一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法
【专利摘要】本发明提供一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，包括如下步骤：1）玫瑰茎段腋芽伸长诱导培养；2）玫瑰无菌苗增殖诱导培，获得大量的玫瑰无菌苗；3）玫瑰丛生芽生根诱导培养；4）玫瑰丛生芽试管开花诱导培养，常规培养至形成花芽，最后直至开花。本发明的方法外植体消毒效率高达90%，增值倍数达到6，无菌苗生根率达100%，试管内花芽诱导率高达85%，开花率达70%，花期可维持30d。极大地解决了玫瑰扦插繁殖能力低、繁殖周期长、花期短以及病虫害感染等诸多问题，在快速提供玫瑰种苗、提供观赏类开花玫瑰和试管玫瑰花卉以供应市场需求和保护良好的生态环境等方面具有重要意义。
【专利说明】一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物的组织培养领域，具体涉及一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花 的方法。
【背景技术】
[0002] 玫瑰原产于我国，因其花大瓣厚、色泽艳丽和香味浓郁而受到世人的追捧。还因玫 瑰象征着美丽和爱情，在市面上供不应求，尤其是在节假日。近年来，市场上出现的新型产 品一试管玫瑰很受欢迎，人们普遍喜爱它的玲珑小巧，有亲切之感，并且因其具有无须水 肥管理、观赏时间长等优点，近年来受到都市人的青睐，满足了人们求变、求新、求异的精神 需求，具有巨大的商业潜力，试管玫瑰花卉的市场前景广阔。
[0003] 玫瑰花是集药用、食用、化工、美容、观赏为一体的一种多用型花卉植物，目前玫瑰 多采用扦插法、嫁接法或离体组织培养进行繁殖，研究较多的是玫瑰的药用成分和美容成 分，应用组织培养技术诱导试管内玫瑰开花的研究报道几乎没有。当代，植物组织培养基本 技术成熟，周期短、便于人工控制培养条件、繁殖速度快、占用空间小、经济效益高，是优良 品种培育的有效途径。利用植物快速繁殖技术极大地提高了玫瑰花卉生产率、成活率、成活 质量和观赏质量。对迅速发展试管玫瑰花卉生产工艺，在试管玫瑰花卉研发中进一步创新 研究思路和方法，寻找到诱导开花的物质、新型培养基，使试管玫瑰花卉产业向专业化、规 模化、产业化发展都具有重要的现实意义。
[0004]
【发明内容】
[0005] 本发明提供一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，本发明不仅可以周年生 产，不受季节限制，大大提高生产效率，缩短培育时间，从出苗到形成花芽一般为90 d-个 周期；而且解决了目前玫瑰花期短、扦插成活率低、繁殖周期长、品质退化、农药残余量超标 等诸多问题。
[0006] 本发明提供的一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，包括如下步骤： 1) 玫瑰腋芽伸长诱导培养：将经灭菌消毒的玫瑰茎段切成带单个腋芽的茎段，接种到 腋芽伸长诱导培养基上，常规培养至腋芽长2-3 cm ; 2) 增殖培养：挑选步骤1)中芽长达2-3 cm的腋芽，将其从茎段上切下，接种至增殖养 基上，常规培养至形成大量丛生芽，获得大量无菌玫瑰试管苗。
[0007] 3)生根培养：挑选步骤2)中芽长达2-3 cm的丛生芽，将其切下，接种到生根培养 基上，常规培养至长出白色的根，获得无菌玫瑰种苗。
[0008] 4)试管内开花培养：待步骤3)中玫瑰丛生芽根长达0. 5-1 cm时转接至花芽诱导 培养基上，常规培养至花芽形成，最后培育直至开花。
[0009] 其中，所述灭菌消毒的具体方法为：采摘无病虫害的玫瑰带腋芽茎段，流水冲洗， 在超净工作台上用酒精浸泡30 s，再转入0. 1%的升汞溶液中浸泡8 min，然后用无菌水冲 洗3_5次。
[0010] 其中，所述茎段优选无病虫害带腋芽的茎段。
[0011] 其中，所述腋芽伸长诱导培养基为MS固体培养基，无需添加任何植物生长调节 剂。
[0012] 其中，所述增殖诱导培养基以MS固体培养基为基本培养基，外加植物生长调节 齐U。其中MS配方中所含蔗糖浓度为30 g/L，外加的萘乙酸浓度为0. 05 mg/L、6-苄氨基嘌 呤浓度为1. 5 mg/L。
[0013] 其中，所述生根培养基以MS固体培养基为基本培养基，外加植物调生长节剂。其 中MS配方中所含蔗糖浓度为15 g/L、萘乙酸浓度为0. 3 mg/L、吲哚丁酸浓度为0. 5mg/L。
[0014] 其中，所述试管内花芽形成培养基以MS固体培养基为基本培养基，外加植物生长 调节剂。其中MS配方中所含蔗糖浓度为30 g/L、萘乙酸浓度为0. 04 mg/L、6-苄氨基嘌呤 浓度为1. 6 mg/L。
[0015] 其中，所述培养基的pH值为6. 2;腋芽伸长、增殖和生根的培养条件为：培养温 度为26 °C，6:0(Tl8:00进行光照，光照强度为1500 lx;花芽形成及花开放培养条件为： 7:00?19:00恒温26 1：并进行光照，光照强度为1500 11，19:00?7:00恒温18 1：且不进行 光照；培养空间相对湿度维持在75%左右。其中，所述玫瑰腋芽伸长培养的时间为10 d。
