以下，制得链霉菌菌剂。所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，步骤C所述的酒红土褐链霉菌的固体发 酵物料由质量比为35%的麸皮、10%的麦饭石粉、的豆饼粉，0. 的硝酸钾、0. 15%的 磷酸氢二钾、0. 15%的氯化钠、0. 4%的碳酸钙和其余的水组成。所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，步骤C所述的酒红土褐链霉菌的固体发 酵物料由质量比为50%的麸皮、5%的页岩粉、2%的豆饼粉，0. 的硝酸钾、0. 15%的磷酸 氢二钾、0. 15%的氯化钠、0. 4%的碳酸钙和其余的水组成。所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，步骤C所述的酒红土褐链霉菌的固体发 酵物料由质量比为50%的麸皮、5%的沸石粉、的豆饼粉，0. 的硝酸钾、0. 15%的磷酸 氢二钾、0. 15%的氯化钠、0. 4%的碳酸钙和其余的水组成。本发明酒红土褐链霉菌菌剂的应用包括其活菌培养物用于制备防治栽培连作障 碍、防病促生和解毒功能的土壤生物修复剂或调理剂。本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于以北方设施蔬菜生产现状为 背景，在进一步探明连作障碍的现状、构成和成因的基础上，提出了通过对根际微生态和根 系的综合调控，实现高效稳定防治的研究思路，以具有防病、促生和解毒等多种功能的根际 益生菌菌株酒红土褐链霉菌S506菌种为有效成分制备出酒红土褐链霉菌菌剂，提供一种 适于酒红土褐链霉菌的“液体制种，固体发酵”新工艺，实现了有效活菌数和产孢率高，杂菌 污染少，发酵周期短的技术要求，适于工业化生产。将该菌的活菌体施入蔬菜根际，可有效 防治枯萎病、根腐病、根结线虫病等多种蔬菜根部病害，并具有显著的促进根系发育和降解 根系自毒物质功能，在有效防治蔬菜、果树、药材等普遍发生的连作障碍难题具有广阔应用 前景。
具体实施例方式本发明酒红土褐链霉菌菌剂提供的菌种是链霉菌属酒红土褐链霉菌 (Streptomyces vinaceusdrappus)，暂定名为S506，已于2008年9月11日提交中国普通微 生物保藏中心保藏，保藏编号为CGMCCNo. 2664。该菌种是从河北省栾城县番茄根际土壤分 离获得的。本发明所述的酒红土褐链霉菌菌剂(Sti^ptomyces vinaceusdrappus) S506，主要 是利用其活菌培养物，生产具有防病促生和解毒功能的土壤生物修复剂或调理剂，用于连 作障碍的防治。酒红土褐链霉菌菌剂活菌培养物的制备即可液体深层发酵也可固体发酵，对培养基物料无特殊要求，满足菌株生长的碳源、氮源、磷源和无机盐即可，麸皮、米糠、淀粉、各类 渣油饼粕以及磷酸盐、食盐等均可用作培养物料，对PH值无特殊要求，培养过程适当通气 或搅拌。较高的活菌密度是提高生产效率，提高应用效果，降低生产和使用成本的关键。只 有在模拟土壤自然环境条件下，该菌株才可以正常生长繁殖，并产生大量的分生孢子，因 此，制备酒红土褐链霉菌S506菌剂采用固体发酵工艺比液体发酵工艺更有前途。 实施例1酒红土褐链霉菌S506液体发酵菌剂A、菌种活化将酒红土褐链霉菌接种至高氏合成培养基平板上，28-35°C培养，反 复转接2-3次，培养1周，使菌种活化；取出观察菌体的生长状态，以电子显微镜扫描，菌丝 和分生孢子照片如
图1所示。由
图1可见，本发明的酒红土褐链霉菌S506的菌落呈圆形， 基内菌丝无横隔，不断裂；气生菌丝丰茂，多分枝；孢子丝螺旋形，孢子卵圆形，表面光滑。B、酒红土褐链霉菌的液体种子制备种子培养物料由质量比为8%的麸皮或米糠粉、4%玉米粉、2%豆饼粉、2%甘 油、0. 硝酸钠、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫酸镁、0. 05%硫 酸亚铁和其余的水组成，自然PH，分装于三角瓶121-130°C高压灭菌30-60分钟，冷却至 25-35°C，接种步骤A得到的酒红土褐链霉菌菌种，在25-30°C下，摇瓶培养48-72小时；C、酒红土褐链霉菌的液体深层发酵以步骤B的培养物为种子，以3-10%的比例接种于液体发酵罐的液体培养物料 中，液体培养物料和培养条件与步骤B相同，通气搅拌培养72小时，加入两倍体积的草炭粉 吸附制得链霉菌菌剂。实施例2酒红土褐链霉菌S506液体发酵菌剂A、步骤A同实施例1;B、C、酒红土褐链霉菌S506的种子培养物料由质量比为2 %的麸皮粉、2 %玉米 粉、豆饼粉、0. 