专利名称：一种白蚁巢上炭角菌属种的分离培养方法
技术领域：
本发明涉及一种菌种的分离培养方法，特别是白蚁巢上炭角菌属种的分离培养方法。
背景技术：
炭角菌属有黑柄炭角菌Xylaria nigripes (Klotzsch) &icc.、痂状炭角菌 Xylaria escharoidea (Berk. ) Sacc.等，黑柄炭角菌中文别名乌灵参、鸡茯苓、地炭棍，菌核生长在废弃的白蚁窝上。经济用途药用菌核，其性温，味微苦。民间药用，能除湿、镇惊、 止心悸，催乳、补肾、安眠的作用。治产后失血，跌打损伤，可与肉炖食，作为补药。由于炭角菌生长环境的特殊性，其菌种的自然繁殖远远不能满足人们对该药源植物的需求，为了解决供需矛盾，人们多采用人工栽培的方法扩大药源，但在人工栽培中，如果以常规方法育种，菌种产量产值均较低。
发明内容
本发明的目的即在于克服现有技术的缺点，提供一种白蚁巢上炭角菌属种的分离培养方法，它能大大提高白蚁巢上炭角菌属种产量，杜绝了菌种的病毒危害，保障了菌种的
产量和产值。本发明的目的通过以下技术方案来实现一种白蚁巢上炭角菌属种的分离培养方法，它包括以下步骤
(1)白蚁巢的获取方法
从生长蚁巢伞地方挖开土壤，从中取出白蚁巢，将白蚁巢装入塑料袋内，密封保藏；
(2)炭角菌培养方法
将获得的白蚁巢取100 300克，装入250ml 300 ml的三角瓶内，瓶口用塑料薄膜密封；或者将白蚁巢装入塑料袋内，密封袋口 ；在室内25 30°C下培养，培养至形成黑色棒状子实体为止；
(3)菌种分离方法
A、培养基a配制培养基按以下组分及重量比配制马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂 20g，按以上比例称取，然后加入水IOOOmL ；培养基b配制培养基按以下组分及重量比配制酵母粉5g、葡萄糖20g、琼脂20g，按以上比例称取，然后加入水IOOOmL ；
B、分离方法
将培养出的炭角菌子实体取出，用70% 75%的酒精棉球擦洗子实体表面，然后在无菌环境下将子实体折断，手术刀在酒精灯火焰上灼烧杀菌并冷却后，切取子实体内部组织，放在培养基a或培养基b上；
(4)菌种培养方法
将放入子实体组织块的培养基，在22°C 25°C下培养，培养至形成黑色子实体为止， 将形成黑色子实体的菌种，确定为炭角菌属菌种，选择无细菌和霉菌感染的菌种使用；(5)菌种保藏
将菌种用纸包裹，在室内20°C 30°C下保藏，间隔2 3个月转接培养一次。通过上面的叙述可以看出，本发明具有以下优点利用本发明的分离培养方法，菌种具有不受地区、季节与气候限制，便于工厂化生产等优势，大大提高了白蚁巢上炭角菌属种产量，保障了菌种的产值。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明做进一步的描述
实施例1 一种白蚁巢上炭角菌属种的分离培养方法，它包括以下步骤
(1)白蚁巢的获取方法
从生长蚁巢伞地方挖开土壤，从中取出白蚁巢，将白蚁巢装入塑料袋内，密封保藏；
(2)炭角菌培养方法
将获得的白蚁巢取100克，装入250ml的三角瓶内，瓶口用塑料薄膜密封；或者将白蚁巢装入塑料袋内，密封袋口 ；在室内25°C下培养，培养至形成黑色棒状子实体为止；
(3)菌种分离方法
A、培养基配制培养基a配制培养基按以下组分及重量比配制马铃薯200g、葡萄糖 20g、琼脂20g，按以上比例称取，然后加入水IOOOmL ；
B、分离方法
将培养出的炭角菌子实体取出，用70%的酒精棉球擦洗子实体表面，然后在无菌环境下将子实体折断，在酒精灯火焰上灼烧杀菌并冷却后，切取子实体内部组织，放在培养基上；
(4)菌种培养方法
将放入子实体组织块的培养基，在22°C下培养，培养至形成黑色子实体为止，将形成黑色子实体的菌种，确定为炭角菌属菌种，选择无细菌和霉菌感染的菌种使用；
(5)菌种保藏
将菌种用纸包裹，在室内20°C下保藏，间隔2个月转接培养一次。实施例2 一种白蚁巢上炭角菌属种的分离培养方法，它包括以下步骤
(1)白蚁巢的获取方法从生长蚁巢伞地方挖开土壤，从中取出白蚁巢，将白蚁巢装入塑料袋内，密封保藏；
(2)炭角菌培养方法
将获得的白蚁巢取300克，装入300 ml的三角瓶内，瓶口用塑料薄膜密封；或者将白蚁巢装入塑料袋内，密封袋口 ；在室内30°C下培养，培养至形成黑色棒状子实体为止；
(3)菌种分离方法
A、培养基配制培养基b配制培养基按以下组分及重量比配制酵母粉5g、葡萄糖 20g、琼脂20g，按以上比例称取，然后加入水IOOOmL ；
B、分离方法
