专利名称：一种金边弧叶龙舌兰离体培养及再生体系建立的方法
技术领域：
本发明涉及一种龙舌兰麻离体培养及植株再生体系建立的方法，特别涉及一种金边弧叶龙舌兰离体培养及再生体系建立的方法，属于组织培养育苗技术领域。
背景技术：
金边弧叶龙舌兰麻为龙舌兰科龙舌兰属多年生草本植物，主要分布在热带、亚热带地区，叶长椭圆形，丛生，呈螺旋状排列于基部，叶缘有黄白色条纹，叶片坚挺美观，四季常青，是主要的园林观赏植物之一，有重要的观赏价值，常用于盆栽或庭院观赏。金边弧叶龙舌兰2-3年开一次花，开花后便整株死亡，因此多用珠芽繁殖。国内外对龙舌兰麻的组织培养和植株再生做了一定的探索。目前已成功建立了亚洲马盖麻(Acan tala Robx)、灰叶剑麻(A fourcroydes Lem)、普通剑麻(A si sal ana Perrine)、蓝剑麻(A tequilana Weber cultivar azul)> A. parrasana Berger、A. tequilana、A.eras si spina > A. duranguensi sA. vera-cruz Mill·、A. atrovirens、A.和普通剑麻、Η. 11648等体外再生体系并获得了完整的再生植株；目前有关金边弧叶龙舌兰麻离体培养与植株再生的研究还未见报道，因此，建立金边弧叶龙舌兰的离体培养和植株再生体系，不仅为快速繁殖提供有效途径，同时为龙舌兰麻诱变育种、单倍体育种以及基因工程育种打下良好的基础，为遗传改良提供有效途径。`
发明内容
本发明的目的是建立一种金边弧叶龙舌兰离体培养和植株再生的方法，为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是
一种金边弧叶龙舌兰离体培养和植株再生的方法，包括如下步骤
(1)外植体表面消毒及无菌苗培养
以金边弧叶龙舌兰珠芽苗茎尖为材料，先将外层老叶剥离，流水冲洗后用O. 3%高锰酸钾溶液处理30min，在超净工作台上用75%酒精处理f 2 min,再用O. 1%氯化汞溶液处理15 30 min，最后用无菌水冲洗3-5次，晾干后纵切，接种于丛芽诱导培养基HS (硝酸钾2500mg/L，磷酸二氢铵300 mg/L，二水氯化钙200 mg/L，七水硫酸镁400 mg/L，一水硫酸锰10 mg/L,七水硫酸锌I mg/L,硼酸5 mg/L,碘化钾I mg/L, 二水钥酸钠O.1 mg/L,五水硫酸铜O. 2 mg/L,六水氯化钴O.1 mg/L,七水硫酸铁27. 8 mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3 mg/L,盐酸硫胺素O. 5 mg/L,盐酸卩比B多醇O. 5 mg/L,烟酸O. 5 mg/L,肌醇100 mg/L,甘氨酸2 mg/L)上，HS基本培养基添加6-苄氨基腺嘌呤6-BA浓度为2. 0-5. O mg/L,培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/ L，卡拉胶浓度为8 g/ L，培养条件为每天光照12 h，暗培养12 h，光照强度1500 lux，培养温度为26±2°C ；
(2)愈伤组织的诱导
取步骤(I)培养的生长健壮的无菌苗茎尖纵切后连同嫩叶一起接种于愈伤组织诱导培养基中培养2-4周，剥离外层叶片后转入相同培养基上进行愈伤组织诱导培养，愈伤组织诱导培养基为MS基本培养基，添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA和萘乙酸NAA ;6_苄氨基腺嘌呤6-BA的浓度为1. 0-3. O mg/L，萘乙酸NAA的浓度为O. 1-1. O mg/L ;培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/ L，卡拉胶浓度为8 g/ L ;培养条件为黑暗24 h，温度26±2V ；
(3)愈伤组织继代培养
取步骤(2)诱导的淡黄绿色愈伤组织接种在继代培养基中进行继代培养，继代培养基为MS基本培养基，添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA、萘乙酸NAA和吲哚3 丁酸IBA ；其中 6-BA 的浓度为1. 0-5. O mg/L ；NAA 的浓度为 O. 01-1. O mg/L, IBA 的浓度为 O. 01-1. Omg/L;培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/ L，卡拉胶浓度为8 g/ L ;继代培养条件为光照12 h，黑暗12 h，光照强度1000 lux，温度26±2 V ；
(4)不定芽诱导
