一种贵腐葡萄的培育方法
【专利摘要】本发明提供一种贵腐葡萄的培育方法，包括如下步骤：1)灰葡萄孢菌种的制备；2)葡萄原料的培育；3）人工接种灰葡萄孢；4）采收贵腐葡萄。通过人工接种灰葡萄孢，并使其能在低空气湿度条件下能正常侵染葡萄果实、发生贵腐作用；降低贵腐葡萄对自然栽种环境的要求，扩大可培育获得贵腐葡萄的栽培区域，使更多地方能生产高品质的贵腐葡萄，满足高档葡萄酒对高品质葡萄原料的需求。
【专利说明】一种贵腐葡萄的培育方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及葡萄栽培【技术领域】，具体为一种人工培育贵腐葡萄的方法。
【背景技术】
[0002] 贵腐葡萄酒是世界上最高档的葡萄酒之一，它由发生贵腐作用后的葡萄为原料 生产的高档甜白葡萄酒。贵腐作用是由于葡萄在接近成熟期感染了灰葡萄孢 所引起的，灰葡萄孢的侵染和生长能够使葡萄原料的水分挥发，导致葡萄果实中 糖类、有机酸、多元醇等成分发生变化，最终形成含糖量很高且芳香浓郁的贵腐葡萄。灰葡 萄孢侵染葡萄果实后，一般情况下会引起葡萄灰霉病从而引起减产，但在早晚阴冷湿润、下 午干燥炎热的特殊环境下则会引发贵腐作用。分析其主要原因是，早晚的湿冷条件有利于 灰葡萄孢的生长及其侵染葡萄的发生，而中午过后的干热天气才能使葡萄果粒里的水分从 感染处蒸发，脱水提高了葡萄的甜度。由于发生贵腐作用的条件极为苛刻，目前仅有欧洲少 数几个葡萄产区能通过自然发生的途径获得贵腐葡萄，其产量远远不能满足高档甜型葡萄 酒对优质贵腐葡萄的需求。
[0003] 广西中西部地区属于亚热带季风气候，每年10月一 12月间降雨较少，气候干燥， 光照充足，气温基本在10 - 25°C，非常适宜通过避雨栽培、产期延后调节等技术栽培优质 葡萄，其中也包括优质的白色酿酒葡萄品种。这为获得贵腐葡萄提供了最根本的原料基础。
[0004] 但是由于气候持续干燥，空气湿度稳定偏低，灰葡萄孢不具备侵染成熟葡萄的条 件，无法像欧洲贵腐葡萄产区那样依赖自然条件获得天然的贵腐葡萄。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种通过人工接种灰葡萄孢，并使其能在低空气湿度条件下 能正常侵染葡萄果实、发生贵腐作用，最终获得优质贵腐葡萄，满足高档葡萄酒对优质贵腐 葡萄的不断需求。
[0006] 本发明的技术方案：一种贵腐葡萄的培育方法，包括如下步骤： 1) 灰葡萄孢菌种的制备：将灰葡萄孢菌株接种、液态发酵至浓度为IO6 - IO8CFU /mL， 过滤、洗涤、干燥，并粉碎成粒径小于200目的灰葡萄孢菌粉； 2) 葡萄的培育：以成熟的白色酿酒葡萄品种为种植对象，控制葡萄果实于阳光充足，气 温在10_25°C的月份充分成熟； 3) 人工接种灰葡萄孢： A、 菌粉悬浮液的配制：将灰葡萄孢菌粉按质量体积比0. 1% - 5%的量悬浮于清水中，按 质量体积比加入〇. 1% - 2%的聚谷氨酸，0. 5% - 5%的低聚果糖，充分混合均匀备用； B、 选择天气晴好，平均气温为KTC 一 25 °C的时机将灰葡萄孢菌粉悬浮液按 IOmL-IOOmL/穗果实的量均匀喷撒于成熟葡萄果穗表面，待葡萄果实表面有明显白色丝状 菌斑生成，说明接种成功； 4) 采收贵腐葡萄：接种成功后，定期取样测定果实汁液含糖量，当含糖量达到300g/ L 一 340g/L时，即可米收贵腐葡萄成品。
[0007] 优选的,所述灰葡萄孢菌种液态发酵工艺如下： 1) 从原种斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌丝体，制备生物量为IO6 - IO8CFU /mL的原种悬 浮液，并按体积比4% - 10%的量接种于种子培养基中； 2) 在KTC 一 20°C条件下，振荡发酵或搅拌发酵至菌体重量与培养基体积比值达到 5% - 8%终止发酵。
