专利名称：一种鹿胎深加工方法
技术领域：
本发明属于食品科学和生物工程领域，具体地涉及一种利用生物工程技术深加工
鹿胎盘的方法，以获得具有生物学活性的新产品。
背景技术：
胎盘(Placenta)又名"紫河车(Placenta hominid)"。临床应用广泛，常用于虚
劳羸弱，骨蒸盗汗，肺肾两虚之咳嗽气喘，肾气不足、精血衰少之阳痿遗精、不育、不孕、少乳
等。它作为妊娠期母体与胎儿进行物质交换的纽带，具有重要的生理功能，可分泌多种激
素、酶类，含有多种蛋白质、抗体、磷脂、生长因子、细胞因子及能剌激抗体免疫系统的小分
子活性物质。胎盘在免疫学上有增强抵抗力和免疫力的作用。现代生物学及医学研究证明，
动物和人类胎盘的结构虽然不同，但胎盘中均含有多种免疫球蛋白、活性肽、激素等生物活
性物质及氨基酸、矿物质等成分，是一种较为理想的免疫调节剂和营养美容保健品。 鹿胎系指母鹿腹中的带胎衣、胎水的胎儿，或体表无毛、空腹、体内各器官已经发
育完整，但是由于机械等原因造成流产的胎儿或产后因缺乳、母鹿拒哺、恶癖等原因死亡的
幼鹿。鹿胎的药理作用首载《本草纲目》，言其有益肾阳、补精血之功效。 虽然，我国在利用动物组织器官及代谢产物进行治病、防病方面有着悠久的历史。
但是，国内外对于羊胎、牛胎、猪胎等的研究较为深入，而对于鹿胎的研究较少。我国对于鹿
胎的应用非常原始，鹿胎产品加工粗糙，产品初级、种类单一，疗效不显著，造成鹿胎资源的
极大浪费。事实上，利用现代生物工程技术，以鹿胎为原料可开发出多元化产品，有利于鹿
产业链的完善、升级。此外，在原始鹿胎加工生产过程中，直接将产生的剩余物丢弃，即造成
环境污染，又浪费了鹿胎中的很多有益成分，造成极大的资源浪费。
发明内容
针对上述问题，本发明通过生物工程技术，提供一种节约资源，可从鹿胎中提取出更多的生物活性物质的鹿胎深加工方法。本发明改变以往的鹿产品加工方式，通过生物工程技术，科学合理地进行鹿胎深加工，实现鹿产品的工业化生产和新产品开发。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案一种鹿胎深加工方法，其特征在于取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎。按重量比，鹿胎盘生理盐水为l : 1.5 2.5取料，研磨机中研磨、充分匀浆；-40 _201:冷冻、室温融化，反复冷冻和融化3 5次，离心，上清液即为胎盘提取液，沉淀物备用。取胎盘提取液，按胎盘提取液与丙酮体积比2 4 : l加入丙酮，充分混匀后，离心，收集上层清液；再按所收集上层清液与丙酮体积比为2 4 : 1再加入丙酮，充分混匀后，离心，收集上层清液减压蒸馏，经0. 45 ii m膜和0. 22 ii m膜除菌，在0. 5kg/cm2下超滤，超滤模板选用10000NMWL，得活性鹿胎素提取液。
所用生理盐水为常规氯化钠溶液。 将得到的活性鹿胎素提取液进一步经冷冻干燥可制得活性鹿胎素干粉。 取上述活性鹿胎素提取液，在0. 5kg/cm2下进行超滤(超滤模板10000NMWL)，之后进行透析，收集分子量3000 8000dal的活性成分，在利用S印hadex G25凝胶过滤层析脱盐后，经0. 22 ii m膜除菌，得鹿胎免疫调节因子提取液。 将得到的鹿胎免疫调节因子提取液进一步经冷冻干燥制得鹿胎免疫调节因子纯 称取上述得到的沉淀物，每千克沉淀物加入4 6升的2 4mol/L的酸，在微波功率为500W下，水解10 50分钟，过滤得到滤液，调节滤液至p朋.0，即得到复合氨基酸；
