专利名称：沙塘鳢控温流水孵化方法
技术领域：
本发明属于鱼类受精卵孵化技术领域，具体涉及一种沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法。
背景技术：
沙塘鳢(拉丁文:Odon tobutis obscurus ),属鱼卢形目，塘鳢科,沙塘鳢属。俗称:乌草包、草婆鱼、土布鱼、塘鳢、土才鱼和土憨巴等等。在我国主要分布于长江中下游及其支流、钱塘江水系和闽江水系等广大地区。沙塘鳢个体虽小，但其具有含肉量高、少刺、肉质细嫩可口和营养丰富的特点。每百克沙塘鳢肉含蛋白质18.39g、脂肪0.98g、钙0.42g以及含有磷铁和维生素等。沙塘鳢肉所含的人体必需的氨基酸和鲜味氨基酸均高于一般鱼类，有滋补、益筋骨和肠胃以及治痔疮等功效，妊娠期和产妇多食具有良好的保健作用，因而历来为长江中、下游及南方诸省群众所喜爱，是一种名贵的经济鱼类。沙塘鳢喜生活于河沟及湖泊近岸多水草、瓦砾、石隙、破瓦罐和泥沙的底层，游泳力弱，以虾和小鱼为主要食物。一龄鱼即达性成熟，3月下旬至6月初为产卵季节，卵粘性，常粘附于蛘壳、瓦片或石块上。雄鱼有守巢护卵习性，直至仔鱼孵出。近年来，由于野生鱼类资源的快速衰减，沙塘鳢捕获量锐减，因此市场价格高达50 60元/kg (RMB),并且鱼源紧张而并不能满足人们的需求。
如业界所知之理，利用价格杠杆这一调节手段对日益减少的沙塘鳢资源实施救济客观上与事无补，只能算是一种消极应对的权宜之计，最终导致沙塘鳢趋附于向枯竭。因此，人工繁殖沙塘鳢才是目前水产业界公认的并且企盼的积极应对之策，因为，一可拯救频频减少的沙塘鳢资源；二可满足人民群众的需求。人工繁殖沙塘鳢的技术信息可以公开的中国专利文献中见诸，典型的如CN100396177C介绍的“沙塘鳢人工繁殖方法及其孵化装置”，该专利方法所包含的步骤依次为:“亲鱼培育、诱导同步产卵与授精、人工孵化和鱼苗培育”，具体可参见该专利的说明书第2页第2行至第16行。应该说该专利技术方案能够体现说明书第2页第22行至第3页第3行所述的长处。但是客观上仍存在以下缺憾:如前述，沙塘鳢的卵为粘性，并且常粘附于蛘壳、瓦片或石块之类的载体上，而粘性物质(粘液)极易出现霉烂，从而殃及受精卵乃至殃及周围的健康的受精卵。尤其是，当沙塘鳢产卵于前述载体上时，通常会出现重叠乃至堆积的情形，从而更易产生霉烂，影响孵化率。因此专利所称的孵化率达85%是有商榷余地的。周知之理，孵化率是鱼苗成苗率的前提条件，也就是说，只有提高孵化率，鱼苗的成苗率才有保障，然而在已公开的专利和非专利文献中，均未见诸有如何提高沙塘鳢的孵化率的技术启示，为此本申请人进行了长期的探索与尝试，找到了解决问题的办法，下面将要介绍的技术方案便是在这种背景下产生的
发明内容
本发明的任务在于提供一种沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，该方法能有效地避免受精卵霉烂而藉以显著提高孵化率并且该方法操作简便和适用性广而能满足产业化养殖要求。本发明的任务是这样来完成的，一种沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，包括以下步骤:
A)受精卵获取；人工授精法或自然产卵法得到沙塘鳢受精卵，并且对人工授精法得到的沙塘鳢受精卵进行脱粘，所述自然产卵法得到沙塘鳢受精卵是使用工具直接从附着物上取下由沙塘鳢自然产下的沙塘鳢受精卵块；
B)孵化，提取少量沙塘鳢受精卵在显微镜下观察，以确定受精卵的发育期，对原肠胚前期孵化采用静水换水法孵化或流水曝气法孵化，并且控制原肠胚前期孵化的水温，对原肠胚后期孵化采用上流式流水孵化，并且控制原肠胚后期孵化的水温，直至受精卵脱膜孵出沙塘鳢仔鱼，所述孵化所用的容器为孵化桶；
C)收集沙塘鳢仔鱼，用目数为60目的絹布制成的集苗箱带水操作而收集沙塘鳢仔鱼；
