专利名称：一种防止牡丹组培苗褐化以及玻璃化的方法
技术领域：
本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种防止牡丹组培苗褐化以及玻璃化的方法。
背景技术：
牡丹suffruticosa Andr.)广泛分布于我国，作为我国原生的、古老的特有植物是研究栽培植物起源、人工选择理论，进行科学试验的良好材料。牡丹品种繁多，花色甚丰，至今已有红、白、粉、黄、紫、蓝、绿、黑及复色等9大色系1100多个品种，以及单瓣型、荷花型、菊花型、蔷薇型、托桂型、绣球型、皇冠型、金环型、千层台阁型、楼子台阁型等十种花型。因其栽培品种繁多，适宜温室周年栽培，所以在我国花卉市场占有重要地位。牡丹传统的繁殖方法有有性繁殖中的种子繁殖，无性繁殖中的分株、压条、嫁接繁殖等。但是这些繁殖方法受着各种因素的影响，由于多数品种结实率低甚至不结实，且种子发育不良，用种子繁殖难以获得优良植株；而无性繁殖受生长季节的限制、繁殖系数小、形不成规模，无法满足市场的需求。近年来我国牡丹的栽培面积越来越大，随之而来的是如何提高牡丹的人工培养成活率。传统的繁殖方法生产周期长，生产成本高，同时易导致牡丹感染病毒，种性下降。为了实现牡丹种植的规模化、工厂化，降低生产成本，组织培养是一条有效的途径。作为一种行之有效的方法，组织培养在牡丹繁殖生产中尚未得到应用，有许多问题需要进一步研究解决，其中褐化以及玻璃化就是其中最主要的问题。褐化是植物材料受伤后，体内释放的多酚类物质在多酚氧化酶的作用下被氧化成褐色的醌类物质的结果。而玻璃化是组织培养过程中由于各种因素的影响会导致试管内丛生苗生理障碍出现嫩绿透明现象，愈伤组织出现鲜绿水溃状，玻璃化的牡丹组培苗无法增殖和移栽成活。因此，要使牡丹组培能够更好地运用到我们的实际生产`中，玻璃化以及褐化也是我们必须要克服的技术难题。目前，在牡丹组培的过程中通常使用恒温培养。且在组培的过程中常常使用活性炭、PVP、硝酸银、维生素C等防褐化剂，来避免组培苗的褐化，但是防褐化剂需要一定的费用，且使用防褐化剂会对组培苗造成一定的副作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种防止牡丹组培苗褐化以及玻璃化的方法，能够良好的解决牡丹苗在组织培养过程中褐化以及玻璃化的问题。本发明所采取的技术方案是:一种防止牡丹组培苗褐化以及玻璃化的方法，包括以下步骤:
A、在每年的11月底到12月初选取长势良好的牡丹土芽，备用；
B、对牡丹土芽进行处理:用手将步骤A中的牡丹土芽及相连枝条的外面一层表皮剥除，在剥除的同时确保牡丹土芽的生长活力；C、在超净工作台内对牡丹土芽进行消毒:用质量浓度为75%的酒精对步骤B中的牡丹土芽消毒2(T30s，然后用质量浓度为0.1 %的升汞消毒15 min，用无菌水冲洗5飞次，最后用吸水纸吸干牡丹土芽上的水；
D、在超净工作台内对牡丹土芽进行接种:左手捏住枝条的末端，右手拿镊子，用镊子将牡丹土芽外面的鳞片剥除干净，之后将牡丹土芽内的嫩芽用无菌剪刀剪下，再将其接入生长培养基内；
E、将接种后的牡丹土芽放于组培架中进行培养，白天组培架内的光照强度为5000-6000 Lx，夜间关闭灯光，白天温度为20-24°C，夜间温度为14_16°C，日平均温度为20°C的变温条件下培养。所述的生长培养基配方为加有MS、0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA的培养基。
本发明的有益效果包括以下几个方面:
1、本发明通过将温度控制在白天温度为20-24°C，夜间温度为14-16°C，日平均温度为20°C的变温条件下培养，与恒温培养相比，大大降低了牡丹组培过程中玻璃化现象的发生。2、因为是芽龄早期取样，所以在一系列的消毒过程中比较便捷，简化了步骤，从而在处理芽的过程中，芽的受伤程度较小，这样在培养组培苗的过程中大大的降低了褐化率。3、本发明对牡丹土芽的取样时间进行了严格的限制，即在每年的11月底到12月初进行取样，本阶段取的土芽是刚刚形成不久的新芽，新生芽被外面的鳞片紧紧包裹，芽内部干净，抗菌能力比芽龄大的强，污染率较低。4、本发明没有用任何防褐化剂，因此降低了组培的费用；同时避免了使用活性炭、PVP、硝酸银、维生素C等防褐化剂对组培苗的不良影响。