5%甘油、0. 硝酸钠、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、 0. 05%硫酸镁、0. 05%硫酸亚铁和其余的水组成，发酵及制剂条件同实施例1。实施例3酒 红土褐链霉菌S506的液体发酵菌剂A、步骤A同实施例1;B、C、酒红土褐链霉菌的液体种子培养物料由质量比为4%的麸皮粉、4%玉米 粉、2%豆饼粉、0. 5%甘油、0. 硝酸钾、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、 0. 05%硫酸镁、0. 05%硫酸亚铁和其余的水组成。种子培养物料由质量比为4%的麸皮粉、4%玉米粉、2%豆饼粉、0. 5%甘油、0. 1%硝酸钾、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫酸镁、0. 05%硫酸亚铁和 其余的水组成，发酵及制剂条件同实施例1。实施例4酒红土褐链霉菌S506的固体发酵菌剂A、步骤A同实施例1;
B、酒红土褐链霉菌的液体种子制备种子培养物料由质量比为8%的麸皮或米糠粉、2%玉米粉、0.5%豆饼粉、0.5% 甘油、0. 硝酸钠、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫酸镁、0. 05% 硫酸亚铁和其余的水组成，自然PH，分装于三角瓶121-130°C高压灭菌30-60分钟，冷却至 25-35°C，接种步骤A得到的酒红土褐链霉菌菌种，在25-30°C下，摇瓶培养48-72小时；C、酒红土褐链霉菌的固体发酵固体发酵物料由质量比为45 %的麸皮或米糠，8 %的麦饭石粉，1. 5 %的豆饼粉， 0. 05%的硝酸钾、0. 15%的磷酸氢二钾、0. 15%的氯化钠、0. 4%的碳酸钙和其余的水组成， 121-1300C高压灭菌，冷却至25-35°C，按3_10 %的比例接入步骤B的液体菌种，搅拌均勻， 分装于无菌曲盘，在30士5°C条件下，间断通气培养72小时，35-50°C低温风干至物料含水 量在12%以下，制得链霉菌菌剂活菌含量2 X IO9Cfu · g—1。实施例5酒红土褐链霉菌S506的固体发酵菌剂A、步骤A同实施例4;B、液体种子培养基由质量比为4%的麸皮粉、4%玉米粉、2%豆饼粉、0.5%甘油、 0. 硝酸钠、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫酸镁、0. 05%硫酸亚 铁和其余的水组成，发酵条件同实施例4 ；C、酒红土褐链霉菌的固体发酵物料由质量比为35%的麸皮、10%的页岩粉、的 豆饼粉，0. 的硝酸钾、0. 15%的磷酸氢二钾、0. 15%的氯化钠、0.4%的碳酸钙和其余的 水组成，发酵及制剂条件同实施例4。实施例6酒红土褐链霉菌S506的固体发酵菌剂A、B、同实施例4;C、酒红土褐链霉菌的固体发酵物料由质量比为50%的麸皮、5%的沸石粉、的 豆饼粉，0. 的硝酸钾、0. 15%的磷酸氢二钾、0. 15%的氯化钠、0.4%的碳酸钙和其余的 水组成，发酵及制剂条件同实施例4。酒红土褐链霉菌菌剂应用示例1 (在育苗期应用)在蔬菜育苗基质中，按1 %质量比加入酒红土褐链霉菌菌剂，混合均勻后，撒籽育苗。酒红土褐链霉菌菌剂应用示例2 (在定植期应用)在蔬菜定植时，将酒红土褐链霉菌菌剂与5倍的细田土或充分腐熟的有机肥混 合，搅拌均勻，然后将混合物均勻施入定植穴中。之后的定苗，培土，浇水同常规操作。以上应用以及对根际微生物区系、对根系自毒物质的解除和田间应用等效果试验 结果表明，酒红土褐链霉菌S506具有如下综合功能(1)显著促进根系发育，提高植株对旱、盐碱、土传病等的抗逆性能，促进了植株对 土壤养分的有效利用，为生长中后期的优质高产奠定了基础；(2)显著提高根际活菌总量，并改善根际微生物区系结构，使细菌、放线菌数量提 高，丝状真菌、病原菌数量下降；
(3)有效控制镰刀菌、丝核菌、根结线虫等病原物对根系的侵染，防效与常用的化 学杀菌剂五氯硝基本相当，对线虫的防治超过了阿维菌素；(4)降解酚酸类根系自毒物质，显著缓解根系分泌和上茬根系腐烂释放毒素对根 系的伤害。在连茬多年的蔬菜老区应用，可以显著提高育成苗的质量，病害少，根系发达，缩短移植后的缓苗时间，提高后期抗病能力。在生长中后期，可有效控制根部病害和地上部病 害的发生，减少用药40 50%，综合产量增加25%以上。近几年，在河北、山东、河南、福建、 上海等地的多种蔬菜和果树上进行了应用，均表现出了同样的抗病、增产和品质改善效果， 均超过了国内外的同类技术和产品。详细试验数据见“应用试验报告”(附件)。上述关于酒红土褐链霉菌菌剂及应用的描述仅作为本发明几种技术方案提出，不 作为对其单一限制条件。