D)沙塘鳢仔鱼培育，待仔鱼出现鳔点时将其弓I入鱼苗培育池中进行鱼苗培育，得到沙塘鳢夏花苗种。在本发明的一个具体的实施例中，步骤A)中所述的人工授精法得到沙塘鳢受精卵的过程是:杀性腺成熟的雄性沙塘鳢取其精巢，并且将所取的精巢在生理盐水中剪碎而得到成熟的精子，以挤卵法将性腺成熟的雌性沙塘鳢的卵子挤出，得到成熟的卵子，将精子与卵子混合，得到人工授精卵；所述的自然产卵法得到沙塘鳢受精卵的过程是:将沙塘鳢雌雄亲鱼按比例放入同一养殖池中，由其自由交配并产卵于附着物上。
在本发明的另一个具体的实施例中，步骤A)中所述的脱粘是指先将所述人工授精法得到的所述沙塘鳢受精卵引入盛有脱粘液的容器中轻搅3-5min，而后用纱布过滤，所述的工具为小刀。在本发明的又一个具体的实施例中，所述的脱粘液由粉碎并且过筛的干粘土与水按重量比为20: 100构成。在本发明的再一个具体的实施例中，步骤B)中所述的确定受精卵的发育期是指确定受精卵已受精并完成受精卵细胞分裂、已完成囊胚阶段并且胚胎发育正常。在本发明的还有一个具体的实施例中，步骤B)中所述的控制原肠胚前期孵化的水温是将水温控制为20-21°C ;所述的控制原肠胚后期孵化的水温是将水温控制为27-28°C。在本发明的更而一个具体的实施例中，步骤B)中所述的上流式流水孵化是指对孵化容器采用下进水上溢水的方式孵化；所述的静水换水法孵化是将受精卵放入容器中，控制水位15-20cm,每天换水2次,早上I次、下午I次,换水时水温一致,换水量为80% ;所述的流水曝气法孵化是将受精卵放入容器中24小时循环流水，控制水位15-20cm，并保持24小时对容器中的水体进行充气增氧，充气量以水面上有少量小气泡为准。在本发明的进而一个具体的实施例中，所述的生理盐水的质量百分比浓度为0.7-0.8%。本发明提供的技术方案不仅解决了沙塘鳢受精卵易霉烂的技术问题，而且能缩短沙塘鳢受精卵的孵化时间，提高沙塘鳢受精卵孵化率(70%以上);方法具有操作简便而不苛刻并且适用性广而能满足产业化批量繁殖要求；由于人工授精法得到的受精卵的正常孵化时间长，易出现霉菌感染而发生霉烂，因而本发明对原肠胚前、后期孵化的水温进行控制，从而能抑制霉菌繁殖并快速分解坏卵，避免霉烂蔓延并且缩短孵化时间。
具体实施例方式为了使专利局的审查员尤其是公众能更好地理解本发明的技术实质和全面地运用本发明的技术方案，申请人将结合下面给出的实施例作更为详细的说明，但实施例并不是对本发明方案的限制，任何依据本发明方案而作出的仅仅为形式而非实质性的变化，则均应视为未脱离本发明的保护范围。实施例1:
A)受精卵获取；自然产卵法得到沙塘鳢受精卵，具体是使用小刀片直接从附着物上将卵块剥离取下，自然产卵法得到沙塘鳢受精卵的过程是:将沙塘鳢雌雄亲鱼按比例(雌雄比为2: I)放入同一养殖池中，由 其自由交配并产卵于附着物上，附着物如置于养殖池中的蛘壳、瓦片和石块等等，得到沙塘鳢受精卵；
B)孵化，取少量沙塘鳢受精卵置于显微镜下观察，以确定受精卵的发育期或称发育程度，这里所讲的确定受精卵的发育期是指确定受精卵已受精并且完成受精卵细胞分裂、已完成囊胚阶段并且胚胎发育正常，对于原肠胚前期孵化采用静水换水法孵化或流水曝气法孵化，并且控制原肠胚前期孵化的水温为20°C，对原肠胚后期孵化采用下进水上溢水的方式孵化，并且将原肠胚后期孵化的水温控制为28°C，直至受精卵脱膜孵出沙塘鳢仔鱼，前述孵化所用的容器为孵化桶，前述的静水换水法孵化是将受精卵放入脚盆状的容器中，控制水位深度15-20 cm,每天换水两次,早上一次和下午一次，换水时水温一致，换水量为80%,前述的流水曝气法孵化是将受精卵放入脚盆状容器中24小时循环流水，控制水位深度15-20 Cm，并且保持24h对容器中的水体进行充气增氧，充气量以水面上出现少量小气泡为
且；
C)收集沙塘鳢仔鱼，用目数为60目的絹布制成的集苗箱带水操作而收集沙塘鳢仔鱼；D )沙塘鳢仔鱼培育，待仔鱼出现鳔点时将其引入鱼苗培育池中进行鱼苗培育，