所述的酸是硫酸、盐酸或硝酸。 本发明的有益效果是本发明解决了以往鹿胎产品加工粗糙、产品初级、产品种类单一等问题。本发明充分利用了鹿胎，达到了最大限度地获得鹿胎中的有益成分，可一次生产出活性鹿胎素、鹿胎免疫调节因子和复合氨基酸三种新产品，产品种类多样化。本发明利用鹿胎下脚料制备复合氨基酸，不仅节省了工业成本，还大大提高了原料的利用率，使废弃蛋白质资源得到充分利用，而且也降低了其处理成本，避免造成环境污染。本发明制得的活性鹿胎素具有非常好的抗炎、抗衰老、增强机体免疫力，预防肿瘤、美容、养颜等多种功效。鹿胎免疫调节因子具有明显的抗肿瘤活性，对大肠癌、肺癌、乳腺癌等具有非常好的抑制活性。复合氨基酸中含有17种氨基酸。这些氨基酸可作为风味增强剂、添加剂与引诱剂应用在饲料加工领域。通过本发明实现了对鹿胎的综合利用和深加工，为进一步新产品开发奠定基石出。
具体实施例方式
实施例1，活性鹿胎素干粉的制备 1)取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎；按重量比，鹿胎盘生理盐水为1 : 1. 5 2. 5取料，研磨机中研磨、充分匀浆；-40 -20°〇完全冷冻，取出于室温下完全融化，反复冻融3 5次，5000rpm离心10min，上清液为胎盘提取液，沉淀物备用；其中，生理盐水为0. 9%的氯化钠溶液。 2)取胎盘提取液，按胎盘提取液与丙酮的体积比为3 : l，加入丙酮，混匀后，8000rpm离心10min，取上层清液。再按所收集上层清液与丙酮的体积比为3 : l，加入丙酮，充分混匀后，8000rpm离心20min，收集上层清液减压蒸馏，再经0. 45 y m膜和0. 22 y m膜除菌，在0. 5kg/cm2条件下超滤(超滤模板选用10000NMWL)，得微黄色液体，即为活性鹿胎素提取液。 3)所得活性鹿胎素提取液进一步经冷冻干燥制得活性鹿胎素干粉。
活性鹿胎素产率为每公斤鹿胎可以得到10g活性鹿胎素纯品。
检测结果 对于活性鹿胎素的生物学活性，采用体外细胞培养法。分离健康人外周血T细胞，以MTT法测定活性鹿胎素剌激T细胞增殖情况。结果表明，活性鹿胎素在50ng时，即可显著剌激T细胞增殖，且可显著抑制大肠癌Cx-l细胞的生长，表明活性鹿胎素具有非常好的抑瘤作用，抑瘤率可达18.6%。 采用平板法，检测了活性鹿胎素样品中是否存在需氧菌、厌氧菌、真菌和支原体，结果表明，活性鹿胎素中没有任何微生物感染，研究结果符合《中国生物制品规程》之规定。
采用家兔法，对活性鹿胎素中是否存在热原进行了必要的检测，在每只家兔耳静
4脉注射1ml活性鹿胎素样品(100mg/ml)后，测定的3只家兔体温未见有超过0. 6°C的，3只家兔体温升温总和也没有超过1. 6t:，研究结果符合《中国生物制品规程》之规定。异常毒性试验结果显示，试验小鼠未出现异常死亡，符合《中国生物制品规程》之规定。采用HPLC等方法，检测活性鹿胎素样品中是存在雌性激素，检测结果证明，活性鹿胎素样品不含有鹿胎中常见的孕二酮、孕三酮等雌性激素，符合《中国生物制品规程》之规定。
实施例2，鹿胎免疫调节因子纯品的制备 1)取实施例1制得的活性鹿胎素提取液，经超滤(超滤模板IOOOONMWL，超滤压力0. 5kg/cm2)和透析(截留分子量8000dal)，收集分子量为3000 8000dal的活性成分，利用凝胶过滤层析(S印hadex G25)脱盐，经除菌(0. 22 y m膜)制得鹿胎免疫调节因子提取液。 2)将制得鹿胎免疫调节因子提取液，进一步经冷冻干燥制得鹿胎免疫调节因子纯
PR o 鹿胎免疫调节因子产率为每公斤鹿胎可以得到3. 5g鹿胎免疫调节因子纯品。
检测结果 用MTT法测定鹿胎免疫调节因子的抑瘤活性和淋巴细胞增殖活性。通过体外淋巴细胞增殖实验发现，鹿胎免疫调节因子具有显著促淋巴细胞增殖的功能，并表现出一定的剂量效应，平均淋转率为20%， E-玫瑰花结试验结果显示，花结恢复率达到95X。随着浓度升高其免疫生物学活性逐渐增强，至4ng/ml浓度附近时免疫生物活性达到最高峰，之后逐渐减弱。抑瘤实验的结果表明，鹿胎免疫调节因子具有抑制肿瘤细胞生长的作用，有剂量依赖性，随着浓度升高其免疫生物学活性逐渐增强，在4ng/ml达到最佳效果，抑瘤率为72. 43%，之后逐渐减弱。 采用平板法检测鹿胎免疫调节因子样品中是否存在需氧菌、厌氧菌、真菌和支原体等。平板法培养24h，无细菌生长。增菌培养144h，无细菌生长，研究结果符合《中国生物制品规程》之规定。 采用家兔法检测鹿胎免疫调节因子中是否存在热原。在每只家兔耳静脉注射lml
