专利名称：青贮饲料添加剂及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中草药型青贮饲料生物添加剂及应用，特别涉及一种青贮饲料添 加剂及其制备方法与应用。
背景技术：
青贮饲料比同类青饲料直接利用或制成干草的消化率要高，并且青贮饲料干物质 中的可消化粗蛋白质、总养分和能量含量也较高，经过青贮发酵后青贮饲料细胞壁成分消 化率也会明显提高。但是，自然状态下青饲料的缓冲值高，可溶性碳水化合物含量低，自然 状态下青贮比较困难，这种现象在豆科牧草中尤为明显。青贮添加剂能加快青贮发酵速度， 提高青贮饲料品质。近年来，国内外的青贮添加剂的种类主要有铵类化合物、有机酸类、尿 素和生物防腐剂等，但无机化学类添加剂有一定的腐蚀性，对人和家畜存在安全隐患，而生 物类添加剂多从国外进口，成本较高。
目前，在畜禽疾病的预防与治疗中向饲料中添加抗生素、激素、化学合成药比较常 见，虽然其效果明显，但常常在产品中有残留，危害消费者健康，三致(致癌、致畸、致突变) 现象严重，同时易产生抗药性。为了得到高效、安全、无公害的畜产品，在畜禽饲料中添加中 草药成为一种新趋势。但目前国内外生产中，多以中药粗粉和饲料混合后直接饲喂，这在集 约化养殖的情况下使用非常不方便，从而大大限制了中草药在防治动物疾病方面的规模化 应用，并且中草药制剂的年产量也非常有限，根本满足不了实际需要。将中草药制剂添加到 青贮原料中进行发酵，在提高青贮品质的同时，也为中草药的推广应用提供了有效途径。发明内容
本发明的目的是提供一种青贮饲料添加剂及其制备方法与应用。
本发明提供的青贮饲料添加剂，其活性成分为下述a)或b)的组合物
由黄芪的提取物和山楂的提取物组成的组合物；其中，两种提取物混合在一起；
由黄芪的提取物和山楂的提取物组成的组合物；其中，两种提取物分别独立包装。
所述a)和b)组合物中，黄芪，又名黄耆，为豆科草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的 根；山楂，为蔷薇科植物山里红或野山楂的成熟果实。
所述a)和b)组合物中，黄芪的提取物和山楂的提取物的质量比为O.75-1. 25 O. 75-1. 25，具体为 O. 75 O. 75 或1:1 或1. 25 1.25。
其中，所述黄芪的提取物是用水从黄芪中提取得到的水溶性物质；具体的，所述 黄芪的提取物按照包括如下步骤的方法制备而得将黄芪加水浸泡30min后煮沸，文火 煎煮后进行第一次过滤，得到第一次滤液和滤渣，向所得滤渣中加水150ml后再文火煎 煮后，进行第二次过滤，将所得第二次滤液和第一次滤液合并，文火煎煮浓缩至固含量为O.96-1. 04g/ml，得到所述黄芪的提取物；
所述山楂的提取物是用水从山楂中提取得到的水溶性物质；具体的，所述山楂的 提取物按照包括如下步骤的方法制备而得将山楂加水浸泡30min后煮沸，文火煎煮后进行第一次过滤，得到第一次滤液和滤渣，向所得滤渣中加水150ml后再文火煎煮后，进行第 二次过滤，将所得第二次滤液和第一次滤液合并，文火煎煮浓缩至固含量为O. 96-1. 04g/ ml，得到所述山楂的提取物；
所述黄芪或山楂与浸泡水的用量比具体均为24. 5-25. 5g 249_251mL，更具体为 25g : 25OmL ；
所述煎煮步骤中，文火煮沸时间具体为25-35分钟，更具体为30分钟；
所述过滤步骤中，滤布孔径具体为O. 9mm-1. 1mm,更具体为Imm ；
所述固含量均具体为lg/mL。
所述青贮饲料添加剂具体为青贮饲料发酵促进剂。所述青贮饲料发酵促进剂是一 种在发酵前加入青贮原料中，与所述青贮原料一起进行厌氧发酵从而促进发酵的青贮饲料 添加剂。
本发明提供的制备所述青贮饲料添加剂的方法，包括如下步骤将前述黄芪的提 取物和山楂的提取物进行混合或独立包装，得到所述青贮饲料添加剂的活性成分。
本发明提供的制备青贮饲料的方法，包括如下步骤在青贮原料中添加前述青贮 饲料添加剂后进行厌氧发酵，得到所述青贮饲料。
上述方法中，青忙原料为制作青忙饲料的原料，即青饲料(也叫青绿饲料、绿饲 料)，是指可以用作饲料的植物新鲜茎叶，主要包括天然牧草、栽培牧草、田间杂草、菜叶类、 水生植物、嫩枝树叶等。