将培养出的炭角菌子实体取出，用75%的酒精棉球擦洗子实体表面，然后在无菌环境下将子实体折断，手术刀在酒精灯火焰上灼烧杀菌并冷却后，切取子实体内部组织，放在培
养基上；(4)菌种培养方法
将放入子实体组织块的培养基，在25°C下培养，培养至形成黑色子实体为止，将形成黑色子实体的菌种，确定为炭角菌属菌种，选择无细菌和霉菌感染的菌种使用；
(5)菌种保藏
将菌种用纸包裹，在室内30°C下保藏，间隔3个月转接培养一次。实施例3 一种白蚁巢上炭角菌属种的分离培养方法，它包括以下步骤
(1)白蚁巢的获取方法
从生长蚁巢伞地方挖开土壤，从中取出白蚁巢，将白蚁巢装入塑料袋内，密封保藏；
(2)炭角菌培养方法
将获得的白蚁巢取200克，装入300 ml的三角瓶内，瓶口用塑料薄膜密封；或者将白蚁巢装入塑料袋内，密封袋口 ；在室内下培养，培养至形成黑色棒状子实体为止；
(3)菌种分离方法
A、培养基配制培养基a配制培养基按以下组分及重量比配制马铃薯200g、葡萄糖 20g、琼脂20g，按以上比例称取，然后加入水IOOOmL ；
B、分离方法
将培养出的炭角菌子实体取出，用75%的酒精棉球擦洗子实体表面，然后在无菌环境下将子实体折断，在酒精灯火焰上灼烧杀菌并冷却后，切取子实体内部组织，放在培养基上；
(4)菌种培养方法
将放入子实体组织块的培养基，在23°C下培养，培养至形成黑色子实体为止，将形成黑色子实体的菌种，确定为炭角菌属菌种，选择无细菌和霉菌感染的菌种使用
(5)菌种保藏
将菌种用纸包裹，在室内下保藏，间隔2. 5个月转接培养一次。实施例4 一种白蚁巢上炭角菌属种的分离培养方法，它包括以下步骤
(1)白蚁巢的获取方法
从生长蚁巢伞地方挖开土壤，从中取出白蚁巢，将白蚁巢装入塑料袋内，密封保藏；
(2)炭角菌培养方法
将获得的白蚁巢取250克，装入300 ml的三角瓶内，瓶口用塑料薄膜密封；或者将白蚁巢装入塑料袋内，密封袋口 ；在室内27°C下培养，培养至形成黑色棒状子实体为止；
(3)菌种分离方法
A、培养基配制培养基b配制培养基按以下组分及重量比配制酵母粉5g、葡萄糖 20g、琼脂20g，按以上比例称取，然后加入水IOOOmL ；
B、分离方法
将培养出的炭角菌子实体取出，用72%的酒精棉球擦洗子实体表面，然后在无菌环境下将子实体折断，手术刀在酒精灯火焰上灼烧杀菌并冷却后，切取子实体内部组织，放在培养基上；
(4)菌种培养方法
将放入子实体组织块的培养基，在下培养，培养至形成黑色子实体为止，将形成黑色子实体的菌种，确定为炭角菌属菌种，选择无细菌和霉菌感染的菌种使用；(5)菌种保藏
将菌种用纸包裹，在室内27°C下保藏，间隔2个月转接培养一次。
权利要求
1. 一种白蚁巢上炭角菌属种的分离培养方法，其特征在于，它包括以下步骤(1)白蚁巢的获取方法从生长蚁巢伞地方挖开土壤，从中取出白蚁巢，将白蚁巢装入塑料袋内，密封保藏；(2)炭角菌培养方法将获得的白蚁巢取100 300克，装入250mL 300 mL的三角瓶内，瓶口用塑料薄膜密封；或者将白蚁巢装入塑料袋内，密封袋口 ；在室内25 30°C下培养，培养至形成黑色棒状子实体为止；(3)菌种分离方法A、培养基a配制培养基按以下组分及重量比配制马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂 20g，按以上比例称取，然后加入水IOOOmL ；培养基b配制培养基按以下组分及重量比配制酵母粉5g、葡萄糖20g、琼脂20g，按以上比例称取，然后加入水IOOOmL ；B、分离方法将培养出的炭角菌子实体取出，用70% 75%的酒精棉球擦洗子实体表面，然后在无菌环境下将子实体折断，手术刀在酒精灯火焰上灼烧杀菌并冷却后，切取子实体内部组织，放在培养基a或培养基b上；(4)菌种培养方法将放入子实体组织块的培养基，在22°C 25°C下培养，培养至形成黑色子实体为止， 将形成黑色子实体的菌种，确定为炭角菌属菌种，选择无细菌和霉菌感染的菌种使用；(5)菌种保藏将菌种用纸包裹，在室内20°C 30°C下保藏，间隔2 3个月转接培养一次。
全文摘要
本发明公开了一种白蚁巢上炭角菌属种的分离培养方法，它包括以下步骤(1)白蚁巢的获取方法；(2)炭角菌培养方法；(3)菌种分离方法；(4)菌种培养方法；(5)菌种保藏。利用本发明的分离培养方法，菌种具有不受地区、季节与气候限制，便于工厂化生产等优势，大大提高了白蚁巢上炭角菌属种产量，保障了菌种的产量和产值。
文档编号C05G3/00GK102334419SQ20111021606
公开日2012年2月1日 申请日期2011年7月30日 优先权日2011年7月30日
发明者王波, 甘炳成, 鲜灵, 黄忠乾 申请人:四川省农业科学院土壤肥料研究所