专利名称：暴马丁香树皮挥发油的制备新工艺和新用途的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及以暴马丁香a/^i-e/7S^Rupr. 树皮挥发油的制备新工艺和新用途。
背景技术：
暴马丁香5>ri/^a ay77"re/7w's R叩r.为长白山常见药用植物之一，在我国主要分布在吉 林、辽宁、华北、西北和华中地区，资源丰富。树皮、树干及枝条均可药用，味苦，性微寒， 经现代药理实验证明具有清肺祛痰、止咳、平喘、消炎、利尿的功能。
目前，关于暴马丁香树皮挥发油和化学成分及药理作用研究鲜见报道，仅有几篇报道从 树皮、树枝中分离得到数个化合物，未对暴马丁香树皮挥发油做过抑菌研究。因此，本发明 采用暴马丁香树皮，干燥后剪碎，用蒸馏水浸泡12 h后超声30 min，温度为3(TC，功率为 80W。将药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取3 h。放出水层，用 乙醚反复洗挥发油提取器，使暴马丁香挥发油充分溶解到乙醚中。将溶有挥发油的乙醚溶液 倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，放入冰 箱4 'C保存备用。
本发明的暴马丁香树皮挥发油对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌具有抑制作用，这种抑菌 作用具有积极的实践应用价值。比如对链球菌有良好的抑制作用，对治疗化脓性炎症、猩红 热、风湿热、急性肾小球肾炎等疾病有积极的实践意义；对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙 门氏菌有良好的抑制作用，对预防与治疗细菌性食物中毒有积极作用。这对于扩大暴马丁香 药源，并对其进行合理开发利用具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抑菌活性的暴马丁香树皮挥发油的制备新工艺并将暴马丁 香树皮挥发油在具有抑菌作用的产品中进行丌发应用。
1. 以暴马丁香树皮为原料制备挥发油的新工艺和新用途，并将暴马丁香树皮挥发油在具 有抑菌作用的产品中进行开发应用。
本发明的暴马丁香树皮挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、巴氏菌、链球菌、沙门氏 菌均有不同程度的抑制作用，可开发为天然抗菌剂应用于食品、药品等行业，制备出具有抑 菌作用的各种形式的产品。
2. —种制备暴马丁香树皮挥发油的新工艺，其特征在于该工艺包括以下过程
(1)取暴马丁香树皮，挑去杂物，水洗，烘干或晾干，粉碎，用蒸馏水浸泡12h后超声
330 min，温度为30。C功率为80W;
(2) 将(1)中药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取3 h，获 得上面浮有挥发油的水溶液；
(3) 将(2)中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使暴马 丁香挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫 酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，放入冰箱4 'C保存备用。
3. 根据本发明1至2所述的制备暴马丁香树皮挥发油的原料为暴马丁香5>nV^s ayz7ore/751/5 Rupr. 的树皮。
4. 根据本发明1至2所述的暴马丁香树皮挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、巴氏菌、 链球菌、沙门氏菌均有不同程度的抑制作用。
5. 根据本发明l至2所述的暴马丁香树皮挥发油，其特征在于该树皮挥发油可作为天然 抗菌剂用于食品、药品等行业，代替有毒副作用的合成抗菌剂。
6. 根据本发明，本发明中的"％"是重量百分比。
具体实施例方式
本发明所述的暴马丁香树皮挥发油制备新工艺包括以下实施例，下面的实施例可进一歩 说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1:
(1) 取暴马丁香树皮100g，挑去杂物，水洗，烘干或晾干，粉碎，用400mL蒸馏水浸泡 12 h后超声30 min，温度为3(TC功率为80W;
(2) 将(1)中药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取3 h，获 得上面浮有挥发油的水溶液；
(3) 将(2)中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使暴马 丁香挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫 酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，放入冰箱4 。C保存备用。
实施例2:
(1) 取暴马丁香树皮200g，挑去杂物，水洗，烘干或晾干，粉碎，用600mL蒸馏水浸泡 12 h后超声30 min，温度为30。C功率为80W;
(2) 将(1)中药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取3 h，获 得上面浮有挥发油的水溶液；(3)将(2)中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使暴马 丁香挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫
酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，放入冰箱4 t:保存备用。
药理试验例暴马丁香树皮挥发油的抑菌作用 1实验材料
大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌和金黄色葡萄球菌均来自于吉林农业大学预防兽 医学实验室，37'C在蛋白胨牛肉汤中培养12h。
培养基为牛肉膏蛋白胨培养基。菌的活化与培养时用液体培养基，组成为牛肉膏蛋
白胨氯化钠蒸馏水(3 : 10 : 5 : 1000)。菌的保存及抑菌实验时用固体培养基，组成为 牛肉膏蛋白胨氯化钠琼脂蒸馏水(3 : 10 : 5 : 22 : 1000)。
2实验方法
2. 1培养基的配制