取步骤(3)继代培养的浅黄绿色愈伤组织切成黄豆大小后接种到不定芽诱导培养基中进行不定芽诱导，不定芽诱导培养基为HSl (硝酸钾2250 mg/L，磷酸二氢钾400 mg/L，硫酸铵150 mg/L，二水氯化钙400 mg/L，七水硫酸镁400 mg/L，一水硫酸锰10 mg/L，七水硫酸锌5 mg/L,硼酸5 mg/L,碘化钾I mg/L, 二水钥酸钠O.1 mg/L,五水硫酸铜O. 2 mg/L,六水氯化钴O.1 mg/L,七水硫酸铁27. 8 mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3 mg/L,盐酸硫胺素O. 5mg/L,盐酸卩比B多醇O. 5 mg/L,烟酸O. 5 mg/L,肌醇100 mg/L,甘氨酸2 mg/L)基本培养基，添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA、萘乙酸NAA和吲哚3 丁酸IBA ;其中6-BA的浓度为1. 0-5. O mg/L ；NAA 的浓度为 O. 01-1. O mg/L, IBA 的浓度为 O. 01-1. O mg/L，培养基的 pH 值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/ L，卡拉胶浓度为8 g/ L ;光照12 h，黑暗12 h，光照强度为1000lux，温度 26±2°C ；
(5)继代和生根培养
待步骤(4)得到的不定芽成苗后转接到继代培养基中进行继代培养，继代培养所用培养基为HS基本培养基(硝酸钾2500mg/L，磷酸二氢铵300 mg/L，二水氯化钙200 mg/L，七水硫酸镁400 mg/L,—水硫酸猛10 mg/L,七水硫酸锌I mg/L,硼酸5 mg/L,碘化钾I mg/L,二水钥酸钠O.1 mg/L，五水硫酸铜O. 2 mg/L，六水氯化钴O.1 mg/L，七水硫酸铁27. 8 mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3 mg/L,盐酸硫胺素O. 5 mg/L,盐酸卩比B多醇O. 5 mg/L,烟酸O. 5 mg/L，肌醇100 mg/L，甘氨酸2 mg/L)。添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA、萘乙酸NAA和叼丨哚3 丁酸IBA ;其中6-BA的浓度为1. 0-5. O mg/L ；NAA的浓度为O. 01-1. O mg/L, IBA的浓度为O. 01-1. O mg/L，培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/ L 1，卡拉胶浓度为8 g/L;光照12 h，黑暗12 h，光照强度为1500 lux，温度26±2°C ；
待继代培养的再生植株长到5-8 cm时转入生根培养基中进行生根培养，生根培养所用培养基为不加激素的MS基本培养基，培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/ L，卡拉胶浓度为8 g/ L ;培养条件为光照12 h，黑暗12 h，光照强度为1500 lux，温度26±2°C。
(6)再生植株移栽
待再生植株生根4周，长出4-8条壮根时，将其置于自然条件下炼苗I周，然后将其移出，洗净基部残留的培养基，用3%高锰酸钾浸泡1-3 min后移植到基质为火烧土 椰糠河沙(2 1 1)的塑料遮光大棚中，大棚遮光度75%，每天早晚各浇透水I次，再生植株的成活率在90%以上。
本发明相对于现有技术的有益效果是
本发明建立了一种金边弧叶龙舌兰离体培养及植株再生的方法，该方法实施步骤简单、实施条件宽松，效果显著。不仅可在短期内获得再生植株，同时为金边弧叶龙舌兰种质创新奠定了良好的基础。
图1金边弧叶龙舌兰离体培养及丛芽诱导；
图2金边弧叶龙舌兰无菌苗茎尖愈伤组织的诱导；
图3愈伤组织培养；
图4愈伤组织诱导不定芽；
图5不定芽继代培养；
图6再生植株生根培养。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。一种金边弧叶龙舌兰离体培养及再生体系建立的方法，包括如下步骤 (1)外植体表面消毒及无菌苗培养
