一种文心兰的培养方法
【专利摘要】本发明涉及农业生物【技术领域】，为解决文心兰生产存在生根困难、繁殖能力弱、生长速度慢、生长周期长、练苗移栽阶段病害重，出瓶成活率低及抗逆性弱等问题，本发明提出了一种文心兰的培养方法：（1）采用MS培养基培养文心兰组培小苗；（2）采用固体PDA培养基培养印度梨形孢真菌；（3）文心兰与印度梨形孢真菌的共培养；（4）文心兰组培苗的出瓶培养。本发明的培养方法降低了文心兰出瓶苗移栽病害率，提高抗逆性。
【专利说明】一种文心兰的培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物【技术领域】，具体地说涉及一种降低文心兰出瓶苗移栽病害及提高抗逆性的方法。
【背景技术】
[0002]文心兰生产存在生根困难、繁殖能力弱、生长速度慢、生长周期长、练苗移栽阶段病害重，出瓶成活率低及抗逆性弱等严重问题。寻求能与兰科花卉共生的有益真菌资源是解决这一问题的有效途径。
[0003]印度梨形孢真菌可以定殖于多种作物的根部，其寄主范围广泛，如拟南芥、烟草、大麦、小麦、玉米等。印度梨形孢的菌丝可以定殖于植物根系表面、根系表皮细胞和细胞间隙，形成典型的梨形厚垣孢子，能在作物根系定殖存活很长时间。
[0004]申请号为201210459635.9的中国专利公开了一种提高白及组培苗移栽成活率的方法，该发明所用专用培养基由种子萌发培养基1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.75mg/L+椰子汁 20%+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂粉 8g/L、增殖培养基 MS+6-BA1.0mg/L+KT3.0mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂粉8g/L、生根培养基MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L组成，按以下步骤进行:A.白及种子无菌萌发；B、增殖培养；C、生根培养和抗逆诱导；D、炼苗移栽。该发明在生根阶段加入SA0.3g/L+CTS2g/L的自制诱抗剂10ml/L，使其在生根培养的同时诱导组培苗的抗逆性，增强苗对外界环境的适应能力，以提高苗的移栽成活率。但是采用抗诱剂诱导的幼苗生根时间长，需要培养2个月，效率低。同时采用抗诱剂诱导的幼苗生根速度慢，两个月后，生根数达2-4条/株，采用抗诱剂诱导的幼苗移栽成活率低，其移栽成活率可达63%。
【发明内容】
[0005]为解决文心兰生产存在生根困难、繁殖能力弱、生长速度慢、生长周期长、练苗移栽阶段病害重，出瓶成活率低及抗逆性弱等问题，本发明提出了一种文心兰的培养方法，本发明的培养方法降低了文心兰出瓶苗移栽病害率，提高抗逆性。
[0006]本发明是通过以下技术方案实现的:一种文心兰的培养方法，所述的培养方法为以下步骤:
(I)采用MS培养基培养文心兰组培小苗；
在组培瓶中采用MS培养基组织无菌培养文心兰小苗，待小苗长到3飞cm高，有f 3个根时备用；作为优选，培瓶中的培养条件为:光照培养16小时，2(Γ28摄氏度；黑暗培养8小时，18?23摄氏度。
[0007]作为优选，MS培养基由以下组份组成，各组份的重量份为:
MS 盐粉末(MS-Salt):3.46
琼脂:10 鹿糖:20 蒸馏水:1000 搅拌后用KOH调节pH至5.7?5.8，高温灭菌(高温灭菌的温度为120°C以上)20分钟，即可作为MS培养基使用。
[0008](2)采用固体PDA培养基培养印度梨形孢真菌
将印度梨形抱菌丝块接种于PDA培养基上，然后将培养皿置于培养箱中，培养20天后的印度梨形孢作为接种菌块；作为优选，培养箱中的培养条件为:24h黑暗培养，2(Γ25摄氏度。
[0009]作为优选，PDA培养基由以下组份配成，各组份的重量份为:
马铃薯200，
葡萄糖20，
琼脂15，
水 1000，
搅拌后高温灭菌20分钟，即可作为PDA培养基使用。
[0010](3)文心兰与印度梨形孢真菌的共培养
将步骤(2)培养好的印度梨形孢真菌菌块置于步骤(I)的文心兰组培瓶中，距离文心兰根部0.5^2cm的位置，作为优选，培养条件为:光照培养16小时，2(Γ28摄氏度；黑暗培养8小时，If 23摄氏度。印度梨形孢的在兰科花卉上的开发应用，可以促进文心兰生根，力口速兰科植物的生长速度，降低移栽期病害提高成活率及文心兰抗逆性。采用此方法培养的文心兰根的数量比对照高I倍以上，鲜重比对照高50%以上；移栽期，软腐病比为对照降低70%以上，成活率比对照高20%左右。
[0011](4)文心兰组培苗的出瓶培养
共培养15天以后的组培苗可出瓶，放置于温室中生长。一般共培养15天后，印度梨形孢真菌即可成功侵染文心兰，与文心兰根部共生。作为优选，共培养15?30天。
[0012]与现有技术相比，本发明的有益效果是:本发明培养的文心兰降低了文心兰出瓶苗移栽病害率，提高抗逆性。
【具体实施方式】
[0013]实施例1