[0008] 优选的，所述种子培养基的制备工艺如下： 1) 取质量比为1:1的马铃薯和大麦芽，马铃薯粉碎至直径不大于Icm的小块，大麦芽粉 碎至粒径20目； 2) 加水稀释，所述水的质量为马铃薯和大麦芽总质量的2. 5倍； 3) 60°C糖化 8h ; 4) 经40目滤网或滤筛过滤除渣； 5) 补充水，使培养基的体积与糖化前的体积一致； 6) 110 - 121°C湿热灭菌 20min。
[0009] 优选的，所述菌株选自中国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢 ACCC36257或ACCC36258,或由野生灰葡萄孢菌株筛选得出。
[0010] 优选的，所述白色酿酒葡萄品种包括赛美容、索味浓、霞多丽、雷司令等。
[0011] 优选的，通过避雨栽培和/产期调节技术来控制葡萄果实成熟时间。
[0012] 优选的，所述灰葡萄孢菌粉悬浮液的喷撒频率为：每1 一 3天喷撒1次，连续喷撒 3 - 6 次。
[0013] 本发明的培育方法具有如下显著的有益效果： 1、 本发明通过人工接种灰葡萄孢，提高灰葡萄孢侵染葡萄的几率，提高贵腐葡萄的产 率； 2、 所喷撒的菌粉悬浮液中的聚谷氨酸和低聚果糖对葡萄的表面起保湿作用，抑制杂菌 生长，促进灰葡萄孢定殖并侵染葡萄果实，使灰葡萄孢在晴朗干燥的气象条件下定殖、侵染 成熟葡萄果实，并发生贵腐作用； 3、 本发明的培育方法降低贵腐葡萄对栽种环境的要求，扩大可培育获得贵腐葡萄的栽 培区域，使更多地方能生产高品质的贵腐葡萄，满足高档葡萄酒对高品质葡萄原料的需求。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种修改或改动，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。
[0015] 实施例1 1)灰葡萄孢菌种制备 A、种子培养基：马铃薯200g粉碎至直径不大于Icm小块，大麦芽200g粉碎至粒径20 目左右，加入IL自来水中，60°C糖化8h，40目滤网或滤筛过滤除渣，滤液用自来水补足至IL 体积，121°C湿热灭菌20min ; B、 菌株：选择由中国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36257 ; C、 发酵：接种发酵从原种斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌丝体，制备生物量为IO8CFUAiL的 原种悬浮液，按体积比10%的量接种于种子培养基中，20°C条件下在摇瓶中振荡发酵，或在 发酵罐机械搅拌发酵罐中发酵l〇d，至菌体重量与培养基体积比值达到8%终止发酵； D、 菌种粉剂制备：将发酵所得菌体过滤收集，用无菌水洗涤3次后，于20°C真空干燥至 含水量小于30%，粉碎成粒径小于200目的灰葡萄孢菌粉。
[0016] 2)葡萄的培育 以成熟的白色酿酒葡萄品种赛美容为原料，在广西中西部地区，通过避雨栽培和产期 调节技术，控制葡萄果实于10月下旬充分成熟。
[0017] 3)人工接种灰葡萄孢 将灰葡萄孢菌粉按质量体积比5%的量悬浮于清水中，按质量体积比加入2%的聚谷氨 酸，5%的低聚果糖，充分混合均匀后，选择天气晴好，平均气温为25°C的时机将灰葡萄孢 菌粉悬浮液按IOOmL /穗果实的量均匀喷撒于葡萄果穗表面，每1天喷撒1次，连续喷撒6 次，喷撒期间及喷撒后观察果实表面灰葡萄孢菌斑的生成情况，待葡萄果实表面有明显白 色丝状菌斑生成，说明接种成功。
[0018] 4)采收贵腐葡萄 接种成功后，定期取样测定果实汁液含糖量，当含糖量达到340g/L时，即可采收贵腐 葡萄成品。