权利要求
—种酒红土褐链霉菌菌剂，其特征包括酒红土褐链霉菌菌剂是以保藏编号为CGMCCNo.2664的酒红土褐链霉菌活菌菌种通过液体深层发酵或固体发酵制备的活菌培养物为有效成份组成。
2.根据权利要求1所述的酒红土褐链霉菌菌剂，其特征在于酒红土褐链霉菌菌种DNA 序列测定结果为GGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGATGAACCACTTCGGTGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACAC GTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATACTGATCCTCGCAGGCATC TGCGAGGTTCGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAA GGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGG CAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTG TAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGC CGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGT TGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTC CTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGACGC TGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCACTAGGTGT GGGCAACATTCCACGTTGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAA ACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACC AAGGCTTGACATACACCGGAAAACCCTGGAGACAGGGTCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGT CAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCTTGTG GTGCTGGGACTCACGGGAGACCGCCGGGTCACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCTTATGTC TTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGG TCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCG GTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAA CCCCTTGTGGGAGGGGAGCTGTCG。
3.根据权利要求1所述的酒红土褐链霉菌菌剂，其特征在于酒红土褐链霉菌活菌培 养物加入草炭粉作为载体或辅料。
4.根据权利要求1所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，其特征在于步骤包括A、菌种活化将酒红土褐链霉菌接种至高氏合成培养基平板上，28-35°C培养，反复转 接2-3次，培养1周，使菌种活化；B、酒红土褐链霉菌的液体种子制备种子培养物料由质量比为2-8%的麸皮或米糠粉、2-4%玉米粉、0. 5-2%豆饼粉、 0. 5-2%甘油、0. 硝酸钠、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫酸镁、 0. 05%硫酸亚铁和其余的水组成，自然pH，分装于三角瓶121-130°C高压灭菌30-60分钟， 冷却至25-35°C，接种步骤A得到的酒红土褐链霉菌菌种，在25-30°C下，摇瓶培养48-72小 时；C、酒红土褐链霉菌的液体深层发酵以步骤B的培养物为种子，以3-10%的比例接种于液体发酵罐的液体培养物料中，液 体培养物料和培养条件与步骤B相同，通气搅拌培养72小时，加入两倍体积的草炭粉吸附 制得链霉菌菌剂。
