一种牡丹组织培育方法
【专利摘要】本发明公开一种牡丹组织培育方法，涉及一种花卉组培方法，属于植物组织培养领域。其特征在于：将牡丹外植体消毒清洗，经过愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖，不定根诱导，炼苗。有益效果在于：可获得大批组培苗满足种植需要，成活率达95.5％，既可成批培育又可全面积种植组培苗，并且提早二年获得无公害药材，具有实用价值。
【专利说明】一种牡丹组织培育方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种花卉组培方法，属于植物组织培养领域，具体的说是一种牡丹组织培育方法。
【背景技术】
[0002]牡丹原产于中国西部秦岭和大巴山一带山区，为多年生落叶小灌木，生长缓慢，株型小。牡丹是我国特有的木本名贵花卉，素有“国色天香”、“花中之王”的美称，长期以来被人们当做富贵吉祥、繁荣兴旺的象征。牡丹以洛阳牡丹、菏泽牡丹最富盛名。牡丹根皮入药，名曰“丹皮”，可作为盆景植物观赏，花朵颜色众多，有粉色，红色，白色等等，粉色以粉中冠，白色以景玉较为出名。牡丹不仅有观赏价值，而且还具有很高的药用价值。将牡丹的根加工制成“丹皮”，是名贵的中草药。
[0003]目前公知的就牡丹栽培方法是采用扦插法、压条法、分株和播种法进行繁殖，在欧美及日本等地区对桅子属植物的分类、栽培及育种等方面有较为系统深入的研究，而我国对桅子属种质资源的利用和开发力度尚显不足。在国内各类文献资料中只有少量的关于芍药属种质资源及园林应用、观赏用桅子品种的组织培养等方面的报到，而关于牡丹的组织培养及种植的全套种植方法则未见报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种牡丹组织培育方法，针对现有技术没有牡丹全套种植方法，从而设计研究出操作简单，繁殖率高，可大量生产牡丹试管苗的培育方法。
[0005]为实现上述目的，本发明所述一种牡丹组织培育方法，其特征在于:将牡丹外植体消毒清洗，经过愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖，不定根诱导，炼苗；其具体技术方案如下:`
[0006]a.外植体的选择和消毒:选用当年新发的茎尖，剪下茎尖经水洗，在超净工作台上用70%的乙醇处理IOs,再用0.1 %升萊消毒,浸泡并振荡6~8min,无菌水清洗4~6次，用滤水纸吸干水分备用；
[0007]b.培养:将消毒后的牡丹茎尖剪成小块，形成愈伤组织接种在MS培养基上培养30天，培养温度为20~25°C，光照强度2000LUX，每天光照14h，进行愈伤组织诱导与分化；分化形成丛芽，培养的不定芽单个切开转接在培养基上增殖培养，形成增殖体的幼苗转接到1/2MS+IAA 0.2mg/L的培养基中，25~30天即有愈伤组织分化形成的芽丛；
[0008]c.生根培养:将大而健壮的芽转接至生根培养基MS+IBA 0~0.05mg/L 15~21天生根；
[0009]d.炼苗:是将试菅苗从组培室取出后置于温棚中，放置5~7天，取出幼苗洗净培养基后移植在装有腐质土和泥炭1:1并加少许腐质叶为基质的营养袋内，浇水，在1000~2000LX中光照8~12h，湿度大于70%条件下练苗I个月，当叶达6~10片，高达6~8cm时移栽种植；[0010]e.天然条件下进行种植，选择海拔800~2500m，满足日照年平均6h/日、年平均最高温度不高于18°C、月平均最高温度在11~23°C、最低可达0°C的条件；满足地下5cm土温年平均最高温度不高于16°C、月平均最高温度在9~20°C、最低可达9°C以下的条件。[0011 ] 所述愈伤组织诱导接种在MS培养基加含NAA0.2~0.3mg/L培养基上，光照10~16h，湿度大于70%条件下直接诱导产生丛芽，25~30天开始萌动；再经8~14天有丛芽出现;7~15天丛芽长叶。