[0019] 实施例2 1)灰葡萄孢菌种制备 A、种子培养基：马铃薯200g粉碎至直径不大于Icm小块，大麦芽200g粉碎至粒径20 目左右，加入IL自来水中，60°C糖化8h，40目滤网或滤筛过滤除渣，滤液用自来水补足至IL 体积，121°C湿热灭菌20min。种子培养基可按比例扩大配制量。
[0020] B、菌株：选择由中国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36258作 为发酵菌株； C、 发酵：接种发酵从原种斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌丝体，制备生物量为IO6CFUAiL的 原种悬浮液，按体积比4%的量接种于种子培养基中，KTC条件下在摇瓶中振荡发酵，或在 发酵罐机械搅拌发酵罐中发酵5,至菌体重量与培养基体积比值达到5%终止发酵； D、 菌种粉剂制备：将发酵所得菌体过滤收集，用无菌水洗涤3次后，于20°C真空干燥至 含水量小于30%。粉碎成粒径小于200目的灰葡萄孢菌粉。
[0021] 2)葡萄的培育 以成熟的白色酿酒葡萄品种霞多丽为原料。在广西中西部地区，通过避雨栽培和产期 调节技术，控制葡萄果实于11月上旬充分成熟。
[0022] 3)人工接种灰葡萄孢 将灰葡萄孢菌粉按质量体积比1%的量悬浮于清水中，按质量体积比加入1%的聚谷氨 酸，2%的低聚果糖，充分混合均匀后，选择天气晴好，平均气温为20°C的时机将灰葡萄孢菌 粉悬浮液按IOmL/穗果实的量均匀喷撒于葡萄果穗表面。每2天喷撒1次，连续喷撒4次， 喷撒期间及喷撒后观察果实表面灰葡萄孢菌斑的生成情况。待葡萄果实表面有明显白色丝 状菌斑生成,说明接种成功。
[0023] 4)采收贵腐葡萄 接种成功后，定期取样测定果实汁液含糖量，当含糖量达到300g/L时，即可采收贵腐 葡萄成品。
[0024] 实施例3 1)灰葡萄孢菌种制备 A、 种子培养基：马铃薯300g粉碎至直径不大于Icm小块，大麦芽300g粉碎至粒径20 目左右，加入I. 5L自来水中，60°C糖化8h，40目滤网或滤筛过滤除渣，滤液用自来水补足至 I. 5L体积，120°C湿热灭菌20min。种子培养基可按比例扩大配制量； B、 菌株：选择由中国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36258作为发 酵菌株； C、 发酵：接种发酵从原种斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌丝体，制备生物量为IO7CFUAiL的 原种悬浮液，按体积比8%的量接种于种子培养基中，15°C条件下在摇瓶中振荡发酵，或在 发酵罐机械搅拌发酵罐中发酵5d，至菌体重量与培养基体积比值达到6%终止发酵； D、 菌种粉剂制备：将发酵所得菌体过滤收集，用无菌水洗涤3次后，于20°C真空干燥至 含水量小于30%。粉碎成粒径小于200目的灰葡萄孢菌粉。
[0025] 2)葡萄的培育 以成熟的白色酿酒葡萄品种索味浓为原料。在广西中西部地区，通过避雨栽培和产期 调节技术，控制葡萄果实于11月中旬充分成熟。
[0026] 3)人工接种灰葡萄孢 将灰葡萄孢菌粉按质量体积比2. 5%的量悬浮于清水中，按质量体积比加入1. 5%的聚 谷氨酸，2. 5%的低聚果糖，充分混合均匀后，选择天气晴好，平均气温为18°C的时机将灰葡 萄孢菌粉悬浮液按SOmL/穗果实的量均匀喷撒于葡萄果穗表面。每3天喷撒1次，连续喷 撒3次，喷撒期间及喷撒后观察果实表面灰葡萄孢菌斑的生成情况。待葡萄果实表面有明 显白色丝状菌斑生成，说明接种成功。
[0027] 4)采收贵腐葡萄 接种成功后，定期取样测定果实汁液含糖量，当含糖量达到330g/L时，即可采收贵腐 葡萄成品。
