专利名称：一种柑橘大实蝇蛋白诱饵及其制备方法和使用方法
技术领域：
本发明涉及一种柑橘大实蝇蛋白诱饵及其制备方法和使用方法。
背景技术：
柑橘大实蝇Bactrocera minax属双翅目、实蝇科、果实蝇属，主要取食芸香科柑橘 属植物，是柑橘类果树的重要害虫。一年发生一代，成虫于每年4月底至5月初开始羽化， 5月中旬羽化达到高峰，6月中旬开始产卵，一直持续到7月下旬。雌性成虫产卵于果实中， 造成果实未熟先黄及未熟先落，幼虫孵化后取食果实危害，使果实完全丧失食用价值。近年 来由于气候变化、种植结构调整及贸易往来频繁，柑橘大实蝇已成为柑橘园常发性害虫，危 害严重、灾害频发、发生范围逐渐扩大，给柑橘产业带来了重大经济损失，严重影响了农民 增产创收。目前防治柑橘大实蝇的方法主要有早期的辐射不育防治、农业防治、化学防治。上 个世纪80年代和90年代初，中国农业科学院原子能所和浙江省农业科学院原子能所在贵 州省惠水县，于柑橘园释放辐射不育柑橘大实蝇，取得了显著的防治效果，但是辐射不育防 治需要政府投入、花费很大。农业防治主要包括蛆柑收集及销毁、冬季翻耕灭蛹等，但是费 工费时，效果不好。化学防治主要于柑橘大实蝇成虫羽化初期及发生盛期药剂封杀，而大面 积使用杀虫剂会污染环境、对人畜健康不利、易产生残留及抗药性。在现阶段柑橘大实蝇危 害加重的条件下，迫切需要发展专一性强、防效持久、不污染环境、对人畜健康无害、可持续 控制实蝇类害虫的防治技术。现有《大实蝇食物诱剂》(中国专利申请号200710053497. 3)，其组成成分为香精， 糖，乙酸，乙醇和水。《柑橘大实蝇的缓释型引诱剂》(中国专利申请号200910272420. 4)，其 主要成分配比为碳水化合物1-20%，蛋白质来源物5-40% (蛋白源为酵母粉、玉米浆粉、蛋 白胨等)，水果提取物0. 5 % -20 %，毒性成分0. 01 % -10 %，乳化剂0. 5 % -5 %，水分调节剂 1-15%和防腐剂0. 1% -5%。上述专利申请中的引诱剂，专一性不强，引诱效果并不明显。《橘小实蝇蛋白引诱剂及其制备方法》(中国专利申请号200910112094.0)，引诱 剂由水解蛋白液和甲基丁香酚的混配而成，水解蛋白液采用啤酒工业的副产品废啤酒酵母 生产。其目标害虫是针对橘小实蝇，橘小实蝇和本发明专利中的柑橘大实蝇为不同种的昆 虫，差别很大。橘小实蝇严重为害柑橘、芒果、杨桃等热带、亚热带40多科250多种果蔬及 野生植物，多食性、危害大，一年发生多代；而柑橘大实蝇为单食性，仅为害芸香科柑橘属果 树，一年发生一代。我国是啤酒生产大国，每年废弃的啤酒酵母泥大部分都直接排放入下水道，不仅 污染了环境，而且也浪费了资源。
发明内容
本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种针对目标害虫、工艺简单、不污染环 境、成本较低、使用方便，引诱效果强、能雌雄双杀的柑橘大实蝇蛋白诱饵及其制备方法和使用方法。本发明目的的实现方式为，一种柑橘大实蝇蛋白诱饵，由以下百分浓度的成分配 成啤酒酵母水解物10%-20%醋酸铵0.2%-1%红糖5%橙汁5%水余量。一种柑橘大实蝇蛋白诱饵的制备方法，具体步骤是1)制备啤酒酵母水解物a.灭活采用巴氏灭菌，将有活性的啤酒酵母泥在65°C巴氏灭菌，自然冷却至室b.过滤先用80目筛网过滤，再用100目筛网过滤，除去啤酒酵母泥中的杂质，c.加热浓缩在磁力搅拌器上加热煮沸2_5h，然后自然冷却至室温，d.蛋白酶解将浓缩后的酵母液加蒸馏水配制成酵母质量分数为40% -50%的酵 母液底物，每IOOml酵母液底物中添加0. 12g-0. 24g的木瓜蛋白酶搅拌混勻，用NaOH和HCl 调节PH值为6. 5士0. 2，温度设置65士2°C，水浴保温，进行6_24h的酶解反应，e.终止酶解反应酶解反应结束后迅速在95°C加热15分钟使反应终止，得到蛋白 水解产物，f.添加防腐剂在啤酒酵母蛋白水解物中加入0. 1% -0. 3%的防腐剂山梨酸钾，