以金边弧叶龙舌兰珠芽苗为材料，将外层老叶剥离，流水冲洗，用O. 3%高锰酸钾溶液处理2(T40 min，然后在超净工作台上用75%酒精处理广2 min，再用O. 1%氯化汞溶液处理1(T30 min,最后用无菌水冲洗3_5次，晾干后纵切，接种于HS基本培养基上诱导无菌苗，所述的HS基本培养基为硝酸钾2500mg/L，磷酸二氢铵300 mg/L，二水氯化钙200 mg/L，七水硫酸镁400 mg/L,—水硫酸猛10 mg/L,七水硫酸锌I mg/L,硼酸5 mg/L,碘化钾I mg/L, 二水钥酸钠O.1 mg/L,五水硫酸铜O. 2 mg/L,六水氯化钴O.1 mg/L,七水硫酸铁27. 8 mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3 mg/L,盐酸硫胺素O. 5 mg/L,盐酸卩比B多醇O. 5 mg/L,烟酸O. 5 mg/LJiWflOO mg/L，甘氨酸2 mg/L, 6-苄氨基腺嘌呤6-BA 2. 0-5. O mg/L，培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/L，卡拉胶浓度为8 g/L ;培养条件光照12 h，暗培养12 h，光照强度为 1500-2000 Lux，培养温度为 26 ±2 °C ；
(2)愈伤组织的诱导
取步骤(I)培养的无菌苗茎尖，纵切后接种于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导，愈伤组织诱导培养基为MS基本培养基，添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA和萘乙酸NAA ；6-苄氨基腺嘌呤6-BA的浓度为1. 0-3. O mg/L，萘乙酸NAA的浓度为O. 1-1. O mg/L ;培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/ L，卡拉胶浓度为8 g/ L ;培养条件为黑暗24h，温度 26±2 V ；
(3)愈伤组织继代培养
将步骤(2)诱导的愈伤组织接种在愈伤组织继代培养基中进行继代培养，继代培养基为MS基本培养基，添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA、萘乙酸NAA和吲哚3 丁酸IBA ；其中 6-BA 的浓度为1. 0-5. O mg/L ； NAA 的浓度为 O. 01-1. O mg/L, IBA 的浓度为 O. 01-1. Omg/L ;培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/L，卡拉胶浓度为8 g/L ;继代培养条件为光照12 h，黑暗12 h，光照强度1000 lux，温度26 ±2 V ;
(4)不定芽诱导
将步骤(3)培养的浅黄绿色愈伤组织接种到不定芽诱导培养基中进行不定芽诱导，不定芽诱导培养基为HSl基本培养基，添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA、萘乙酸NAA和叼丨哚3 丁酸IBA ;其中6-BA的浓度为1. 0-5. O mg/L ；NAA的浓度为O. 01-1. O mg/L, IBA的浓度为0.01-1.O mg/L，培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/Ι，卡拉胶浓度为8 g/Ι ;所述的HSl基本培养基为硝酸钾2250 mg/L，磷酸二氢钾400 mg/L，硫酸铵150 mg/L，二水氯化钙400 mg/L，七水硫酸镁400 mg/L，一水硫酸锰10 mg/L，七水硫酸锌5 mg/L，硼酸5mg/L,碘化钾I mg/L, 二水钥酸钠O.1 mg/L,五水硫酸铜O. 2 mg/L,六水氯化钴O.1 mg/L,七水硫酸铁27. 8 mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3 mg/L,盐酸硫胺素O. 5 mg/L,盐酸吡哆醇O. 5 mg/L,烟酸O. 5 mg/L,肌醇100 mg/L,甘氨酸2 mg/L ;培养条件为光照12 h,黑暗12h，光照强度为1000 lux，温度26±2°C ；
(5)继代和生根培养
待步骤(4)培养的不定芽成苗后转接到继代培养基中进行继代培养，继代培养所用培养基为HS基本培养基，添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA、萘乙酸NAA和吲哚3 丁酸IBA ;其中6-BA的浓度为1. 0-5. O mg/L ；NAA的浓度为O. 01-1. O mg/L, IBA的浓度为O. 01-1. O mg/L ;待继代培养的再生植株长到5-8cm时转入生根培养基中进行生根培养，生根培养所用培养基为不加激素的MS基本培养基。继代和生根培养所用培养基的pH值为5.8，蔗糖浓度为30 g/ Ι，卡拉胶浓度为8 g/Ι。培养条件为光照12h，黑暗12h，光照强度为1500 lux，温度26±2°C ;所述的HS基本培养基为硝酸钾2500mg/L，磷酸二氢铵300 mg/L, 二水氯化钙200 mg/L,七水硫酸镁400 mg/L, 一水硫酸锰10 mg/L,七水硫酸锌I mg/L，硼酸5 mg/L,碘化钾I mg/L, 二水钥酸钠O.1 mg/L,五水硫酸铜O. 2 mg/L,六水氯化钴O.1mg/L,七水硫酸铁27. 8 mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3 mg/L,盐酸硫胺素O. 5 mg/L,盐酸批口多醇 O. 5 mg/L,烟酸 O. 5 mg/L,肌酉享 100 mg/L,甘氨酸 2 mg/L ；