[0012]所述不定芽增殖接种在1/2MS+IBA 0.2mg/L的培养基中，25~30天便可形成幼苗；增殖培养产生的新丛芽，叶变绿，2~3cm时，进一步转接进行增殖培养或继代培养。
[0013]所述生根培养是接至生根培养基MS+NAA 0~0.05mg/L 15~21天生根，练苗后移栽。
[0014]本发明所述的一种牡丹组织培育方法，有益效果在于:可获得大批组培苗满足种植需要，成活率达95.5 %，既可成批培育又可全面积种植组培苗，并且提早二年获得无公害药材，具有实用价值。
【具体实施方式】
[0015]通过本发明的实施例，对本发明的上述内容再做进一步的详细说明
[0016]实施例1:
[0017]1.外植体材料的采取和处理:
[0018]选择牡丹6月生长茂盛无病的母株新发幼嫩茎尖叶为外殖体材料，采集野生或家种牡丹全株移种在花盒中，用清水洗叶，待新叶长出，从母株上剪下活茎尖用自来水冲洗15min，除去叶表面的尘土和绒毛，将茎尖放入70%的乙醇中翻转20s，除去叶表面的蜡质物后用清水冲洗叶面除去乙醇，放入0.1%升汞液中浸泡15min消毒，无菌水洗净后剪成Icm2小方块，叶背面平放于培养基中，每瓶放4块外植体，盖紧瓶盖，用保鲜袋封好瓶口，在无菌操作台上完成接种；
[0019]2.愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖和不定根诱导:
[0020]①愈伤组织诱导与分化:在无菌条件下，从消毒后茎尖上剪下lcm2小叶块，接种在MS培养基加含6-BA 0.25mg/L+NAA 0.2mg/L培养基上，在25°C，光照lOOOLx，光照12h，湿度大于70%条件下:直接诱导产生丛芽，30天开始萌动；再经14天有丛芽出现，15天丛芽长叶；
[0021]②不定芽增殖:取出已长叶丛芽单个切开，在MS培养基加含6-BA0.5mg/L+NAA
0.3mg/L培养基上，进行增殖培养；40~60天便可形成幼苗，取其高4~5cm的幼苗进行生根培养，增殖培养产生的新丛芽，叶变绿，2~3cm，可一进转接进行增殖培养或继代培养；
[0022]③不定根诱导:取出增殖培养长出高4cm的幼苗，单个切开，转接到1/2MS+IBA
0.2mg/L培养中，转接后151天，开始生根，40天根达3条以上，叶6片，高6cm的试菅苗可取出练苗；
[0023]3.炼苗:
[0024]将试菅苗从组培室取出后置于温棚中，放置5天，取出幼苗用清水洗净培养基移植在营养袋中，营养袋内装有腐质土和红土 1:1混均，加少许腐质叶为基质，绕清水，保湿控制光照2000Lx，光照12h，湿度大于70%条件下，练苗I月成活达92.5%，叶10片，高6cm移栽在大田中；
[0025]4.天然条件下种植:
[0026]选择海 拔800m，气温18°C，湿度在75%，满足日照要求:0.8h/日，株行间距20cm。
【权利要求】
1.一种牡丹组织培育方法，包括外植体消毒清洗，经过愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖，不定根诱导，炼苗，其特征在于:外植体为当年新发的茎尖，使其成为愈伤组织后，在进行培养形成芽丛，在转接至生根培养基后炼苗。
2.如权利要求1所述一种牡丹组织培育方法，其特征在于:所述炼苗是将试菅苗从组培室取出后置于温棚中，放置5~7天，取出幼苗洗净培养基后移植在装有腐质土和泥炭I: I并加少许腐质叶为基 质的营养袋内，浇水，在1000~2000Lx中光照8~12h，湿度大于70%条件下练苗I个月，当叶达6~10片，高达6~8cm时移栽种植。
【文档编号】A01H4/00GK103621399SQ201210297136
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2012年8月20日 优先权日:2012年8月20日
【发明者】阎立燕 申请人:阎立燕