(I)文心兰“南西”组培小苗的培养。
[0014]以文心兰“南西”品系组培小苗为材料，培养基为M S培养基，每瓶苗数量为6棵。苗大小为3-4cm高，根数量为2-3根，根长为l-2cm左右。置于22摄氏度的组培室中，光照培养16小时，黑暗培养8小时，备用。
[0015](2)印度梨形孢真菌的培养
将保存于PDA培养基的印度梨形孢边缘菌丝用直径为5mm的打孔器打孔，将菌丝块接种于含PDA培养基的培养皿中培养,然后将培养皿置于恒温培养箱中，培养条件为:24h黑暗，25摄氏度，培养20天，选取培养皿边缘的新鲜、生长旺盛的菌丝作为印度梨形孢接种菌块。
[0016](3)文心兰“南西”与印度梨形孢真菌的共培养
选取上述培养好的印度梨形孢真菌菌块置于文心兰组培瓶中，距离文心兰根部约Icm的位置，共培养15天。培养条件为白天22摄氏度，光照培养16个小时；晚上18摄氏度，黑暗培养8小时。观察文心兰“南西”的生长情况。
[0017](4)文心兰“南西”组培苗的出瓶培养
一般共培养15天后，印度梨形孢真菌即可成功侵染文心兰，与文心兰根部共生；若延长共培养的时间到30-40天，印度梨形孢真菌对“南西”的生长有促进作用，没有不良反应。共培养后的组培苗可出瓶，放置于温室中生长。
[0018]在夏季高温季节，温室湿度通常在80-90%左右，“南西”对照植株软腐病发病率非常高，可达50%以上，而印度梨形孢共培养的文心兰“南西”植株发病率在10%左右，软腐病发病率比对照降低了 80?{计算方法:(对照发病率-共培养株发病率)/对照发病率】，印度梨形孢共培养的文心兰“南西”植株的成活率比对照高30%以上。
[0019]实施例2
(I)文心兰“柠檬”组培小苗的培养。
[0020]以文心兰“柠檬”品系组培小苗为材料，培养基为M S培养基，每瓶苗数量为8棵。苗大小为4-5cm高，根数量为2-3根，根长为l_2cm左右，光照培养16小时，25摄氏度；黑暗培养8小时，20摄氏度，备用。
[0021](2)印度梨形孢真菌的培养
将保存于PDA培养基的印度梨形孢边缘菌丝用直径为5mm的打孔器打孔，将菌丝块接种于含PDA培养基的培养皿中培养,然后将培养皿置于恒温培养箱中，培养条件为:24h黑暗，20摄氏度，培养20天，选取培养皿边缘的新鲜、生长旺盛的菌丝作为印度梨形孢接种菌块。
[0022](3)文心兰“柠檬”与印度梨形孢真菌的共培养
选取上述培养好的印度梨形孢真菌菌块置于文心兰组培瓶中，距离文心兰根部约
1.5cm的位置，共培养20天。培养条件为白天22摄氏度，光照培养16个小时；晚上18摄氏度，黑暗培养8小时。观察文心兰“柠檬”的生长情况。
[0023](4)文心兰“柠檬”组培苗的出瓶培养
一般共培养20天后，印度梨形孢真菌即可成功侵染文心兰，与文心兰根部共生；若延长共培养的时间到30-40天，印度梨形孢真菌对“柠檬”的生长有促进作用，没有不良反应。共培养后的组培苗可出瓶，放置于温室中生长。
[0024]在夏季高温季节，温室湿度80-90%，“柠檬”对照植株的软腐病发病率在40%左右，印度梨形孢共培养后的植株发病率在9%左右，软腐病发病率比对照降低77%【计算方法:(对照发病率-共培养株发病率)/对照发病率】。温室移栽3个月后，印度梨形孢共培养的文心兰“柠檬”植株的成活率比对照高28%。
【权利要求】
1.一种文心兰的培养方法，其特征在于，所述的培养方法为以下步骤: (1)采用MS培养基培养文心兰组培小苗 在组培瓶中采用组织无菌培养文心兰小苗，待小苗长到3?5cm高，有f 3个根时备用； (2)采用固体PDA培养基培养印度梨形孢真菌 将印度梨形抱菌丝块接种于PDA培养基上，然后将培养皿置于培养箱中，培养20天后的印度梨形孢作为接种菌块； (3)文心兰与印度梨形孢真菌的共培养 将步骤(2)培养好的印度梨形孢真菌菌块置于步骤(I)的文心兰组培瓶中，距离文心兰根部0.5?2cm的位置培养； (4)文心兰组培苗的出瓶培养 共培养15天以后的组培苗可出瓶，放置于温室中生长。
2.根据权利要求1所述的一种文心兰的培养方法，其特征在于，步骤(I)中组培瓶中培养条件为:光照培养16小时，2(Γ28摄氏度；黑暗培养8小时，18?23摄氏度。
3.根据权利要求1所述的一种文心兰的培养方法，其特征在于，步骤(2)中培养箱中的培养条件为:24h黑暗培养，2(Γ25摄氏度。
4.根据权利要求1所述的一种文心兰的培养方法，其特征在于，步骤(3)中培养条件为:光照培养16小时，2(Γ28摄氏度；黑暗培养8小时，18?23摄氏度。
5.根据权利要求1所述的一种文心兰的培养方法，其特征在于，步骤(4)中共培养15?30天。
【文档编号】A01H4/00GK104221854SQ201410265619
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年6月16日 优先权日:2014年6月16日
【发明者】刘晓静, 田丹青, 潘晓韵, 李明江, 葛亚英, 郁永明, 刘建新, 潘刚敏, 沈晓岚 申请人:浙江省萧山棉麻研究所, 江苏省中国科学院植物研究所