一种黄芪试管苗培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种黄芪试管苗培养的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、腋芽的诱导、腋芽的增值、生根诱导，壮苗培养，寡糖素调控试管苗酶的活性及黄芪皂苷的含量等步骤，本发明方法所制备的黄芪试管苗含有较高含量的黄芪皂苷。本发明方法利用寡糖素对黄芪试管苗进行有目的的调控，可以在短期内获得大量次生代谢物含量高的黄芪试管苗，进行大规模的工业化生产，并能有效降低生产成本。
【专利说明】一种黄芪试管苗培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及组培条件下黄芪幼苗的培养，尤其是寡糖素对黄芪试管苗中黄芪皂苷的调控。
【背景技术】
[0002]黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，现代研究，黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种微量元素。具有降低血液黏稠度、减少血栓形成、降低血压、保护心脏、双向调节血糖、抗自由基损伤、抗衰老、抗缺氧、抗肿瘤、增强机体免疫力作用，可用来治疗心脏病、高血压、糖尿病等症。黄芪还能扩张血管，改善皮肤血液循环和营养状况，故对慢性溃疡久不愈合者有效。其还能消除肾炎患者的蛋白尿，保护肝脏，防止肝糖原减少,主要成分含黄酮、皂甙类成分。
[0003]黄芪皂苷
【权利要求】
1.一种黄芪试管苗培养的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、腋芽的诱导、腋芽的增值、生根诱导，壮苗培养，寡糖素调控试管苗酶的活性及黄芪皂苷的含量，其主要步骤如下: (1)按照植物组织培养常规消毒方法对野外采取的黄芪带芽茎段进行消毒处理，获得无菌的外植体； (2)将步骤(I)获得的无菌黄芪带芽茎段接种到芽诱导培养基中进行腋芽诱导，诱导出来萌发的腋芽接种入增值培养基中进行腋芽增值，增值培养3-4代，获得长势良好带有叶片的丛生芽； (3)将步骤(2)获得的丛生芽接种到附加激素0.2-1mg/L NAA和0.5-1.5 mg/L TDZ的DKW培养基中进行生根诱导培养，获得完整的黄芪试管苗，将其接入MS培养基中进行壮苗培养； (4)将步骤(3)获得的生长强壮的黄芪试管苗接种入DKW+0.5mg/LNAA+lmg/LTDZ+寡糖素2-6mg/L，培养一段时间取黄芪试管苗叶片，然后60°C烘干保存干样，微波提取黄芪皂苷，使用UV法检测黄芪皂苷的含量。
2.根据权利要求1的制备方法，其特征在于:步骤(I)中所述无菌的黄芪外植体叶片和芽按照下述方法得到:取黄芪叶片和芽，洗衣粉浸泡4分钟，流水冲洗50分钟，经次氯酸钠消毒处理10-12分钟，无菌水冲洗5遍，用吸水纸吸去无菌外植体表面的水分。
3.根据权利要求1的制备方法中，其特征在于:所述的培养条件为温度25°C，湿度50%-70%，光强度20001x ;光期14 h暗期10h。
4.根据权利要求1的制备方法中，其特征在于:步骤(4)中所述的黄芪皂苷提取方法为超声提取法，取黄芪干 样lg，研磨成粉，过80目筛，加入85%乙醇，用超声波提取lmin，每间隔2min超声提取lmin,共提取30min,滤过,85°C水浴加热回流Ih,于旋转蒸发仪上真空浓缩,加25ml乙醇定容至25ml。
5.根据权利要求1的制备方法中，其特征在于:步骤(4)中所述的黄芪皂苷检测方法为UV法，提取液1.00 mL加入试管中，再分别加入1.00 mL 8%香草醛试剂，置于冰浴中缓缓加入10.0mL体积分数为72%的硫酸，摇匀，放入70°C水浴中，保温25 min，取出置于室温冷却，摇匀，立即于波长542 nm处测定吸光度，测定3次求平均值。
【文档编号】A01H4/00GK103444538SQ201310410869
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年9月11日 优先权日:2013年9月11日
【发明者】苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司