所述青贮饲料是将青饲料在厌氧的条件下进行发酵得到的饲料。
所述青贮原料的含水量为60% -75%，具体为60%或65%或70%或60-70%或 65-70% ；
所述青贮饲料添加剂的添加量以所述a)或b)组合物的干重计，是所述青贮原料 质量的O. 75% -1. 25%，具体为含水量为60% -75% (或60%或65%或70%或60-70%或 65-70% )青贮原料的质量的O. 75% -1. 25%。
所述厌氧发酵步骤中，温度为15_30°C，时间为30-90天，具体为45天。
按照前述方法制备得到的青贮饲料，也属于本发明的保护范围。其中，所述青贮饲 料具有下述至少一种特性
I)粗蛋白含量高于对照；
2)氨态氮与总氮的比值低于对照；
3)中性洗涤纤维含量低于对照；
4)酸性洗涤纤维含量低于对照；
5) pH值低于对照；
6)乳酸高于对照，丁酸低于对照。
所述对照为经过如下方法制备的饲料除不加所述青贮饲料添加剂外，其它条件 均与前述方法相同。
所述青贮饲料均为豆科牧草青贮饲料，具体为苜蓿属青贮饲料，更具体为以紫花 苜蓿为青贮原料制备的青贮饲料；
所述青贮原料为豆科牧草，具体为苜蓿属牧草，更具体为紫花苜蓿(Medicago sativa)。
本发明将由黄芪和山楂组成的混合物作为青贮饲料添加剂与青贮原料共同发酵, 能够促进乳酸菌生长繁殖和提高青贮饲料的发酵品质，所制备的青贮饲料，与不加所述青 贮饲料添加剂的对照相比，其粗蛋白含量升高，和/或氨态氮与总氮的比值降低，和/或中 性洗涤纤维含量降低，和/或酸性洗涤纤维含量降低，和/或PH值降低。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所 述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径而得。 下面以紫花苜猜(Medicago sativa)作为青忙原料为例，阐明本发明的技术方案。
实施例1、青贮饲料添加剂的制备
称取黄芪25g，250mL去离子水浸泡30min后煎煮，沸后文火煎煮30min，用孔径为 Imm的4层纱布进行第一次过滤得到第一次滤液和药渣，在药渣中加入150ml水，文火煎煮 30min后进行第二次过滤，将所得第二次滤液与第一次滤液合并后，文火煎煮浓缩至25ml， 使其固含量为lg/ml，即为100%中草药原液，该100%中药原液即为黄芪的提取物。
按照与上相同的方法，将黄芪替换为山楂，得到山楂的提取物。
将上述黄芪的提取物和山楂的提取物分别以质量比O. 75 O. 75,1 I和1.25 1. 25混合在一起，依次得到青贮饲料添加剂I) -3)。
实施例2、用实施例1的青贮饲料添加剂制备紫花苜蓿青贮饲料
一、材料
青忙原料取初花期刘割的紫花苜猜(Medicago sativa)鲜草进行晾晒,期间进 行多时间多点采样，用微波炉快速干燥法测定含水量，当其水分分别达到75%时，用铡刀切 割至2-3cm,获得青忙原料。
二、实验方法
将青贮原料分为四组，包括青贮饲料添加剂1-3试验组和对照组。
其中，青贮饲料添加剂I组按Ikg鲜草中添加干重计的15g的实施例1的青贮饲 料添加剂I);
青贮饲料添加剂2组按Ikg鲜草中添加干重计的20g的实施例1的青贮饲料添加 剂2)；
青贮饲料添加剂3组按Ikg鲜草中添加干重计的25g的实施例1中的青贮饲料添 加剂3)；
对照组不添加任何物质。
将按上述方法制备的药液均匀喷洒在苜蓿鲜草上，再将鲜草放到聚丙烯袋中，每 袋200g左右，用真空封口机封口，在室温条件下(25-38°C )进行青贮发酵，45天后开袋。在 青贮45天以及开袋后在空气中暴露第1、3、5、7天取样，进行实验室分析，主要分析pH值、 干物质、粗蛋白、氨态氮、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维，开袋后发霉程度，实验结果见表1、 表2和表3。
反应青贮饲料品质各指标的测定方法如下
(I)干物质测定
用烘箱烘干法测定取青贮原料或青贮饲料鲜样称重记下重量，在烘箱中65°C干燥48h直到恒重，并记录所称的重量以计算干物质(DM)含量。