得到沙塘鳢夏花苗种，由于鱼苗培育属于公知技术，例如可参见发明专利申请公布号CN101933477A,因此申请人不再赘述。实施例2:
A)受精卵获取；人工授精法得到沙塘鳢受精卵，人工授精方法是选择雌雄性腺同步成熟的亲鱼，先将雄亲鱼的腹部剖开，取出精巢，将精巢引入盛有质量百分比浓度为0.7%的5ml生理盐水的烧杯中(该5ml的生理盐水是针对一尾雄亲鱼的一对精巢的用量)，烧杯的容量为100ml，并且用剪子和镊子将精巢剪碎(撕碎)，再将精子置入显微镜下察看，以确认精子的活力(活动情况)，在确认获得较好的精子(活动精子占70%以上)后，再提取腹部饱满的雌性沙塘鳢亲鱼，轻轻按压雌鱼腹部挤出粘性卵子至前述的已盛有精子的烧杯中，并且一边挤一边摇动烧杯，使精卵结合，得到受精卵即得到人工授精的受精卵，并将该受精卵倒入由干粘土与水按重量比为20: 100构成的脱粘液中，用诸如鸡、鸭、鹅之类的家禽的羽毛轻轻搅动3-5min (3-5分钟)，而后用纱布过滤，收得到脱粘受精卵；
B)孵化，取少量受精卵在显微镜下观察，以确定其发育程度，原肠胚前期适当控制水温21°C并用静水换水法或流水曝气法孵化，原肠胚后期逐渐加温至27°C，并进行上流式流水孵化，孵化桶内受精卵的密度优选为15粒/ml，由于受精卵在孵化桶内处于悬浮状态，因此流水孵化采用底部进水而上部溢水，溢水口使用60目的窗纱网阻挡，以避免受精卵及刚孵出的仔鱼苗随水逃逸，在孵化过程中，孵化的温度是这样来控制的:在受精卵开始孵化时将孵化温度控制为21°C，而在3天后受精卵发育至原肠胚期将温度控制为27V，经16d (16天)后，仔鱼苗孵化出膜，即得到沙塘鳢仔鱼苗也即沙塘鳢鱼苗，孵化率达70% ；
C)收集沙塘鳢仔鱼，用目数为60目的絹布制成集苗箱放入集苗池中，保证集苗网箱中水体不少于箱体的I / 4，带水操作收集孵出的沙塘鳢仔鱼；
D)沙塘鳢仔鱼苗培育，待由步骤C)得到的沙塘鳢仔鱼苗出现鳔点时将其转移至鱼苗培育池中按已有技术中普遍使用的鱼苗培育方式进行培育，得到沙塘鳢夏花种苗。本实施例中未涉及的内容如静水换水法以及流水曝气法孵化同对实施例1的描述。实施例3:
仅将步骤A)中的生理盐水的质量百分比浓度改为0.8%，生理盐水的量改为8ml (针对一尾雄亲鱼的一对精巢的用量)；将用羽毛轻搅的时间改为3min ;将步骤B)中的孵化桶内的受精卵的密度改为20粒/ml，将受精卵开始孵化时的孵化温度改为20°C，而在3天后受精卵发育至原肠胚期的温度改为28°C，孵化时间改为15d (15天)，孵化率为71%。其余均同对实施例2的描述。实施例4:
仅将步骤A)受精卵由自然产卵法得到，即将雌雄亲鱼按雌:雄=2:1比例放入同一养殖池中，让其自已交配产卵，每天检查产卵附着物(河蛘壳)，发现有卵块及时取出，自然产卵法中用小刀片直接从附着物(河蛘 壳)上将卵块剥离取下；步骤B)取少量受精卵在显微镜下观察，确定其发育阶段，原肠胚前期适当控制水温21°C并用静水换水法或流水曝气法孵化，原肠胚后期逐渐加温至27°C，并进行上流式流水孵化，孵化时间为16d (16天)，孵化率为73%。其余均同对实施例1的描述。
权利要求
1.一种沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，其特征在于包括以下步骤: A)受精卵获取；人工授精法或自然产卵法得到沙塘鳢受精卵，并且对人工授精法得到的沙塘鳢受精卵进行脱粘，所述自然产卵法得到沙塘鳢受精卵是使用工具直接从附着物上取下由沙塘鳢自然产下的沙塘鳢受精卵块； B)孵化，提取少量沙塘鳢受精卵在显微镜下观察，以确定受精卵的发育期，对原肠胚前期孵化采用静水换水法孵化或流水曝气法孵化，并且控制原肠胚前期孵化的水温，对原肠胚后期孵化采用上流式流水孵化，并且控制原肠胚后期孵化的水温，直至受精卵脱膜孵出沙塘鳢仔鱼，所述孵化所用的容器为孵化桶； C)收集沙塘鳢仔鱼，用目数为60目的絹布制成的集苗箱带水操作而收集沙塘鳢仔鱼； D)沙塘鳢仔鱼培育，待仔鱼出现鳔点时将其引入鱼苗培育池中进行鱼苗培育，得到沙塘鳢夏花苗种。
