专利名称：一种栀子花组织培育及其无公害种植方法
技术领域：
本发明涉及桅子花组培方法，属于植物组织培养领域，具体的说是一种桅子花组织培育及其无公害种植方法。
背景技术：
桅子花又名桅子，为龙胆目、茜草科、桅子属的常绿灌木，喜欢温暖湿润和阳光充足的环境，较耐寒，耐半阴，怕积水，要求疏松、肥沃和酸性的沙壤土，原产于中国，其花枝叶繁茂，叶色四季常绿，花芳香素雅，除观赏外，其花、果实、叶和根可入药，有泻火除烦，清热利尿，凉血解毒之功效，作为园林观赏植物和药用植物在世界各地被广泛应用。目前公知的就桅子花栽培方法是采用扦插法、压条法、分株和播种法进行繁殖，在欧美及日本等地区对桅子属植物的分类、栽培及育种等方面有较为系统深入的研究，而我国对桅子属种质资源的利用和开发力度尚显不足。在国内各类文献资料中只有少量的关于玉簪属种质资源及园林应用、观赏用桅子品种的组织培养等方面的报到，而关于桅子花的组织培养及种植的全套种植方法则未见报道。
发明内容
针对现在技术的上述不足，本发明的目的在于提供一种桅子花组织培育及其无公害种植方法，操作简单，繁殖率高，可大量生产桅子花试管苗。本发明所述的一种桅子花组织培育及其无公害种植方法，其特征在于将桅子花外植体消毒清洗，经过愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖，不定根诱导，炼苗，无公害种植即达到本发明的实验目的。为了实现本发明的目的，提供了如下具体技术方案a.外植体的选择和消毒选用当年新发的叶片，剪下叶片经水洗，在超净工作台上用70%的乙醇处理10s，再用0. 升汞消毒，浸泡并振荡6 8min，无菌水清洗4 6 次，用滤水纸吸干水分备用；b.培养将消毒后的桅子花叶片剪成小块，形成愈伤组织接种在MS培养基上培养 30天，培养温度为20 25°C，光照强度2000LUX，每天光照14小时，进行愈伤组织诱导与分化；分化形成丛芽，培养的不定芽单个切开转接在培养基上增殖培养，形成增殖体的幼苗转接到1/2MS+IBA 0. 2mg/L的培养基中，25 30天即有愈伤组织分化形成的芽丛；c.生根培养将大而健壮的芽转接至生根培养基MS+NAA0 0. 05mg/L 15 21天生根；d.炼苗是将试菅苗从组培室取出后置于温棚中，放置5 7天，取出幼苗洗净培养基后移植在装有腐质土和红土 1 1并加少许腐质叶为基质的营养袋内，浇水，在 1000 2000LX中光照8 12小时，湿度大于70%条件下练苗1个月，当叶达6 10片， 高达6 8cm时移栽种植；e.无公害种植是在天然条件下进行种植，选择海拔800 2500m，林下，沟边，瀑布两旁或有遮阴条件的荒土；满足日照年平均6小时/日、年平均最高温度不高于18°C、月平均最高温度在11 23°C、最低可达0°C的条件；满足地下5cm 土温年平均最高温度不高于 16°C、月平均最高温度在9 20°C、最低可达9°C以下的条件；建立隔离区，防牛马进入而踏坏。所述愈伤组织诱导接种在MS培养基加含6-BA0. 25 0. 5mg/L, ΝΑΑ0. 2 0. 3mg/ L培养基上，光照10 16小时，湿度大于70%条件下直接诱导产生丛芽，25 30天开始萌动；再经8 14天有丛芽出现；7 15天丛芽长叶。所述不定芽增殖接种在1/2MS+IBA 0. 2mg/L的培养基中，25 30天便可形成幼苗；增殖培养产生的新丛芽，叶变绿，2 3cm时，进一步转接进行增殖培养或继代培养。所述生根培养是接至生根培养基MS+NAA 0 0. 05mg/L 15 21天生根，练苗后移栽。本发明所述的一种桅子花组织培育及其无公害种植方法，有益效果在于可获得大批组培苗满足种植需要，并采用天然林区种植克服农药及重金属污染，成活率达95.5%， 单株重量高于同年野生和无繁种植药材2倍，并有效成分含量高于同年野生药材；并满足制药企业对原药材的需求，既可成批培育又可全面积种植组培苗，并且提早二年获得无公害药材，具有实用价值。
具体实施例方式通过本发明的实施例，对本发明的上述内容再做进一步的详细说明实施例1:1.外植体材料的采取和处理选择桅子花6月生长茂盛无病的母株新发幼嫩叶片叶为外殖体材料，采集野生或家种桅子花全株移种在花盒中，用清水洗叶，待新叶长出，从母株上剪下活叶片用自来水冲洗15分钟，除去叶表面的尘土和绒毛，将叶片放入70%的乙醇中翻转20秒钟，除去叶表面的蜡质物后用清水冲洗叶面除去乙醇，放入0. 升汞液中浸泡15分钟消毒，无菌水洗净后剪成Icm2小方块，叶背面平放于培养基中，每瓶放4块外植体，盖紧瓶盖，用保鲜袋封好瓶口，在无菌操作台上完成接种；2.愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖和不定根诱导①愈伤组织诱导与分化在无菌条件下，从消毒后叶片上剪下lcm2小叶块，接种在MS培养基加含6-BA 0. 25mg/L+NAA 0. 2mg/L培养基上，在25°C，光照lOOOLx，光照12小时，湿度大于70%条件下直接诱导产生丛芽，30天开始萌动；再经14天有丛芽出现，15天丛芽长叶；②不定芽增殖取出已长叶丛芽单个切开，在MS培养基加含6-BAO. 5mg/L+NAA 0. 3 0. 4mg/L培养基上，进行增殖培养；40 60天便可形成幼苗，取其高4 5cm的幼苗进行生根培养，增殖培养产生的新丛芽，叶变绿，2 3cm，可一进转接进行增殖培养或继代培养；③不定根诱导取出增殖培养长出高4 5cm的幼苗，单个切开，转接到 1/2MS+IBA 0. ang/L培养中，转接后15 21天，开始生根，40 60天根达3条以上，叶6 10片，高6 8cm的试菅苗可取出练苗；