(6)再生植株移栽
待再生植株生根4周，长出4-8条壮根时，将其置于自然条件下炼苗I周，然后将其移出，洗净基部残留的培养基，用3%高锰酸钾浸泡l_3min后移植到基质为火烧土、椰糠和河沙的塑料遮光大棚中，大棚遮光度75%，每天早晚各浇透水I次，再生植株的成活率在90%以上。实施例1
2011年6月14日，从中国热带农业科学院南亚热带作物研究所剑麻种质圃取5株金边弧叶龙舌兰珠芽苗，经过O. 1%的升汞消毒15分钟后，用无菌水洗三次，接种于HS+ 6-苄氨基腺嘌呤6-BA 5.0 mg/ L的培养基上，每4周继代一次，24周后获得金边弧叶龙舌兰无菌苗238株。实施例2
2012年3月14日，取实施例1中的无菌苗15株，取茎尖纵切后连同未成熟叶片一起接种于MS+6-BA 2.0 mg/ L +NAA 1.0 mg/ L培养基中暗培养，2周后将茎尖外层未成熟叶片剥离，将茎尖接种于MS+6-BA 2.0 mg/ L +NAA 1.0 mg/ L培养基中继续暗培养，4周后愈伤组织诱导率为 93. 33%，将愈伤组织在MS+6-BA 2. O mg/ L +NAA O.1 mg/ L +IBA O.1 mg/ L培养基中继代一次后取30块黄豆大小的愈伤组织转入HS1+6-BA 5.0 mg/ L +NAA O.1 mg/L +IBA O.1 mg/ L培养基，4周后观察统计不定芽为283株，不定芽诱导率为100%。实施例3
2012年4月9日，取实施例1中的无菌苗10株，取茎尖纵切后接种于MS+6-BA 2. Omg/ L +NAA 0.2 mg/ L培养基中暗培养，4周后观察统计愈伤组织诱导率为86. 67%，将愈伤组织转于MS+6-BA 2.0 mg/ L +NAA O.1 mg/ L +IBA O.1 mg/ L培养基中培养4周后，取20块黄豆大小的愈伤组织转入HS1+6-BA 3. O mg/ L +NAA O. 5 mg/ L +IBA O. 5 mg/ L培养基，4周后观察统计不定芽为190株，不定芽诱导率为90. 0%。实施例4
2012年4月9日，取实施例1中的无菌苗10株，取茎尖纵切后连同未成熟叶片接种于MS+6-BA 2.0 mg/ L +NAA 0.5 mg/ L培养基中暗培养，4周后将茎尖外层未成熟叶片剥离，将茎尖接种于MS+6-BA 2.0 mg/1+NM 0.5 mg/Ι培养基中继续暗培养，4周后观察统计愈伤组织诱导率为 90. 0%，将愈伤组织转于MS+6-BA 2.0 mg/ L +NAA O.1 mg/ L +IBA O.1 mg/L培养基中培养2周后取20个黄豆大小的愈伤组织转入HS1+6-BA 3.0 mg/ L +NAA 0.5mg/ L +IBA O.1 mg/ L培养基，4周后观察统计不定芽为173株，不定芽诱导率为90. 0%。实施例5
2012年5月8日，取实施例1中的无菌苗10株，取茎尖纵切后接种于MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/ L培养基中暗培养，4周后观察统计愈伤组织诱导率为60. 0%，将愈伤组织转于 MS+6-BA 2. O mg/ L +NAA O.1 mg/ L +IBA O.1 mg/ L 培养基中培养 2 周后取 20 个黄豆大小的愈伤组织转入HS1+6-BA 1.0 mg/ L +NAA O. 5 mg/ L +IBA 1.0 mg/ L培养基，4周后统计不定芽为154株，不定芽诱导率为80. 0%。
实施例6
2012年6月4日，取实施例1中的无菌苗10株，取茎尖纵切后连同未成熟叶片接种于MS+6-BA 1.0 mg/ L +NAA 1.0 mg/ L培养基中暗培养，4周后将茎尖外层叶片剥离，将茎尖接种于MS+6-BA 1.0 mg/ L +NAA 1.0 mg/ L培养基中继续暗培养，4周后观察统计愈伤组织诱导率为 70. 0%，将愈伤组织转于MS+6-BA 2. O mg/ L +NAA O.1 mg/ L +IBA O.1 mg/ L培养基中培养4周后取20个黄豆大小的愈伤组织转入HS1+6-BA 1.0 mg/ L +NAA 1.0 mg/L +IBA O.1 mg/ L，4周后统计不定芽为186株，不定芽诱导率为85. 0%.