[0016] 其中，所述增殖培养的时间为40 d。
[0017] 其中，所述生根培养的时间为10 d。
[0018] 其中，所述试管内从形成花芽到开花直至凋谢共可维持60 d。
[0019] 本发明还提供所述诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法在玫瑰繁育中的应用。
[0020] 本发明的有益效果在于： 本发明的方法外植体消毒效率高达90%，增值倍数达到6,无菌苗生根率达100%，试管 内花芽诱导率高达85%，开花率达70%，花期长达30 d，可快速繁殖玫瑰无菌种苗以及试管 玫瑰花卉。
[0021] 2)本发明解决了目前玫瑰花期短、扦插成活率低、繁殖周期长、品质退化、农药残 余量超标等诸多问题，大大缩短了玫瑰花卉的培育时间，提高了玫瑰花卉的成活质量和观 赏价值。
[0022] 3 )本发明采用离体快速繁殖技术对玫瑰进行试管内开花诱导，不仅可以满足人们 求变、求新、求异的精神需求，而且还可以为试管玫瑰花卉产业向专业化、规模化、产业化发 展提供有益的理论参考，以满足市场需求。
[0023] 4)本发明在保护玫瑰自然资源、玫瑰优良品种和良好的生态环境等方面具有重要 意义。
【专利附图】
【附图说明】
[0024] 1)图1 :是本发明实施例中培育10 d后玫瑰带腋芽茎段中（玫瑰来源于商购，下 同）腋芽的伸长情况。
[0025] 2)图2 :是本发明实施例中玫瑰丛生芽培养30 d后的增殖情况。
[0026] 3)图3 :是本发明实施例中玫瑰丛生芽培养10 d后的生根情况。
[0027] 4)图4:是本发明实施例中玫瑰试管苗培育30 d后花芽形成、35 d后花苞展开、 40 d后花苞开放、60 d后花朵凋谢的整个过程。
[0028] 5)图5 :是本发明实施例中培育40 d后开放的试管玫瑰花。
【具体实施方式】
[0029] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神 和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
[0030] 若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。 实施例中所用化学试剂均可市购。
[0031] 实施例1 利用本发明进行一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的实例。
[0032] 1)外植体的选择及消毒：采摘无病虫害的玫瑰带腋芽茎段，在超净工作台上用酒 精浸泡30 s，再转入0.1%的升萊溶液中浸泡8 min,然后用无菌水冲洗3-5次，最后在无菌 条件下切去接触到消毒液的部分，切成1-2 cm的带芽茎段。
[0033] 2)腋芽伸长诱导培养：将经灭菌消毒的玫瑰带芽茎段，接种到腋芽伸长诱导培养 基MS上。培养条件为：所述培养基的pH值为6. 2,培养温度为26 °C，6:0(Tl8:00进行光 照，光照强度为1500 lx，培养空间相对湿度维持在75%左右。培养10 d，腋芽伸长至2-3 cm〇
[0034] 3)增殖诱导培养：挑选步骤2)中2-3 cm的玫瑰无菌幼苗接种至增殖培养基中进 行常规诱导培养。所述增殖诱导培养基为以MS固体培养基为基本培养基，所含蔗糖浓度为 30 g/L、萘乙酸浓度为0.05 mg/L、6-苄氨基嘌呤浓度为1.5 mg/L的培养基。（培养条件同 上述2))。培养30 d后，每株玫瑰试管苗能形成6棵左右的丛生芽，芽长2-5 cm。
[0035] 4)生根诱导培养：挑选步骤3)中2-3 cm的玫瑰丛生芽，接种至生根培养基中，进 行常规诱导培养。所述玫瑰生根培养基为以MS固体培养基为基本培养基，所含蔗糖浓度为 15 g/L、萘乙酸浓度为0.3 mg/L、吲哚丁酸0.5 mg/L的培养基。（培养条件同上述2))。培 养10 d后，形成大量0.5~1 cm的白色根须，获得无菌玫瑰种苗。
[0036] 5)花芽诱导培养：挑选步骤4)中根长0. 5-1 cm的玫瑰苗，接种至花芽诱导培养 基中，进行常规诱导培养。所述玫瑰花芽诱导培养基为以MS固体培养基为基本培养基，所 含蔗糖浓度为30 g/L、萘乙酸浓度为0.04 mg/L、6-苄氨基嘌呤浓度为1.6 mg/L的培养基。 培养条件为：所述培养基的pH值为6. 2, 7:0(Γ19:00恒温26 °C并进行光照，光照强度为 1500 1χ，19:0(Γ7:00恒温18 °C且不进行光照；培养空间相对湿度维持在75%左右。培养 30 d后即有花芽形成，直至开花、凋谢共可维持60 d。
[0037] 结果表明，外植体消毒效率高达90%，增值倍数达到6,无菌苗生根率达100%，试管 内花芽诱导率高达85%，开花率达70%，花期长达30 d，可快速繁殖玫瑰无菌种苗以及试管 玫瑰花卉。