4°C保存，2)配制柑橘大实蝇蛋白诱饵以啤酒酵母水解物、醋酸铵、红糖和橙汁混配柑 橘大实蝇蛋白诱饵，各组分的浓度按百分比计为啤酒酵母水解物10% -20%，醋酸铵 0.2% _1%，红糖5%，橙汁5%加水至100%后，充分搅拌混勻，得到柑橘大实蝇蛋白诱饵。一种柑橘大实蝇蛋白诱饵的使用方法，采用诱杀或点喷。诱杀从每年5月开始至8月，在柑橘园悬挂诱捕器诱杀，每个诱捕器内添加柑 橘大实蝇蛋白诱饵50ml，添加少量高效、低毒、低残留杀虫剂，如敌百虫，再加水稀释到 300ml，诱捕器悬挂于树冠的阴面，高度1.2-1. 5米，每周更换一次蛋白诱饵。点喷将蛋白诱饵用水稀释，与杀虫剂混配，分别于5月下旬、6月中旬、7月中旬点 喷柑橘园树冠叶片背面，每棵柑橘树点喷三分之一树冠，每个果园点喷三分之一园区。本发明充分利用啤酒厂生产啤酒的下脚料一啤酒酵母蛋白酶解制得的蛋白水解 物，其来源广泛、工艺简单、不污染环境、成本较低；啤酒酵母水解物富含小肽，氨基酸等胺 类物质；啤酒酵母在蛋白酶解过程产生中所产生的其他衍生物质，具有一定的挥发性，对柑 橘大实蝇成虫有较强的吸引作用。本发明利用柑橘大实蝇成虫羽化后需补偿蛋白的情况，在啤酒酵母水解物中添加 醋酸铵、红糖、橙汁作引诱剂，并添加少量高效、低毒、低残留杀虫剂，能雌雄双杀，是引诱效 果明显的蛋白诱饵，平均引诱力为61. 11%，高于美国圆酵母和国内糖醋酒液。
具体实施例方式本发明的蛋白诱饵由啤酒酵母水解物、醋酸铵、红糖和橙汁配制而成。本发明的生产步骤如下
1)制备啤酒酵母水解物a.灭活采用巴氏灭菌。将有活性的啤酒酵母泥在65°C巴氏灭菌，防止进一步发 酵，并自然冷却至室温。b.过滤先用80目筛网过滤，再用100目筛网过滤除去啤酒酵母泥中的杂质。c.加热浓缩在磁力搅拌器上加热煮沸2_5h，然后自然冷却至室温。加热煮沸可 弓I起酵母细胞破碎，释放细胞内营养物质。d.蛋白酶解将浓缩后的酵母液加蒸馏水配制成酵母质量分数为40% -50%的酵 母液底物，每IOOml酵母液底物中添加约0. 12g-0. 24g的木瓜蛋白酶。将酶用少量蒸馏水溶 解，再加入酵母液中搅拌混勻。用NaOH和HCl调节调节pH值为6. 5左右，温度设置65°C， 水浴保温。酶解反应进行6-24h。e.终止酶解反应酶解反应结束后迅速在95°C加热15分钟使反应终止，得到蛋白 水解产物。f.添加防腐剂在啤酒酵母蛋白水解物中加入0. 1%-0. 3%的山梨酸钾作为防腐 剂，4°C保存备用上述所用啤酒酵母泥为啤酒厂生产啤酒的下脚料，来源广泛，成本较低，并且含有 丰富的蛋白质和氨基酸。本发明所用的啤酒酵母泥其酵母含量为40% -60%，粗蛋白质含 量为5% _8%，糖含量为5% -10%。所述木瓜蛋白酶是食品级，固体粉末。2)配制柑橘大实蝇蛋白诱饵以啤酒酵母水解物、醋酸铵、红糖和橙汁混配柑 橘大实蝇蛋白诱饵，各组分的浓度按百分比计为啤酒酵母水解物10% -20%，醋酸铵 0.2% _1%，红糖5%，橙汁5%加水至100%后，充分搅拌混勻，得到柑橘大实蝇蛋白诱饵。使用方法为置于诱捕器诱杀成虫或点喷柑橘园。下面举出本发明的具体实施例例1、1)制备啤酒酵母水解物a.灭活采用巴氏灭菌，将有活性的啤酒酵母泥在65°C巴氏灭菌，自然冷却至室b.过滤先用80目筛网过滤，再用100目筛网过滤除去啤酒酵母泥中的杂质，c.加热浓缩在磁力搅拌器上加热煮沸2h，然后自然冷却至室温，d.蛋白酶解将浓缩后的酵母液加蒸馏水配制成酵母质量分数为40% -50%的酵 母液底物，每IOOml酵母液底物中添加0. 12g-0. 