一种诱导糖尿病的高脂饲料及其在制备糖尿病足溃疡大鼠实验模型中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种诱导糖尿病的高脂饲料，所述高脂饲料由以下重量百分比的组分组成：基础饲料73％，猪油20％，奶粉2％，胆固醇1％，蔗糖4％；所述基础饲料由以下重量百分比的组分组成：大麦15%，小麦31%，玉米15%，麸皮15%,鱼粉6%，豆粕、油和盐共18%。此外，本发明还公开了上述高脂饲料在制备糖尿病足溃疡大鼠实验模型中的应用。本发明高脂饲料用于制备糖尿病足溃疡大鼠实验模型，该糖尿病溃疡实验动物模型通过对药物干预后生化指标的变化的检测，结果表明，本模型具有糖尿病足溃疡的特征，溃疡创面愈合时间较长，对药物反应敏感等特点。
【专利说明】一种诱导糖尿病的高脂饲料及其在制备糖尿病足溃疡大鼠实验模型中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属实验动物模型领域，具体涉及一种诱导糖尿病的高脂饲料及其在制备糖尿病足溃瘍大鼠实验模型中的应用。
【背景技术】
[0002]随着我国的糖尿病发病率急剧升高，糖尿病溃疡患者的数量也随之增加，在动物整体水平建立真实模拟糖尿病溃疡的疾病模型，是探讨糖尿病溃疡发病机制及临床前药效学评价等医学研究的必要条件，具有十分重要的科学意义和临床意义。
[0003]目前糖尿病足溃疡动物模型多为诱发性动物模型。文献研究结果显示，现有糖尿病足溃疡的动物模型多模拟糖尿病足发病的动脉病变，神经病变或感染，由于各类研究目的不同，模型的建立方法多种多样，各模型之间差别较大，与临床上实际的表现差距较大。因此，糖尿病足模拟临床实际的糖尿病足溃疡病因及症状特征的溃疡动物模型对于促进实验研究的规范化具有重要意义。
[0004]因此，根据临床实际的发病特征及病理改变建立模拟程度较高的动物模型对于糖尿病溃疡的发病机制的研究及相关的手术，药物等干预的疗效评价具有重要的实际意义。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题之一是提供一种诱导糖尿病的高脂饲料。
[0006]本发明要解决的技术问题之二是提供上述高脂饲料在制备糖尿病足溃疡大鼠实验模型中的应用。本发明的高脂饲料用于制备可重复性高，稳定，疾病模拟程度高，便于评价的糖尿病足溃疡大鼠实验模型。
[0007]在本发明的一方面，提供一种诱导糖尿病的高脂饲料，所述高脂饲料由以下重量百分比的组分组成:基础饲料73%，猪油20%，奶粉2%，胆固醇I%，蔗糖4%;所述基础饲料由以下重量百分比的组分组成:大麦15%，小麦31%，玉米15%，麸皮15%，鱼粉6%，豆柏、油和盐共18%。
[0008]在本发明的另一方面，提供一种上述高脂饲料在制备糖尿病足溃疡大鼠实验模型中的应用。
[0009]作为优选的技术方案，所述应用方法包括如下步骤:大鼠经高脂饲料喂养8周后，注射链脲佐菌素，制成糖尿病模型，稳定后在大鼠皮肤上制成深II度烫伤。
[0010]作为优选的技术方案，所述在大鼠皮肤上制成深II度烫伤具体为:在面积为4cm2大鼠皮肤上使用烫伤仪，压力为9.8N，温度90°C，持续时间10S。
[0011]本发明实验动物模型属于复合制备糖尿病足溃疡大鼠模型，模型制备分为二个阶段，各有其具体的制备方法及评价方法，具体分为糖尿病模型制备阶段，溃疡模型制备阶段。
[0012]本发明的糖尿病溃疡实验动物模型通过对药物干预后生化指标的变化的检测，结果表明，本模型具有糖尿病足溃疡的特征，溃疡创面愈合时间较普通溃疡的愈合时间更长，对药物反应敏感等特点。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1是本发明实施例1中大鼠烫伤后的病理切片HE染色示意图。
【具体实施方式】
[0014]本发明的模型制备及验证通过下述实验证实:
[0015]实施例1
[0016]运用高脂饲料配合链脲佐菌素诱导的大鼠2型糖尿病，使用烫伤仪制成深II度烫伤诱导皮肤溃疡制成糖尿病足溃疡大鼠模型。
[0017]I材料和方法
[0018]1.1动物:SD雄性大鼠，SPF级，体重(180±10)g，由上海中医药大学实验动物中心提供。
[0019]1.2主要试剂及药物:链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ),购自Alexis公司；高脂饲料(成份:基础饲料73%，猪油20%，奶粉2%，胆固醇1%，蔗糖4% ;其中基础饲料配方:大麦15%，小麦31%，玉米15%，麸皮15%，鱼粉6%，豆柏、油和盐共18%，该基础饲料购自中国人民解放军海军医学研究所)，高脂饲料的制备方法为:首先，将大麦15%，小麦31%，玉米15%，麸皮15%，鱼粉6%按比例搅拌混合均匀后，加入豆柏、油、盐混匀后加压成型制成基础饲料，然后，将基础饲料73%，猪油20%，奶粉2%，胆固醇I%，蔗糖4%按比例搅拌混合均匀后加压成型制成高脂饲料，成品为圆柱块状；外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子(商品名:贝复济，Recombinant Bovine Basic Fibroblast Growth Factor For External Use,rb-bFGF)，珠海亿胜生物制药有限公司，国药准字S10980077)。Iml注射器，无菌拭子，无菌手套。
