一种铁皮石斛种胚的保存方法
【专利摘要】本发明涉及一种铁皮石斛种胚的保存方法，其特征在于包括以下步骤：1）将铁皮石斛果荚表面清理后置于超净工作台中紫外照射6～10min，然后将石斛果荚消毒5～8min；2）将铁皮石斛种胚在无菌状态下播种于无菌西林瓶中，将西林瓶瓶口封紧后对其用0.01～0.05%苯扎溴铵溶液浸泡消毒10～15min；3）用真空包装机对消毒后的西林瓶进行抽真空包装保存，抽真空时间为3～6s，保存条件为0～4℃保存。本发明解决了铁皮石斛果荚保质期短，原先组培受季节限制，其他季节只能通过继代增值进行生产的缺陷，本发明的保存方法工艺简单实用、操作方便，铁皮石斛种胚经长期保存后质量稳定可靠，种胚萌发率高，可适合铁皮石斛种子大规模的长期保存。
【专利说明】一种铁皮石斛种胚的保存方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物工程【技术领域】，具体涉及一种铁皮石斛种胚的保存方法。
【背景技术】
[0002]铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是传统珍稀名贵中药材,具有滋阴清热、生津益胃、消除肿瘤、提高人体免疫力等功效，具有很高的药用价值，其在《道藏》中被列为“中华九大仙草之首”。但其自然生长条件下生长缓慢，繁殖率极低，加之近年来的掠夺性采挖，野生资源已濒临灭绝。铁皮石斛已于1987年正式列为国家二级保护植物。由于铁皮石斛的市场需求量巨大，而目前野生资源远远难以满足市场的需要。二十世纪八十年代人们开始进行铁皮石斛的仿野生种植，但由于种苗繁育以及种植技术低下铁皮石斛繁育种植发展缓慢，直到近十年随着现代生物组培技术的发展以及科学的种植研究，全国建立起近百个现代植物组培工厂，铁皮石斛的种苗繁育与人工仿野生种植取得了飞速的发展。
[0003]铁皮石斛属于兰科植物，自然坐果率极低，铁皮石斛果荚十分宝贵。铁皮石斛一般五月下旬开始开花，十月份果荚成熟。成熟的果荚自然状态下会自行开裂。而开裂后的果荚在组培行业中很难去毒，部分人通过将果荚存放于冰箱中进行冷藏保存，但只能延长一个月左右的保质期。因为铁皮石斛果子的季节性导致现有组培工厂每年只有在10~12月的季节里才能依靠铁皮石斛果荚进行直接种子繁育，而除此季节外只能通过继代增值进行生产，这大大增加了组培成本，此外经过不断继代导致种质的退化难以保证产品的质量。因此石斛蒴果的有无已经成为制约石斛组培行业发展瓶颈。因此需要研发出一种铁皮石斛种胚的保存方法，可以将铁皮石斛种子进行大规模的长期保存，来满足铁皮石斛组培行业发展需要。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种铁皮石斛种胚的保存方法，工艺简单实用，技术稳定可靠，适合铁皮石斛种子大规模的长期保存。
[0005]本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种铁皮石斛种胚的保存方法，其特征在于包括以下步骤:
[0006]I)将铁皮石斛果荚表面清理后置于超净工作台中紫外照射6~lOmin，然后将铁皮石斛果荚用酒精消毒5~8min ；
[0007]2)将消毒后的铁皮石斛果荚剪开取铁皮石斛种胚，将铁皮石斛种胚在无菌状态下播种于无菌西林瓶中，将西林瓶瓶口封紧后对其用质量浓度0.01~0.05%苯扎溴铵溶液浸泡消毒10~15min ；
[0008]3)用真空包装机对消毒后的西林瓶进行抽真空包装保存，使其内气压在100~150pa内，保存条件为O~4°C保存。
[0009]作为优选，所述步骤I)中酒精的质量浓度为70~75%。[0010]最后，所述步骤2)中铁皮石斛果荚是采用无菌手术剪刀进行剪开，并用镊子将铁皮石斛种胚播种于无菌西林瓶中，每个西林瓶中播种铁皮石斛果荚3~5个。
[0011]与现有技术相比，本发明的优点在于:解决了铁皮石斛果荚保质期短，原先组培受季节限制，其他季节只能通过继代增值进行生产的缺陷，本发明的保存方法工艺简单实用、操作方便，铁皮石斛种胚经长期保存后质量稳定可靠，种胚萌发率高，可适合铁皮石斛种子大规模的长期保存。