(2) pH 值测定
准确称取剪碎的青贮10. Og,加入90mL蒸馏水搅拌均匀后用组织搅碎机搅拌I分 钟。定性滤纸和四层纱布过滤，用PH测定仪测定滤液的pH值。
(3)氨态氮/总氮值的测定(Broderick和Kang, 1980)采用苯酹_次氯酸钠比色 法测定
苯酚试剂将O. 05g亚硝基铁氰化钠(Na2Fe (CN) 5 · NO · 2H20，297. 95，化学纯 (25g))溶解在O. 5L蒸馏水中，再加入I ImL苯酚溶液或9. 9g结晶苯酚(C6H50 , 94. 11, Phenol A. R.，500g，分析纯)，定容到IL后贮存在棕色的玻璃试剂瓶中。
次氯酸钠试剂将5gNa0H溶解在2/3L的蒸馏水中，再加入20.1gNa2HPO4加热至溶 解。冷却后加入14. 7ml含8. 5%活性氯的次氯酸钠溶液(74. 44，分析纯，活性氯不低7% ) 并混匀，定容到1L。
标准氨溶液称取O. 6607g经100。。24小时烘干的(NH4)2S04(132. 14，化学纯) 溶于蒸馏水中，并定容至100ml，配制成lOOmmol/L的氨储备液，将上述储备液稀释配制成1.0,2.0,3.0,4.0,5. OmmoI/L五种不同浓度梯度的标准液。
简要操作步骤向每只试管中加入50ul经适当倍数稀释的样本液或标准液，空白 为50ul蒸懼水；向每支试管中加入2. 5ml的苯酹试剂,摇勻；再向每只试管中加入2ml次氯 酸钠试剂，并混匀；将混合液在95°C水浴中加热显色反应5分钟；冷却后，630nm波长下比 色。
(4)酸性洗涤纤维(ADF)、中性洗涤纤维(NDF)测定采用范氏洗涤纤维法测定；
NDF药品的配制(一个纤维袋0. 5g样品)称取1. 86g乙二胺四乙酸二钠(EDTA， 372.24)，0.68g硼酸钠(Na2B4O7 · IOH2O,化学纯381. 37)，3g十二烷基硫酸钠(化学纯 288. 38), Iml乙二醇乙醚(化学纯90. 12) ;0· 456g无水磷酸氢二钠(化学纯141. 96)，0. 5g 无水亚硫酸钠。溶入IOOml蒸馏水中。
简要操作步骤称量滤袋的重量去皮后，称量0. 4500-0. 5500g样品放入滤袋，用 封口机在距离袋口 4mm处封口。准确称量一个空白滤袋，将滤袋放置在滤袋架上，放入纤维 分析仪中，放入重锤确保最上层滤袋可以浸没在液面下，在开始前要向纤维仪内加入4. Oml 的Alpha-淀粉酶,在B 口处放入淀粉酶加液(8. Oml的Alpha-淀粉酶稀释至250ml)。纤维 仪洗涤过，将滤袋取出，在105°C完全干燥2-4小时，冷却称重。
ADF药品的配制称取20g十六烷三甲基溴化氨(CTAB，化学纯364. 47)溶于 IOOOmlO. 5mol/L硫酸溶液中(0. 5mol/L硫酸取55. 74ml浓硫酸加入蒸懼水定容至1L)。
简要操作步骤称量滤袋的重量去皮后，称量0. 4500-0. 5500g样品放入滤袋，用 封口机在距离袋口 4mm处封口。准确称量一个空白滤袋，将滤袋放置在滤袋架上，放入纤 维分析仪中，放入重锤确保最上层滤袋可以浸没在液面下。纤维仪洗涤过，将滤袋取出，在 105°C完全干燥2-4小时,冷却称重。
(5)粗蛋白质的测定采用凯式定氮法
含溴甲酹绿和甲基红指示剂的1%的硼酸溶液将IOOg硼酸(Boric cid,61. 83, H3BO3,分析纯，(500g))溶于10升蒸懼水配成I %硼酸溶液。添加IOOml溴甲酹绿(Bromo cresol green, C21H14O5Br4S, 698. 02, (5g))溶液(IOOmg 溴甲酹绿溶于 100ml 乙醇)。添加70ml甲基红溶液(IOOmg溶于IOOml乙醇)。O.1N HCl 16. 6ml盐酸加入IOOOml蒸懼水中。 再加入 40% NaOH;催化剂SK2SO4 CuSO4 = 15 I。
简要的操作步骤将草样烘干草样粉碎过Imm筛，称量草样5. Og左右，将其放入消煮管中加5. Og的催化剂和10. Oml的浓硫酸，放在消煮炉上，于410°C下消煮I小时左右，消煮好后冷却，用凯式定氮仪测定。
(6)有机酸的测定