鹿胎免疫调节因子样品(100mg/ml)后，测定的3只家兔体温未见有超过0. 6°C的，3只家兔
体温升温总和不超过1. 6t:，研究结果符合《中国生物制品规程》之规定。 小鼠急性毒性试验，取同龄雌雄小鼠20只，随机分成2组。反应组腹腔注射lml鹿
胎免疫调节因子(50mg/ml)，对照组注射生理盐水，连续注射10天，用药后无毒性反应。小
鼠慢性毒性试验，取同龄雌雄小鼠40只，随机分成2组。反应组腹腔注射lml鹿胎免疫调
节因子(50mg/ml)，对照组注射生理盐水，连续注射30天，未见毒性反应，结果符合《中国生
物制品规程》之规定。 实施例3复合氨基酸的制备 1)同实施例1的步骤1)。 2)称取沉淀物，每千克沉淀物加入6升的3mol/L的硫酸，在微波功率为500W下，水解30分钟，过滤得到滤液，以NaOH调节滤液至p朋.0，即得到复合氨基酸。每公斤鹿胎制备鹿胎提取液后可产生约0. 5-0. 6kg下脚料沉淀。每克下脚料沉淀经微波辅助酸水解可产生复合氨基酸730mg，每种氨基酸的含量详见表1。
所用的硫酸也可以替换成盐酸或硝酸。
检测结果 Folin-酚法测定复合氨基酸中蛋白质含量，甲醛滴定法与凯氏定氮法测定水解 度，复合氨基酸采用日立835-50型氨基酸自动分析仪测定氨基酸含量。
鹿胎沉淀物水解液蛋白质含量随着时间增加先减少后增大，蛋白质含量最低时为 0. 661mg/ml。甲醛滴定法测定复合氨基酸氨基态氮，试验表明在一定时间范围内，氨基态氮 变化比较稳定。凯氏定氮法测定总氮含量，复合氨基酸总氮含量随着时间的增加，先减少后 增加。总氮含量最低值为l. 197mg/ml。总氮含量随时间变化比氨基态氮明显。根据水解 度计算公式水解度(％ )=水解液中总氨基态氮/原料总氮X100X计算出水解度，水解 度随着时间的增大先增大后减少，水解度最大为8. 27%。水解度与氨基态氮含量成正比， 与总氮含量成反比。因此确定水解时间在水解10 50min之间，30min最适宜。复合氨基 酸，用日835-50型氨基酸自动分析仪测定氨基酸组分含量，结果见表1 。
表1复合氨基酸中氨基酸组分含量氨基酸组成
天冬氨酸Asp61.660
苏氨酸Thr21.262
丝氨酸Ser24.625
谷氨酸Glu106.960
甘氨酸Gly122.077
丙氨酸Ala68.300
半胱氨酸Cys5.279
缬氨酸Val29.961
蛋氨酸Met8.933
异亮氨酸lie27.053
亮氨酸Leu53.463
络氨酸Tyr45.419
苯丙氨酸Phe25.875
赖氨酸Lys43.424
NH311.418
组氨酸His17.591
精氨酸Arg56.428
氨基酸总量Total729.727 实施例4 一种鹿胎深加工方法 1)取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎；按重量比，鹿胎盘生理盐水为1 : 2取料，于 研磨机中研磨、匀浆；-40 -20匸完全冷冻、室温完全融化，反复冻融3 5次，5000rpm离 心，上清液为胎盘提取液，沉淀物备用；其中，生理盐水为0.9%的氯化钠溶液。
2)取胎盘提取液，加入丙酮(胎盘提取液与丙酮的体积比为3 : l)，混匀后， 8000rpm离心10min，取上层清液。再添加丙酮(所取上层清液与丙酮的体积比为3 : l)，充 分混匀后，8000rpm离心10min，收集上层清液，经减压蒸馏得到淡黄色透明液体。再经过膜 (先0. 45 ii m膜，再利用0. 22 ii m膜)除菌、超滤(超滤模板IOOOONMWL，超滤压力0. 5kg/ cm2)得到微黄色液体，即为活性鹿胎素提取液。进一步经冷冻干燥制得活性鹿胎素干粉。活 性鹿胎素产率为每公斤鹿胎可以得到10g活性鹿胎素纯品。 3)取活性鹿胎素提取液，经超滤(超滤模板IOOOONMWL，超滤压力0. 5kg/cm2)和