权利要求
1.一种金边弧叶龙舌兰离体培养及再生体系建立的方法，其特征在于包括如下步骤(1)外植体表面消毒及无菌苗培养以金边弧叶龙舌兰珠芽苗为材料，将外层老叶剥离，流水冲洗，用O. 3%高锰酸钾溶液处理2(T40 min，然后在超净工作台上用75%酒精处理广2 min，再用O. 1%氯化汞溶液处理 15^30 min，最后用无菌水冲洗3-5次，晾干后纵切，接种于HS基本培养基上诱导无菌苗；培养条件为光照12 h，暗培养12 h，光照强度为1500-2000 Lux，培养温度为26±2 °C ;所述的HS基本培养基为硝酸钾2500 mg/L，磷酸二氢铵300 mg/L，二水氯化钙200 mg/L，七水硫酸镁400 mg/L,—水硫酸猛10 mg/L,七水硫酸锌I mg/L,硼酸5 mg/L,碘化钾I mg/L, 二水钥酸钠O.1 mg/L,五水硫酸铜O. 2 mg/L,六水氯化钴O.1 mg/L,七水硫酸铁27. 8 mg/L, 乙二胺四乙酸二钠37. 3 mg/L,盐酸硫胺素O. 5 mg/L,盐酸卩比B多O. 5 mg/L,烟酸O. 5 mg/ LJiWflOO mg/L，甘氨酸2 mg/L, 6-苄氨基腺嘌呤6-BA 2. 0-5. O mg/L，HS培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/L，卡拉胶浓度为8 g/L ；(2)愈伤组织的诱导取步骤(I)培养的无菌苗茎尖，纵切后置于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导， 愈伤组织诱导培养基为MS基本培养基，添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA和萘乙酸 NAA ;其中6-苄氨基腺嘌呤6-BA的浓度为1. 0-3. O mg/L，萘乙酸NAA的浓度为O. 1-1. O mg/ L ;培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/ L，卡拉胶浓度为8 g/ L ;培养条件为黑暗24 h，温度 26±2 V ；(3)愈伤组织继代培养将步骤(2)诱导的愈伤组织接种在愈伤组织继代培养基中进行继代培养，继代培养基为MS基本培养基，MS基本培养基添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA、萘乙酸NAA和吲哚3 丁酸IBA ;其中6-BA的浓度为1. 0-5. O mg/L ； NAA的浓度为O. 01-1. O mg/L, IBA的浓度为O. 01-1. O mg/L ;培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/L，卡拉胶浓度为8 g/L ;继代培养条件为光照12 h，黑暗12 h，光照强度1000 lux，温度26±2 V ；(4)不定芽诱导将步骤(3)得到的浅黄绿色愈伤组织转接到不定芽诱导培养基中进行不定芽诱导，不定芽诱导培养基为HSl基本培养基，培养基添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA、萘乙酸 NAA和吲哚3 丁酸IBA ;其中6-BA的浓度为1. 0-5. O mg/L ；NAA的浓度为O. 01-1. O mg/L, IBA的浓度O. 01-1. O mg/L，培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/Ι，卡拉胶浓度为8 g/ L ;光照12h，黑暗12h，光照强度为1000 lux，温26±2°C ;所述的HSl基本培养基为 硝酸钾2250 mg/L,磷酸二氢钾400 mg/L,硫酸铵150 mg/L, 二水氯化|丐400 mg/L,七水硫酸镁400 mg/L,—水硫酸猛10 mg/L,七水硫酸锌5 mg/L,硼酸5 mg/L,碘化钾I mg/L, 二水钥酸钠O.1 mg/L,五水硫酸铜O. 