[0020]1.3主要仪器:烫伤仪SQL-5Q烫伤仪，上海欣软信息科技有限公司。
[0021]1.4方法:48只大鼠随机分为正常溃疡组(N)(12只)，糖尿病对照组(DM) (12只)，糖尿病溃疡对照组(DU) (12只)，糖尿病溃疡治疗组(DU-t) (12只)。正常溃疡组普通饲料喂养；糖尿病对照组及糖尿病溃疡对照组高脂饲料饲养8周，空腹24小时后，腹腔注射
1.5%STZ35mg.kg_\ 3天后尾静脉取血测量血糖>16.7mmol.L_\制成糖尿病模型；溃疡组血糖>16.7mmol.1 一周后，正常溃疡组(N)，糖尿病溃疡对照组(DU)，糖尿病溃疡治疗组(DU-t) 3%戊巴比妥钠2ml.Kg—1剂量腹腔注射麻醉下烫伤仪烫伤，参数设置为压力:9.8N，温度:90°C，作用时间:10S。48小时后各组取皮肤组织10%甲醛固定后备检。
[0022]糖尿病足实验动物模型的制备及评价方法如下，具体分为2个试验阶段:
[0023]①糖尿病模型制备阶段
[0024]方法:高脂饲料喂养8周后，1.5%链脲佐菌素溶解于PH值4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液按35mg/kg的剂量左下腹注射。
[0025]结果:注射24小时后血糖大于16.7mml/L,稳定3天后检测血糖仍大于16.7mml/L，糖尿病模型成功，稳定2周后，进入下一阶段实验。
[0026]②糖尿病溃疡模型制备阶段[0027]方法:使用SQL-5Q烫伤仪，温度90°C，接触时间10S，压力9.8N,面积4cm2，麻醉后于后背部皮肤进行烫伤。
[0028]结果:观察记录烫伤处皮肤变化。烫伤后24h后取交界区皮肤做病理切片，HE染色观察达到深度II烫伤。稳定48小时后进入下一阶段实验。结果如图1所示，糖尿病对照组(DM)皮肤组织，表皮存在，可见大量皮肤附属器；正常溃疡组(N)，糖尿病溃疡对照组(DU)，糖尿病溃疡治疗组(DU-t)皮肤组织破坏达真皮层，毛囊，汗腺等皮肤附件破坏，炎症细胞浸润。符合深II度烫伤。
[0029]实施例2西药-外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子(商品名:贝复济)干预试验结果
[0030]方法:糖尿病对照组(DM)无处理；正常溃疡组(N)，糖尿病溃疡对照组(DU)，每天生理盐水换药，糖尿病溃疡治疗组(DU-t)，贝复济800iu伤口每日换药。测量换药后0d，3d, IOd,愈合后创面面积，愈合后3%戊巴比妥钠按2ml.Kg—1剂量腹腔注射麻醉，下腔静脉采血，离心分离血清，取皮肤组织备检。
[0031]数据处理:均采用SPSS16.0进行统计分析，计量资料用7 ± s表示，符合正态性和方差齐性的数据用单因素方差分析，组件采用配对t检验，不符合止态性或方差齐性的数据用非参数检验，以P < 0.05有统计学意义。
[0032]表1各组血清NO治疗后比较G土s, μπιο?/?)
[0033]
【权利要求】
1.一种诱导糖尿病的高脂饲料，其特征在于，所述高脂饲料由以下重量百分比的组分组成:基础饲料73%，猪油20%，奶粉2%，胆固醇I%，蔗糖4%;所述基础饲料由以下重量百分比的组分组成:大麦15%，小麦31%，玉米15%，麸皮15%，鱼粉6%，豆柏、油和盐共18%。
2.如权利要求1所述的高脂饲料在制备糖尿病足溃疡大鼠实验模型中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用方法包括如下步骤:大鼠经高脂饲料喂养8周后，注射链脲佐菌素，制成糖尿病模型，稳定后在大鼠皮肤上制成深II度烫伤。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述在大鼠皮肤上制成深II度烫伤具体为:在面积为4cm2大鼠皮肤上使用烫伤仪，压力为9.8N，温度90°C，持续时间10S。
【文档编号】A23K1/14GK103461660SQ201310423293
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月17日 优先权日:2013年9月17日
【发明者】柳国斌, 韩强 申请人:上海中医药大学附属曙光医院