【专利附图】
【附图说明】
[0012]图1是保存示意图之一；
[0013]图2是保存示意图之二 ；
【具体实施方式】
[0014]以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
[0015]实施例1:
[0016]种质材料为浙江乐清大荆铁皮石斛植株生长的果荚，将石斛果荚表面清理后置于超净工作台中紫外照射6min，然后将石斛果荚用70~75%酒精消毒5min。然后用无菌手术剪刀和镊子将铁皮石斛种胚在无菌状态下播种于无菌西林瓶中，每个西林瓶中播种铁皮石斛果荚3个。将西林瓶瓶口封紧后对其用0.01%苯扎溴铵溶液浸泡消毒lOmin。用真空包装机对消毒后的西林瓶进行抽真空包装保存，抽真空时间为3s，使其内气压在100~150pa内，保存条件为0°C保存。保存一年后，在无菌状态下将种胚转移到常规种子萌发培养基中检查萌发情况。培养基组成为:1/2MS培养基，添加0.5%琼脂粉，3.0%蔗糖，0.05%活性碳，PH5.8。培养I个月后种子萌发，萌发率为95.8%。
[0017]实施例2:
[0018]种质材料为广西容县铁皮石斛植株生成的果荚，将石斛果荚表面清理后置于超净工作台中紫外照射8min，然后将石斛果荚用70~75%酒精消毒6.5min。然后用无菌手术剪刀和镊子将铁皮石斛种胚在无菌状态下播种于无菌西林瓶中，每个西林瓶中播种铁皮石斛果荚4个。将西林瓶瓶口封紧后对其用0.02%苯扎溴铵溶液浸泡消毒12min。用真空包装机对消毒后的西林瓶进行抽真空包装保存，抽真空时间为4.5s，使其内气压在100~150pa内，保存条件为2°C保存。保存两年后，在无菌状态下将种胚转移到常规种子萌发培养基中检查萌发情况。培养基组成为:1/2MS培养基，添加0.5%琼脂粉，3.0%蔗糖，0.05%活性碳，PH5.8。培养I个月后种子萌发，萌发率为95.1%。
[0019]实施例3:
[0020]种质材料为广东韶关铁皮石斛植株生成的果荚，将石斛果荚表面清理后置于超净工作台中紫外照射lOmin，然后将石斛果荚用70~75%酒精消毒8min。然后用无菌手术剪刀和镊子将铁皮石斛种胚在无菌状态下播种于无菌西林瓶中，每个西林瓶中播种铁皮石斛果荚5个。将西林瓶瓶口封紧后对其用0.05%苯扎溴铵溶液浸泡消毒15min。用真空包装机对消毒后的西林瓶进行抽真空包装保存，抽真空时间为6s，使其内气压在100~150pa内，保存条件为2°C保存。保存三年后，在无菌状态下将种胚转移到常规种子萌发培养基中检查萌发情况。培养基组成为:1/2MS培养基，添加0.5%琼脂粉，3.0%蔗糖，0.05%活性碳，PH5.8。培养I个月后种子萌发，萌发率为96.2%。
【权利要求】
1.一种铁皮石斛种胚的保存方法，其特征在于:包括以下步骤: 1)将铁皮石斛果荚表面清理后置于超净工作台中紫外照射6~lOmin，然后将铁皮石斛果荚用酒精消毒5~8min ； 2)将消毒后的铁皮石斛果荚剪开取铁皮石斛种胚，将铁皮石斛种胚在无菌状态下播种于无菌西林瓶中，将西林瓶瓶口封紧后对其用质量浓度0.01~0.05%苯扎溴铵溶液浸泡消毒 10 ~15min ； 3)用真空包装机对消毒后的西林瓶进行抽真空包装保存，使其内气压在100~150pa内，保存条件为O~4°C保存。
2.根据权利要求1所述的保存方法，其特征在于:所述步骤I)中酒精的质量浓度为70 ~75%。
3.根据权利要求1所述的保存方法，其特征在于:所述步骤2)中铁皮石斛果荚是采用无菌手术剪刀进行剪开，并用镊子将铁皮石斛种胚播种于无菌西林瓶中，每个西林瓶中播种铁皮石斛果荚3~5 个。
【文档编号】A01N3/00GK104026120SQ201310070585
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2013年3月6日 优先权日:2013年3月6日
【发明者】何心展, 李振达, 黄飞 申请人:宁波洛祥生物技术有限公司, 宁波洛祥药业有限公司