2 mg/L,六水氯化钴O.1 mg/L,七水硫酸铁27. 8 mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3 mg/L,盐酸硫胺素O. 5 mg/L,盐酸卩比B多醇O. 5 mg/L,烟酸O. 5 mg/L, 肌醇100 mg/L,甘氨酸2 mg/L ；(5)继代和生根培养待步骤(4)得到的不定芽成苗后转接到继代培养基中进行继代培养，继代培养所用培养基为HS基本培养基，添加外源激素为6-苄氨基腺嘌呤6-BA、萘乙酸NAA和吲哚3 丁酸IBA ;其中6-BA的浓度为1. 0-5. O mg/L ；NAA的浓度为O. 01-1. O mg/L, IBA的浓度为·O.01-1. O mg/L ;待继代培养的再生植株长到5-8cm时转入生根培养基中进行生根培养， 生根培养所用培养基为不加激素的MS基本培养基，培养基的pH值为5. 8，蔗糖浓度为30 g/ L，卡拉胶浓度为8 g/ L ;培养条件为光照12h，黑暗·12h，光照强度为1500 lux，温度 26±2°C;所述的HS基本培养基为硝酸钾2500mg/L，磷酸二氢铵300 mg/L，二水氯化·钙200 mg/L,七水硫酸镁400 mg/L,—水硫酸猛10 mg/L,七水硫酸锌I mg/L,硼酸5 mg/L,碘化钾I mg/L, 二水钥酸钠·O.1 mg/L,五水硫酸铜O. 2 mg/L,六水氯化钴O.1 mg/L,七水硫酸铁 27. 8 mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3 mg/L,盐酸硫胺素O. 5 mg/L,盐酸批P多醇O. 5 mg/L,烟酸 O. 5 mg/L,肌醇 100 mg/L,甘氨酸 2 mg/L ；(6)再生植株移栽待再生植株生根4周，长出4-8条壮根时，将其置于自然条件下炼苗I周，然后将其移出，洗净基部残留的培养基，用3%高锰酸钾浸泡l_3min后移植到基质为火烧土、椰糠和河沙的塑料遮光大棚中，大棚遮光度75%，每天早晚各浇透水I次，再生植株的成活率在90%以上。
2.根据权利要求1所述的一种金边弧叶龙舌兰离体培养及再生体系建立的方法，其特征在于步骤(I)所述的金边弧叶龙舌兰珠芽苗的大小为10-20 cm。
3.根据权利要求1所述的一种金边弧叶龙舌兰离体培养及再生体系建立的方法，其特征在于步骤(6)所述的基质火烧土 椰糠河沙的比例为2 1 :1。
全文摘要
本发明涉及一种金边弧叶龙舌兰离体培养及再生体系建立的方法，包括以下步骤(1)无菌苗培养以珠芽苗茎尖为外植体，消毒后接种于丛芽诱导培养基上诱导无菌苗；(2)愈伤组织诱导以无菌苗茎尖为外植体，纵切后接种在愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导；(3)愈伤组织继代培养将诱导的愈伤组织转入继代培养基中进行愈伤组织继代培养；(4)不定芽诱导及植株再生将继代培养获得的块状或球状愈伤组织接种到不定芽诱导培养基上进行不定芽诱导和植株再生；(5)继代培养和生根将再生植株转入继代培养基中进行继代培养，成苗后生根；(6)再生植株移栽；本方法简单，为金边弧叶龙舌兰的离体快繁和遗传改良打下了良好的基础。
文档编号A01H4/00GK103039370SQ20131003332
公开日2013年4月17日 申请日期2013年1月29日 优先权日2013年1月29日
发明者张燕梅, 周文钊, 李俊峰, 陆军迎, 林映雪 申请人:中国热带农业科学院南亚热带作物研究所