24g的木瓜蛋白酶搅拌混勻，用NaOH和HCl 调节PH值为6. 5，温度设置65°C，水浴保温，进行12h的酶解反应，e.终止酶解反应酶解反应结束后迅速在95°C加热15分钟使反应终止，得到蛋白 水解产物，f.添加防腐剂在啤酒酵母蛋白水解物中加入0. 的防腐剂山梨酸钾，4°C保 存，2)配制柑橘大实蝇蛋白诱饵以啤酒酵母水解物、醋酸铵、红糖和橙汁混配柑橘 大实蝇蛋白诱饵，各组分的浓度按百分比计为啤酒酵母水解物10%，醋酸铵0.2%，红糖 5%，橙汁5%加水至100%后，充分搅拌混勻，得到柑橘大实蝇蛋白诱饵。本申请人将该产品作了本发明的柑橘大实蝇蛋白诱饵的使用效果实验，具体情况 如下
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1、室内生物测定方法柑橘大实蝇成虫自羽化后用糖水喂养，养虫室内饲养温度为27士2°C，相对湿度 65% 士 10%，光照L12 D12。试验前30min停止喂食。测定在实验室常用的的Y形嗅觉 仪中进行。Y形管臂的直径为3. 6cm,长度25cm ；主管的直径3. 6cm,长度30cm ；角度75度。 在Y形嗅觉仪中，每臂依次用洁净无味的硅胶管连接味源瓶用于盛味源物(或作为CK)，再 接蒸馏水瓶用于加湿，最后接活性碳瓶以吸附异味、净化空气。测试环境给予均勻光照。生 测时从活性碳瓶基部的端口吹气，空气进入Y形管而在两臂交叉处交汇，再向前流过Y管基 部。调节两臂的流速相等，都为100ml ^mirT1t5从Y管基部的管口引入昆虫，昆虫则会逆风 向前运动，在交叉处稍作停留，即选择进入其中的一臂。在Y形管臂的一端放置加有400μ 1 诱剂的海绵，另一端为水对照。每次30只成虫(雌雄=1 1)，如果成虫进入Y行臂内 的三分之二处后，记为有反应。每次观察lOmin，记录两臂中有反应的雌雄虫数目。重复时 调换气味瓶中的诱剂。测定时间为9:OOam-11:30am。2.数据处理
、…测试诱剂吸引的虫数一对照吸引的虫数 χ1
ISte丨力=蛋白诱饵吸目丨的由胁/对照诱剂吸弓ι的χ 0
总试虫数3.结果与分析(1)不同酶解时间的蛋白水解产物对6-8日龄的柑橘大实蝇成虫引诱力测定结果 见表1 (以水作对照)表1蛋白水解产物对柑橘大实蝇成虫的引诱效果 由表1可知，当酶解时间为24h时，蛋白水解产物对柑橘大实蝇的引诱力最好，对 雌雄引诱率分别为62. 23%，60. 00%，平均引诱率为61. 11%。根据此结果，选择24小时酶 解时间的蛋白水解产物配制蛋白诱饵。(2)蛋白诱饵与圆酵母，糖醋酒液相对吸引力的比较以24小时酶解反应的蛋白水解物来配制蛋白诱饵，以糖醋酒液和美国生产的圆 酵母分别作对照，在Y形嗅觉仪中测定蛋白水解物的相对引诱力，结果见表2 表2蛋白诱饵与圆酵母、糖醋酒液相对吸引力比较 从表2中可以看出，蛋白诱饵与圆酵母和糖醋酒液相比，对柑橘大实蝇的平均相 对吸引力分别是它们的4. 76倍和7. 50倍。(3)蛋白诱饵对不同日龄的柑橘大实蝇的引诱效果，见表3 表3蛋白诱饵对不同日龄的柑橘大实蝇的引诱效果 从表3中可以看出，蛋白诱饵对7日龄和8日龄的成虫引诱效果最好，对成虫的平 均引诱率分别为63. 33%,62. 50%，效果较好。例2、同例1，不同的是，浓缩后的酵母液加蒸馏水配制成酵母质量分数为50%的 酵母液底物，每IOOml酵母液底物中添加0. 24g的木瓜蛋白酶搅拌混勻，用NaOH和HCl调 节PH值为6. 5，温度设置65°C，水浴保温，进行24h的酶解反应，在啤酒酵母蛋白水解物中 加入0. 3 %的防腐剂山梨酸钾，啤酒酵母水解物20 %，醋酸铵1 %。例3、同例1，不同的是，浓缩后的酵母液加蒸馏水配制成酵母质量分数为50%的酵母液底物，每IOOml酵母液底物中添加0. 18g的木瓜蛋白酶搅拌混勻，用NaOH和HCl调 节PH值为6. 5，温度设置65°C，水浴保温，进行18h的酶解反应，在啤酒酵母蛋白水解物中 加入0. 3%的防腐剂山梨酸钾，啤酒酵母水解物14%，醋酸铵0. 8%。