2.根据权利要求1所述的沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，其特征在于步骤A)中所述的人工授精法得到沙塘鳢受精卵的过程是:杀性腺成熟的雄性沙塘鳢取其精巢，并且将所取的精巢在生理盐水中剪碎而得到成熟的精子，以挤卵法将性腺成熟的雌性沙塘鳢的卵子挤出，得到成熟的卵子，将精子与卵子混合，得到人工授精卵；所述的自然产卵法得到沙塘鳢受精卵的过程是:将沙塘鳢雌雄亲鱼按比例放入同一养殖池中，由其自由交配并产卵于附着物上。
3.根据权利要求1所述的沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，其特征在于步骤A)中所述的脱粘是指先将所述人工授精法得到的所述沙塘鳢受精卵引入盛有脱粘液的容器中轻搅3-5min,而后用纱布过滤,所述的工具为小刀。
4.根据权利要求 3所述的沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，其特征在于所述的脱粘液由粉碎并且过筛的干粘土与水按重量比为20: 100构成。
5.根据权利要求1所述的沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，其特征在于步骤B)中所述的确定受精卵的发育期是指确定受精卵已受精并完成受精卵细胞分裂、已完成囊胚阶段并且胚胎发育正常。
6.根据权利要求1所述的沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，其特征在于步骤B)中所述的控制原肠胚前期孵化的水温是将水温控制为20-21°C ;所述的控制原肠胚后期孵化的水温是将水温控制为27-28°C。
7.根据权利要求1所述的沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，其特征在于步骤B)中所述的上流式流水孵化是指对孵化容器采用下进水上溢水的方式孵化；所述的静水换水法孵化是将受精卵放入容器中，控制水位15-20cm，每天换水2次，早上I次、下午I次，换水时水温一致，换水量为80% ;所述的流水曝气法孵化是将受精卵放入容器中24小时循环流水，控制水位15-20cm，并保持24小时对容器中的水体进行充气增氧，充气量以水面上有少量小气泡为准。
8.根据权利要求1所述的沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，其特征在于所述的生理盐水的质量百分比浓度为0.7-0.8%。
全文摘要
一种沙塘鳢受精卵控温流水孵化方法，属于鱼类受精卵孵化技术领域。步骤人工授精法或自然产卵法得到沙塘鳢受精卵，且对人工授精法得到的沙塘鳢受精卵进行脱粘，自然产卵法得到沙塘鳢受精卵是使用工具直接从附着物上取下由沙塘鳢自然产下的沙塘鳢受精卵块；提取少量沙塘鳢受精卵在显微镜下观察，以确定受精卵的发育期，对原肠胚前期孵化采用静水换水法孵化或流水曝气法孵化，对原肠胚后期孵化采用上流式流水孵化，直至受精卵脱膜孵出沙塘鳢仔鱼；用绢布制成的集苗箱带水操作而收集沙塘鳢仔鱼；待仔鱼出现鳔点时将其引入鱼苗培育池中，得到沙塘鳢夏花苗种。解决了沙塘鳢受精卵易霉烂的技术问题，缩短孵化时间，提高受精卵孵化率。
文档编号A01K61/00GK103202251SQ20131011843
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月8日 优先权日2013年4月8日
发明者徐建荣, 韩晓磊, 杨俊杰, 曹昆, 齐刚 申请人:常熟理工学院