取牛肉膏0.6g、蛋白胨2 g、氯化钠1 g、蒸馏水200 ml，混合并搅拌使其完全溶解， 配成液体培养基。用量筒量取液体培养基，将其平均分装在10个50 ml的三角瓶内，每瓶 20 ml。取牛肉膏3 g、蛋白胨IO g、氯化钠5 g、琼脂22 g、蒸馏水1000 ml，混合后将其 置于电炉子上加热，使琼脂完全溶解，配成固体培养基。用量筒量取固体培养基，将其平均 分装在5个150 ml的三角瓶内，每瓶IOO ml。三角瓶瓶口均用棉塞塞紧并用牛皮纸包扎。 2. 2灭菌
将配好的固体培养基、液体培养基均放入高压灭菌锅中灭菌，温度上升到121 t:时，开 始计时20 min。培养皿、量筒、镊子、剪刀、6 mm滤纸片(放在小烧杯中)、滴管、安瓿瓶 等实验器材均放入烘箱中170 。C灭菌2 h。实验前用75%乙醇擦拭超净工作台并紫外灭菌20 min。 37 'C恒温培养箱在使用前需用75%乙醇擦拭灭菌。 2.3菌的培养与查菌
将5个菌种在超净工作台上、酒精灯环境下倒入装有液体培养基的三角瓶中，每种菌培 养两份。将这10个三角瓶放入摇床37 。C摇菌6 h。显微镜做镜检后开始查菌，记录数据并 计算菌浓度，若5个中方格总菌数为A，菌液稀释倍数为B ，则lml菌液中总菌数=八/5 X 25 X 10000 X 13 =50000AB 2.4样品液及滤纸片的制备
将暴马丁香树皮挥发油配制成5 mg/ml的溶液(可加0 4u L 二甲基亚砜助溶)，按1 : 2。稀释成2.5 mg/ml、 1.25 mg/ml、 0.625 mg/ml、 0.3125 mg/ml的溶液。将滤纸片用打孔器 打成直径为6 mm的圆片，在超净工作台将滤纸片放进各梯度样品中浸泡2 h。 2. 5有菌琼脂平板的制备
将稀释好的菌液与固体培养基混合并摇晃均匀，此时菌的浓度应达到3.6Xl(f CFU/ml。 将有菌培养基依次倒入各培养皿中，晃动培养皿使培养基均匀地铺在培养皿底部，冷却至凝 固。
2. 6抑菌实验方法
用记号笔在有菌琼脂平板上标号，将浸泡好的滤纸片用镊子夹出，放入写相应对照编号 的培养皿中，每个样品做三个平行，放入37 。C恒温培养箱培养。
3. 实验结果
3. 1抑菌效果用抑菌圈直径DD表示(单位mm)
在抑菌实验结束后的第12h、 24h、 36h、 48h观察菌的生长情况，测量抑菌圈直径并记录。表1暴马丁香树皮挥发油的抑菌活性
菌种挥发油链霉素
大肠杆菌832
链球菌1430
沙门氏菌935
巴氏菌1031
金黄色葡萄球菌1230
3. 2最小抑菌浓度MIC的测定(单位mg/ml)
用水做阴性对照，链霉素做阳性对照，挥发油的抑菌效果与二者对比得出最小抑菌浓度。
表2暴马丁香树皮挥发油的最小抑菌浓度MIC (单位mg/ml)
菌种挥发油链霉素
大肠杆菌1.250. 1
链球菌0. 630. 1
沙门氏菌1. 250. 1
巴氏菌1.250. 1
金黄色葡萄球菌5. 000, 1
结果表明暴马丁香树皮挥发油对大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄
球菌均有不同程度的抑制作用。挥发油对五种菌的最小抑菌浓度在0. 63 mg/ml 5. 00 mg/ml 之间。
通过具体实施实例说明暴马丁香树皮挥发油抑菌效果很好，可作为天然抗菌剂用于食品、 药品等行业，代替有毒副作用的合成抗菌剂。暴马丁香挥发油对链球菌有良好的抑制作用， 可以制备各种剂型的药品，用于治疗化脓性炎症、猩红热、风湿热、急性肾小球肾炎等疾病。 对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌有良好的抑制作用；可以制备食品添加剂以及各种 剂型的药品，用于预防与治疗因食物被细菌污染而导致的食物中毒。
暴马丁香在中国已有1000年的耕种历史，资源丰富，取材方便，适合大规模投入生产， 增加了开发的可行性，具有重要的实践意义及开发前景。
权利要求
1.以暴马丁香树皮为原料制备挥发油的新工艺和新用途，并将暴马丁香树皮挥发油在具有抑菌作用的产品中进行开发应用。
2. —种制备暴马丁香树皮挥发油的新工艺，其特征在于该工艺包括以下过程(1) 取暴马丁香树皮，挑去杂物，水洗，烘干或晾干，粉碎，用蒸馏水浸泡12h后超声 30 min，温度为30'C，功率为80W;(2) 将(1)中药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取3 h，获 得上面浮有挥发油的水溶液；(3) 将(2)中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使暴马 丁香挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫 酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，放入冰箱4 。C保存备用。
3. 根据本发明1至2所述的制备暴马丁香树皮挥发油的原料为暴马丁香5>ri/^3 柳"re"s/s Rupr. 的树皮。
4. 根据本发明1至2所述的暴马丁香树皮挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、巴氏菌、 链球菌、沙门氏菌均有不同程度的抑制作用。
5. 根据本发明1至2所述的暴马丁香树皮挥发油，其特征在于该树皮挥发油可作为天然 抗菌剂用于食品、药品等行业，代替有毒副作用的合成抗菌剂。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及以暴马丁香(Syringa amurensis Rupr)树皮挥发油的制备新工艺和新用途。取暴马丁香树皮，干燥后剪碎，用蒸馏水浸泡12h后超声30min，温度为30℃，功率为80W。将药材与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸汽蒸馏法提取3h。放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使暴马丁香挥发油充分溶解到乙醚中。将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，放入冰箱4℃保存备用。本发明暴马丁香树皮挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、巴氏菌、链球菌、沙门氏菌均有不同程度的抑制作用，可开发为天然抗菌剂应用于食品、药品等行业，制备出具有抑菌作用的各种形式的产品。
文档编号A01N65/08GK101574093SQ20091006714
公开日2009年11月11日 申请日期2009年6月22日 优先权日2009年6月22日
发明者张连学, 蔡恩博, 郑友兰 申请人:吉林农业大学