例4、同例1，不同的是，浓缩后的酵母液加蒸馏水配制成酵母质量分数为50%的 酵母液底物，每IOOml酵母液底物中添加0. 20g的木瓜蛋白酶搅拌混勻，用NaOH和HCl调 节pH值为6. 5，温度设置65°C，水浴保温，进行20h的酶解反应，在啤酒酵母蛋白水解物中 加入0. 2 %的防腐剂山梨酸钾，啤酒酵母水解物17 %，醋酸铵0. 6 %。
权利要求
一种柑橘大实蝇蛋白诱饵，其特征在于由以下百分浓度的成分配成啤酒酵母水解物 10％-20％醋酸铵 0.2％-1％红糖 5％橙汁 5％水 余量。
2.—种生产权利要求1所述的柑橘大实蝇蛋白诱饵的制备方法，其特征在于具体步骤是1)制备啤酒酵母水解物a.灭活采用巴氏灭菌，将有活性的啤酒酵母泥在65°C巴氏灭菌，自然冷却至室温，b.过滤先用80目筛网过滤，再用100目筛网过滤除去啤酒酵母泥中的杂质，c.加热浓缩在磁力搅拌器上加热煮沸2-5h，然后自然冷却至室温，d.蛋白酶解将浓缩后的酵母液加蒸馏水配制成酵母质量分数为40%-50%的酵母液 底物，每IOOml酵母液底物中添加0. 12g-0. 24g的木瓜蛋白酶搅拌混勻，用NaOH和HCl调 节pH值为6. 5士0. 2，温度设置65士2°C，水浴保温，进行6_24h的酶解反应，e.终止酶解反应酶解反应结束后迅速在95°C加热15分钟使反应终止，得到蛋白水解 产物，f.添加防腐剂在啤酒酵母蛋白水解物中加入0.1%-0. 3%的防腐剂山梨酸钾，4°C保存，2)配制柑橘大实蝇蛋白诱饵以啤酒酵母水解物、醋酸铵、红糖和橙汁混配柑橘大实 蝇蛋白诱饵，各组分的浓度按百分比计为啤酒酵母水解物10%-20%，醋酸铵0. 2%-1%, 红糖5%，橙汁5%加水至100%后，充分搅拌混勻，得到柑橘大实蝇蛋白诱饵。
3.根据权利要求2所述的一种柑橘大实蝇蛋白诱饵的制备方法，其特征在于所用的啤 酒酵母泥的酵母含量为40% -60%，粗蛋白质含量为5% _8%，糖含量为5% -10%。。
4.一种权利要求1所述的柑橘大实蝇蛋白诱饵的使用方法，其特征在于采用诱杀或点喷诱杀从每年5月开始至8月，在柑橘园悬挂诱捕器诱杀，每个诱捕器内添加柑橘大实 蝇蛋白诱饵50ml，添加少量高效、低毒、低残留杀虫剂，如敌百虫，再加水稀释到300ml，诱 捕器悬挂于树冠的阴面，高度1. 2-1. 5米，每周更换一次蛋白诱饵；点喷将蛋白诱饵用水稀释，与杀虫剂混配，分别于5月下旬、6月中旬、7月中旬点喷柑 橘园树冠叶片背面，每棵柑橘树点喷三分之一树冠，每个果园点喷三分之一园区。
全文摘要
本发明涉及一种柑橘大实蝇蛋白诱饵及其制备方法和使用方法。蛋白诱饵由啤酒酵母水解物、醋酸铵、红糖和橙汁配制而成。制备方法是将有活性的啤酒酵母泥灭菌、过滤、加热浓缩，在磁力搅拌器上加热煮沸，然后自然冷却至室温。酵母液加蒸馏水配制成酵母液底物，添加木瓜蛋白酶酶解，添加防腐剂。以啤酒酵母水解物、醋酸铵、红糖和橙汁混配柑橘大实蝇蛋白诱饵。使用方法是置于诱捕器诱杀成虫或点喷柑橘园。本发明原料来源广泛、工艺简单、不污染环境、成本较低；本发明利用柑橘大实蝇成虫羽化后需补偿蛋白的情况，在啤酒酵母水解物中添加醋酸铵、红糖、橙汁引诱剂与少量杀虫剂一起，能雌雄双杀，平均引诱力为61.11％，高于美国圆酵母和国内糖醋酒液。
文档编号A01P19/00GK101878781SQ20101019602
公开日2010年11月10日 申请日期2010年6月4日 优先权日2010年6月4日
发明者周晓渭, 张宏宇, 牛长缨, 雷朝亮, 韩鹏 申请人:华中农业大学