具体实施例方式下面对本发明的实施例做详细说明:本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。一种防止牡丹组培苗褐化以及玻璃化的方法，包括以下步骤:
A、在12月2号选取长势良好的225棵牡丹土芽，备用；
B、对牡丹土芽进行处理:用手将步骤A中的牡丹土芽及相连枝条的外面一层表皮剥除，在剥除的同时确保牡丹土芽的生长活力；
C、在超净工作台内对牡丹土芽进行消毒:用质量浓度为75%的酒精对步骤B中的牡丹土芽消毒25s，然后用质量浓度为0.1 %的升汞消毒15 min，用无菌水冲洗5次,最后用吸水纸吸干牡丹土芽上的水；
D、在超净工作台内对牡丹土芽进行接种:左手捏住枝条的末端，右手拿镊子，用镊子将牡丹土芽外面的鳞片剥除干净，之后将牡丹土芽内的嫩芽用无菌剪刀剪下，再将其接入生长培养基内；
E、将接种后的牡丹土芽放于组培架中进行培养，白天组培架内的光照强度为5000-6000 Lx，夜间关闭灯光，白天温度为20-24°C，夜间温度为14_16°C，日平均温度为20°C的变温条件下培养。所述的生长培养基配方为加有MS、0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA的培养基。
实验结果:芽在培养基中长25天左右后，仅有2株有轻微褐化，其余表现生长正常，长势快，且无污染，无玻璃化现象，叶色为正常绿色，且株高大约Γ5 cm。实验结果表明:通过采用本发明，褐化率为0.89%，与前人牡丹组培褐化率的20%-30%相比，大大降低了褐化率。且无玻璃化现象发生。此发明可以运用在牡丹土芽组培的过程中，大大提高了接种的成功率，进而提高了工作效率，为大批组培工作提供了一个更好的条 件。
权利要求
1.一种防止牡丹组培苗褐化以及玻璃化的方法，其特征在于，包括以下步骤: A、在每年的11月底到12月初选取长势良好的牡丹土芽，备用； B、对牡丹土芽进行处理:用手将步骤A中的牡丹土芽及相连枝条的外面一层表皮剥除，在剥除的同时确保牡丹土芽的生长活力； C、在超净工作台内对牡丹土芽进行消毒:用质量浓度为75%的酒精对步骤B中的牡丹土芽消毒2(T30s，然后用质量浓度为0.1 %的升汞消毒15 min，用无菌水冲洗5飞次，最后用吸水纸吸干牡丹土芽上的水； D、在超净工作台内对牡丹土芽进行接种:左手捏住枝条的末端，右手拿镊子，用镊子将牡丹土芽外面的鳞片剥除干净，之后将牡丹土芽内的嫩芽用无菌剪刀剪下，再将其接入生长培养基内； E、将接种后的牡丹土芽放于组培架中进行培养，白天组培架内的光照强度为5000-6000 Lx，夜间关闭灯光，白天温度为20-24°C，夜间温度为14_16°C，日平均温度为20°C的变温条件下培养。
2.根据权利要求1所述的一种防止牡丹组培苗褐化以及玻璃化的方法，其特征在于:所述的生长培养基配方为加有MS、 0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA的培养基。
全文摘要
本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种防止牡丹组培苗褐化以及玻璃化的方法。其步骤包括选材、消毒前处理、在超净工作台内消毒、在超净工作台内接种以及组培架内培养。本发明通过将温度控制在白天温度为20-24℃，夜间温度为14-16℃，日平均温度为20℃的变温条件下培养，与恒温培养相比，大大降低了牡丹组培过程中玻璃化现象的发生。因为是芽龄早期取样，所以在一系列的消毒过程中比较便捷，简化了步骤，从而在处理芽的过程中，芽的受伤程度较小，这样在培养组培苗的过程中大大的降低了褐化率。本发明没有用任何防褐化剂，因此降低了组培的费用；同时避免了使用活性炭、PVP、硝酸银等防褐化剂对组培苗的不良影响。
文档编号A01H4/00GK103120128SQ20131006356
公开日2013年5月29日 申请日期2013年2月28日 优先权日2013年2月28日
发明者施江, 郭倩, 辛莉, 郭永新, 王小燕, 史国安 申请人:河南科技大学