[0038] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本【技术领域】的普通技术人 员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。
【权利要求】
1. 一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，包括如下步骤： 1) 腋芽伸长诱导培养：将经灭菌消毒的玫瑰茎段，接种到腋芽伸长诱导培养基上，常规 培养至腋芽伸长至2-3 cm ; 2) 增殖培养：挑选步骤1)中的腋芽，将其从茎段上切下，接种到增殖培养基上，常规培 养至分化出丛生芽，获得大量的玫瑰无菌苗； 3) 生根培养：挑选步骤2)中达2-3 cm厘米的分化芽，接种到生根培养基上，常规培养 至长出白色的根，获得无菌玫瑰种苗； 4) 开花培养：待步骤3)中玫瑰丛生芽根长达0. 5~1 cm时转接至花芽诱导培养基上， 常规培养至形成花芽，最后直至开花。
2. 如权利要求1所述的诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在于，所述灭 菌消毒的具体方法为：采摘无病虫害的玫瑰带腋芽茎段，在超净工作台上用酒精浸泡30 s， 再转入0. 1%的升汞溶液中浸泡8 min，然后用无菌水冲洗3-5次。
3. 如权利要求2所述的诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在于，所述玫 瑰茎段优选无病虫害带腋芽的茎段。
4. 如权利要求3所述的诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在于，所述玫 瑰腋芽伸长诱导培养基为MS固体培养基，不需添加任何其他植物生长调节剂。
5. 如权利要求1-4所述的诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在于，所述 玫瑰增殖诱导培养基为以MS固体培养基为基本培养基，所含蔗糖浓度为30 g/L、萘乙酸浓 度为0. 05 mg/L、6-苄氨基嘌呤浓度为1. 5 mg/L的培养基。
6. 如权利要求1-5所述的诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在于，所述 玫瑰生根培养基为以MS固体培养基为基本培养基，所含蔗糖浓度为15 g/L、萘乙酸浓度为 0· 3 mg/L、H引哚丁酸浓度为0· 5 mg/L的培养基。
7. 如权利要求1-6所述的诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在于，所述 玫瑰试管内花芽形成培养基为以MS固体培养基为基本培养基，所含蔗糖浓度为30 g/L、萘 乙酸浓度为〇. 04 mg/L、6-苄氨基嘌呤浓度为1. 60 mg/L的培养基。
8. 如权利要求1-7所述的一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在 于，所述培养基的pH值为6. 2 ;腋芽伸长、增殖和生根的培养条件为：培养温度为26 °C， 6:00~18:00进行光照，光照强度为1500 11;花芽形成及花开放培养条件为：7:00~19:00恒 温26 °C并进行光照，光照强度为1500 1χ，19:0(Γ7:00恒温18 °C且不进行光照；培养空间 相对湿度维持在75%左右。
9. 如权利要求8所述的诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在于，所述玫 瑰腋芽伸长诱导培养的时间为10 d左右，腋芽伸长速度较快。
10. 如权利要求9所述的诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在于，所述玫 瑰增殖培养的时间为40 d左右。
11. 如权利要求10所述的诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在于，所述 玫瑰生根培养的时间为10 d左右。
12. 如权利要求11所述的诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，其特征在于，所述 玫瑰试管内形成花芽的时间为30 d左右，直至花凋谢共可维持60 d。
13. 权利要求1-12任一项所述的一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法是在玫 瑰繁育中的应用。
【文档编号】A01H4/00GK104186349SQ201410468755
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月16日 优先权日:2014年9月16日
【发明者】陈建荣, 刘芳, 唐映红, 郭清泉, 袁有美 申请人:长沙学院