5.根据权利要求4所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，其特征在于步骤B和步 骤C所述的酒红土褐链霉菌的液体种子培养物料由质量比为2%的麸皮粉、2%玉米粉、豆饼粉、0. 5%甘油、0. 硝酸钠、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫 酸镁、0. 05%硫酸亚铁和其余的水组成。
6.根据权利要求4所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，其特征在于步骤B和步 骤C所述的酒红土褐链霉菌的液体种子培养物料由质量比为4%的麸皮粉、4%玉米粉、2% 豆饼粉、0. 5%甘油、0. 硝酸钾、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫 酸镁、0. 05%硫酸亚铁和其余的水组成。
7.根据权利要求1所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，其特征在于所述的步骤包括A、菌种活化将酒红土褐链霉菌接种至高氏合成培养基平板上，28-35°C培养，反复转 接2-3次，培养1周，使菌种活化；B、酒红土褐链霉菌的液体种子制备种子培养物料由质量比为2-8%的麸皮或米糠粉、2-4%玉米粉、0. 5-2%豆饼粉、 0. 5-2%甘油、0. 硝酸钠、0. 4%氯化钠、0. 3%碳酸钙、0. 3%磷酸氢二钾、0. 05%硫酸镁、 0. 05%硫酸亚铁和其余的水组成，自然pH，分装于三角瓶121-130°C高压灭菌30-60分钟， 冷却至25-35°C，接种步骤A得到的酒红土褐链霉菌菌种，在25-30°C下，摇瓶培养48-72小 时；C、酒红土褐链霉菌的固体发酵固体发酵物料由质量比为35-50%的麸皮或米糠，5-10%的麦饭石粉、页岩粉或沸石 粉，1-2%的豆饼粉，0. 05%的硝酸钾、0. 15%的磷酸氢二钾、0. 15%的氯化钠、0. 4%的碳酸 钙和其余的水组成，121-130°C高压灭菌，冷却至25-35°C，按3-10%的比例接入步骤B的液 体菌种，搅拌均勻，分装于无菌曲盘，在30 士 5°C条件下，间断通气培养72小时，35-50°C低 温风干至物料含水量在12%以下，制得链霉菌菌剂。
8.根据权利要求7所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，其特征在于步骤C所述 的酒红土褐链霉菌的固体发酵物料由质量比为35%的麸皮、10%的麦饭石粉、的豆饼 粉，0. 的硝酸钾、0. 15%的磷酸氢二钾、0. 15%的氯化钠、0.4%的碳酸钙和其余的水组 成。
9.根据权利要求7所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，其特征在于步骤C所述 的酒红土褐链霉菌的固体发酵物料由质量比为50%的麸皮、5%的页岩粉、2%的豆饼粉， 0. 的硝酸钾、0. 15%的磷酸氢二钾、0. 15%的氯化钠、0.4%的碳酸钙和其余的水组成。
10.根据权利要求7所述的酒红土褐链霉菌菌剂的制备方法，其特征在于步骤C所 述的酒红土褐链霉菌的固体发酵物料由质量比为50%的麸皮、5%的沸石粉、的豆饼粉， 0. 的硝酸钾、0. 15%的磷酸氢二钾、0. 15%的氯化钠、0.4%的碳酸钙和其余的水组成。
全文摘要
本发明提供一种酒红土褐链霉菌菌剂，是以保藏编号为CGMCC No.2664的酒红土褐链霉菌活菌菌种通过液体深层发酵或固体发酵制备的活菌培养物为有效成份组成。暂定名为S506，已于2008年9月11日提交中国普通微生物保藏中心保藏。制备方法包括A、菌种活化；B、酒红土褐链霉菌的液体种子制备；C、酒红土褐链霉菌的液体深层发酵。本发明提出一种适于酒红土褐链霉菌生长的“液体制种，固体发酵”新工艺，实现了有效活菌数和产孢率高，杂菌污染少，发酵周期短的技术要求。将该菌的活菌体施入蔬菜根际，可有效防治枯萎病、根腐病、根结线虫病等多种蔬菜根部病害，并具有显著的促进根系发育和降解根系自毒物质功能，在有效防治蔬菜、果树、药材等普遍发生的连作障碍难题具有广阔应用前景。
文档编号A01N63/02GK101812410SQ20081007946
公开日2010年8月25日 申请日期2008年9月27日 优先权日2008年9月27日
发明者张翠绵, 李晓芝, 李洪涛, 王占武, 贾楠 申请人:河北省农林科学院遗传生理研究所