7透析(截留分子量8000dal)，收集分子量为3000 8000dal的活性成分，利用凝胶过滤层 析(S印hadex G25)脱盐，经除菌(0. 22ym膜)制得鹿胎免疫调节因子提取液。进一步经冷 冻干燥制得鹿胎免疫调节因子纯品。鹿胎免疫调节因子产率为每公斤鹿胎可以得到3.5g 鹿胎免疫调节因子纯品。 4)称取步骤1)中制得的沉淀物，每千克沉淀物加入5升的3mol/L的硫酸，在微波 功率为500W下，水解30分钟，过滤得到滤液，以Na0H调节滤液至p朋.0，即得到复合氨基 酸。每公斤鹿胎制备鹿胎提取液后可产生约0.5-0.6kg下脚料沉淀。每克下脚料沉淀经微 波辅助酸水解可产生复合氨基酸730mg，每种氨基酸的含量详见表1。
所用的硫酸也可替换成盐酸或硝酸。
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权利要求
一种鹿胎深加工方法，其特征在于取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎；按重量比，鹿胎盘∶生理盐水为1∶1.5～2.5取料，研磨机中研磨、充分匀浆；-40～-20℃冷冻，室温下融化，反复冷冻和融化3～5次，离心，上清液为胎盘提取液，沉淀物备用；取胎盘提取液，按胎盘提取液与丙酮的体积比为2～4∶1，加入丙酮，混匀后，离心，取上层清液；再按所收集上层清液与丙酮的体积比为2～4∶1，加入丙酮，充分混匀后，离心，收集上层清液减压蒸馏，再经0.45μm膜和0.22μm膜除菌，在0.5kg/cm2条件下超滤，超滤模板选用10000NMWL，得活性鹿胎素提取液。
2. 按照权利要求1所述的鹿胎深加工方法，其特征在于包括如下步骤将得到的活性 鹿胎素提取液经冷冻干燥制得活性鹿胎素干粉。
3. 按照权利要求1所述的鹿胎深加工方法，其特征在于包括如下步骤取活性鹿胎 素提取液，经超滤模板IOOOONMWL，超滤压力0. 5kg/cm2下超滤，透析，收集分子量3000 8000dal活性成分，利用S印hadexG25凝胶过滤层析脱盐后用0. 22 y m膜除菌，得鹿胎免疫 调节因子提取液。
4. 按照权利要求3所述的鹿胎深加工方法，其特征在于包括如下步骤鹿胎免疫调节 因子提取液经冷冻干燥制得鹿胎免疫调节因子纯品。
5. 按照权利要求1或3所述的鹿胎深加工方法，其特征在于包括如下步骤称取沉淀 物，每千克沉淀物加入4 6升的2 4mol/L的酸，在微波功率为500W下，水解10 50 分钟，过滤得到滤液，调节滤液至pH6. 0，即得到复合氨基酸；所述的酸是硫酸、盐酸或硝酸。
全文摘要
本发明涉及一种鹿胎深加工方法。技术方案是按重量比1∶1.5～2.5，取鹿胎盘和生理盐水，研磨匀浆；-40～-20℃冷冻、室温下融化，反复冻融，离心，上清液为胎盘提取液，沉淀物备用。取胎盘提取液，加入丙酮，混匀，离心，收集上层清液。再按相同比例添加丙酮，混匀，离心，上层清液经减压蒸馏，除菌、超滤得活性鹿胎素提取液。取活性鹿胎素提取液，经超滤和透析，收集分子量3000～8000dal成分，经凝胶过滤层析脱盐，过膜除菌得鹿胎免疫调节因子提取液。将沉淀物利用微波辅助酸水解得复合氨基酸。本发明可从鹿胎中提取更多生物活性物质，不仅使废弃蛋白质资源得到充分利用，又可降低其处理成本，同时避免造成环境污染。
文档编号A23K1/10GK101703259SQ20091021967
公开日2010年5月12日 申请日期2009年11月5日 优先权日2009年11月5日
发明者胡风庆, 边媛媛 申请人:辽宁大学