采用高效液相色谱SHIMADZE-10A测定乳酸和挥发性脂肪酸(乙酸、丙酸和丁酸)。 色谱柱Shodex Rspak KC-811S-DVB gel Column30X8mm ;检测器！SFO-MlOAVp ;流动相 3mmol/L高氯酸;流速lml/min ;柱温50°C ;检测波长2IOnm ;进样量5μ I。
简要的操作步骤准确称取剪碎的青贮10. Og,加入90mL蒸馏水搅拌均匀后用组织搅碎机搅拌I分钟。定性滤纸和四层纱布过滤，再用滤器将滤液过滤，可放在_20°C的条件下备用，用液相色谱仪测定。
(7)发霉程度的观察
青贮45天开袋后，观察各组的发霉情况，按发霉程度分为O (未见霉斑)、I (轻度发霉)、2(严重发霉)。
试验所得数据用Excel软件处理，并用SPSS17. O软件中的单因素方差分析程序对数据进行方差分析和多重比较。
三、实验结果
表1、青贮饲料添加剂对苜蓿青贮发酵品质的影响(表中所得百分含量均以干物质为基础)
权利要求
1.一种青贮饲料添加剂，其活性成分为下述a)或b)的组合物由黄芪的提取物和山楂的提取物组成的组合物；其中，两种提取物混合在一起；由黄芪的提取物和山楂的提取物组成的组合物；其中，两种提取物分别独立包装。
2.根据权利要求1所述的添加剂，其特征在于所述a)和b)组合物中，黄芪的提取物和山楂的提取物的质量比为O. 75-1. 25 O. 75-1. 25，具体为O. 75 O. 75或1:1或1. 25 1. 25。
3.根据权利要求1或2所述的添加剂，其特征在于所述黄芪的提取物是用水从黄芪中提取得到的水溶性物质；所述山楂的提取物是用水从山楂中提取得到的水溶性物质。
4.根据权利要求1-3任一所述的添加剂，其特征在于所述青贮饲料添加剂为青贮饲料发酵促进剂。
5.一种制备权利要求1-4任一所述青贮饲料添加剂的方法，包括如下步骤将权利要求1-4任一所述黄芪的提取物和山楂的提取物进行混合或独立包装，得到所述青贮饲料添加剂的活性成分。
6.一种制备青贮饲料的方法，包括如下步骤在青贮原料中添加权利要求1-4任一所述青贮饲料添加剂后进行厌氧发酵，得到所述青贮饲料。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述青贮原料的含水量为60%-75% ； 所述青贮饲料添加剂的添加量以所述a)或b)组合物的干重计，是所述青贮原料质量的 O. 75% -L 25% ;或，所述厌氧发酵步骤中，温度为15-30°C，时间为30-90天，具体为45天。
8.权利要求7或8任一所述方法制备得到的青贮饲料。
9.根据权利要求8所述的青贮饲料，其特征在于所述青贮饲料具有下述至少一种特1)粗蛋白含量闻于对照；2)氨态氮与总氮的比值低于对照；3)中性洗涤纤维含量低于对照；4)酸性洗涤纤维含量低于对照；5)pH值低于对照；6)乳酸高于对照，丁酸低于对照。所述对照为经过如下方法制备的饲料除不加所述青贮饲料添加剂外，其它条件均与权利要求6或7所述的方法相同。
10.根据权利要求1-4任一所述青贮饲料添加剂、权利要求5所述制备青贮饲料添加剂的方法、权利要求6或7所述的制备青贮饲料的方法、权利要求8或9所述青贮饲料添加剂， 其特征在于所述青贮饲料均为豆科牧草青贮饲料，具体为苜蓿属青贮饲料，更具体为以紫花苜蓿为青贮原料制备的青贮饲料；所述青贮原料为豆科牧草，具体为苜蓿属牧草，更具体为紫花苜蓿。
全文摘要
本发明公开了一种青贮饲料添加剂及其制备方法与应用。该青贮饲料添加剂，其活性成分为下述a)或b)的组合物由黄芪的提取物和山楂的提取物组成的组合物；其中，两种提取物混合在一起或分别独立包装。本发明制备的青贮饲料具有下述至少一种特性1)粗蛋白含量高于对照；2)氨态氮与总氮的比值低于对照；3)中性洗涤纤维含量低于对照；4)酸性洗涤纤维含量低于对照；5)pH值低于对照；6)乳酸高于对照，丁酸低于对照。
文档编号A23K1/14GK103053808SQ201310028700
公开日2013年4月24日 申请日期2013年1月25日 优先权日2013年1月25日
发明者杨富裕, 陆银, 张蕴薇, 玉柱, 邓海军, 徐然, 周静, 梁超 申请人:中国农业大学