3.炼苗将试菅苗从组培室取出后置于温棚中，放置5天，取出幼苗用清水洗净培养基移植在营养袋中，营养袋内装有腐质土和红土 1 1混均，加少许腐质叶为基质，绕清水，保湿控制光照2000LX，光照12小时，湿度大于70%条件下，练苗1月成活达92. 5%，叶10片，高 6cm移栽在大田中；4.天然条件下种植选择海拔800 2500m，林下，沟边，瀑布两旁或有遮阴条件的成遍土地，满足日照要求0. 8小时/日，年平均6小时/日，株行距依环境而定，可稀，可密；气候条件气温年平均最高温度不高于18°C，月平均最高温度在11 23°C，最低达0°C。地下5cm 土温最高温度年平均不高于16°c，月平均最高温度在9 20°C，最低达9°C以下。湿度最高达90 %，最低不低于70 %，月平均湿度在70 90 %之间，天然树遮阴。天然条件下种植，建立隔离区，防牛马进入而踏坏。
权利要求
1.一种桅子花组织培育及其无公害种植方法，其特征在于具体技术方案为a.外植体的选择和消毒选用当年新发的叶片，剪下叶片经水洗，在超净工作台上用 70%的乙醇处理10s，再用0. 1 %升汞消毒，浸泡并振荡6 8min，无菌水清洗4 6次，用滤水纸吸干水分备用；b.培养将消毒后的桅子花叶片剪成小块，形成愈伤组织接种在MS培养基上培养30 天，培养温度为20 25°C，光照强度2000LUX，每天光照14小时，进行愈伤组织诱导与分化；分化形成丛芽，培养的不定芽单个切开转接在培养基上增殖培养，形成增殖体的幼苗转接到V2MS+IBA 0. 2mg/L的培养基中，25 30天即有愈伤组织分化形成的芽丛；c.生根培养将大而健壮的芽转接至生根培养基MS+NAA0 0.05mg/L15 21天生根；d.炼苗是将试菅苗从组培室取出后置于温棚中，放置5 7天，取出幼苗洗净培养基后移植在装有腐质土和红土 1 1并加少许腐质叶为基质的营养袋内，浇水，在1000 2000Lx中光照8 12小时，湿度大于70%条件下练苗1个月，当叶达6 10片，高达6 8cm时移栽种植；e.无公害种植是在天然条件下进行种植，选择海拔800 2500m，林下，沟边，瀑布两旁或有遮阴条件的荒土；满足日照年平均6小时/日、年平均最高温度不高于18°C、月平均最高温度在11 23°C、最低可达0°C的条件；满足地下5cm土温年平均最高温度不高于16°C、 月平均最高温度在9 20°C、最低可达9°C以下的条件；建立隔离区，防牛马进入而踏坏。
2.如权利要求1所述一种桅子花组织培育及其无公害种植方法，其特征在于愈伤组织诱导接种在MS培养基加含6-BA0. 25 0. 5mg/L+NAA 0. 2 0. 3mg/L培养基上，光照 10 16小时，湿度大于70%条件下直接诱导产生丛芽，25 30天开始萌动；再经8 14 天有丛芽出现 ’7 15天丛芽长叶。
3.如权利要求1所述一种桅子花组织培育及其无公害种植方法，其特征在于不定芽增殖接种在6-BAO. 5mg/L+NAA 0. 3 0. 4mg/L培养基中，25 30天便可形成幼苗；增殖培养产生的新丛芽，叶变绿，2 3cm时，进一步转接进行增殖培养或继代培养。
4.如权利要求1所述一种桅子花组织培育及其无公害种植方法，其特征在于生根培养是接至生根培养基1/2MS+IBA 0. 2mg/L 15 21天生根，练苗后移栽。
全文摘要
本发明涉及栀子花组培方法，属于植物组织培养领域，具体的说是一种栀子花组织培育及其无公害种植方法。其特征在于将栀子花外植体消毒清洗，经过愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖，不定根诱导，炼苗，无公害种植即达到本发明的实验目的。有益效果在于可获得大批组培苗满足种植需要，并采用天然林区种植克服农药及重金属污染，成活率达95.5％，单株重量高于同年野生和无繁种植药材2倍，并有效成分含量高于同年野生药材；并满足制药企业对原药材的需求，既可成批培育又可全面积种植组培苗，并且提早二年获得无公害药材，具有实用价值。
文档编号A01G9/10GK102405838SQ20111028852
公开日2012年4月11日 申请日期2011年9月22日 优先权日2011年9月22日
发明者董永武 申请人:董永武