[0028] 实施例4 实施例4与实施例1的培育方法相似，其区别在于：所培育的葡萄品种为雷司令，控制 葡萄成熟的时间为11月下旬，菌粉的添加量为〇. 5% (w/v)，聚谷氨酸的添加量为0. 5% (w/ v)，低聚果糖的添加量为1% (w/v)，喷撒菌粉时的气温为15°C，喷撒频率为2天/次，连续 喷撒5次，当含糖量达到320g/L时，即可采收贵腐葡萄成品。
[0029] 实施例5 实施例5与实施例1的培育方法相似，其区别在于：所培育的葡萄品种为霞多丽，控制 葡萄成熟的时间为12月上旬，菌粉的添加量为0. 1% (w/v)，聚谷氨酸的添加量为0. 1% (w/ v)，低聚果糖的添加量为0.5% (w/v)，喷撒菌粉时的气温为KTC，喷撒频率为1天/次，连 续喷撒3次，当含糖量达到310g/L时，即可采收贵腐葡萄成品。
[0030] 上述实施例的相关实验数据如下表所示：
【权利要求】
1. 一种贵腐葡萄的培育方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 灰葡萄孢菌种的制备：将灰葡萄孢菌株接种、液态发酵至浓度为1〇6 - 108CFU/mL，过 滤、洗涤、干燥，并粉碎成粒径小于200目的灰葡萄孢菌粉； 2) 葡萄的培育：以成熟的白色酿酒葡萄品种为种植对象，控制葡萄果实于阳光充足，气 温在10-25°C的月份充分成熟； 3) 人工接种灰葡萄孢： A、 菌粉悬浮液的配制：将灰葡萄孢菌粉按质量体积比0. 1% - 5%的量悬浮于清水中，按 质量体积比加入〇. 1% - 2%的聚谷氨酸，0. 5% - 5%的低聚果糖，充分混合均匀备用； B、 选择天气晴好，平均气温为10°C - 25 °C的时机将灰葡萄孢菌粉悬浮液按 lOmL-lOOmL/穗果实的量均匀喷撒于成熟葡萄果穗表面，待葡萄果实表面有明显白色丝状 菌斑生成，说明接种成功； 4) 采收贵腐葡萄：接种成功后，定期取样测定果实汁液含糖量，当含糖量达到300g/ L 一 340g/L时，即可米收贵腐葡萄成品。
2. 如权利要求1所述的贵腐葡萄的培育方法，其特征在于，所述灰葡萄孢菌种液态发 酵工艺如下： 1) 从原种斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌丝体，制备生物量为1〇6 - 108CFU/mL的原种悬 浮液，并按体积比4% - 10%的量接种于种子培养基中； 2) 在10°C - 20°C条件下，振荡发酵或搅拌发酵至菌体重量与培养基体积比值达到 5% - 8%终止发酵。
3. 如权利要求2所述的贵腐葡萄的培育方法，其特征在于，所述种子培养基的制备工 艺如下： 1) 取质量比为1:1的马铃薯和大麦芽并粉碎，马铃薯粉碎至直径不大于lcm的小块，大 麦芽粉碎至粒径20目； 2) 加水稀释，所述水的质量为马铃薯和大麦芽总质量的2. 5倍； 3) 60°C糖化 8h ; 4) 经40目滤网或滤筛过滤除渣； 5) 补充水，使培养基的体积与糖化前的体积一致； 6) 110 - 121°C湿热灭菌 20min。
4. 如权利要求1所述的人工制备贵腐葡萄的方法，其特征在于，通过避雨栽培和/或产 期调节技术来控制葡萄果实成熟时间。
5. 如权利要求1所述的贵腐葡萄的培育方法，其特征在于，所述灰葡萄孢菌粉悬浮液 的喷撒频率为：每1 一 3天喷撒1次，连续喷撒3 - 6次。
6. 如权利要求1所述的贵腐葡萄的培育方法，其特征在于，所述灰葡萄孢菌株选自中 国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36257或ACCC36258,或由野生灰葡 萄孢菌株筛选得出。
【文档编号】A01G7/00GK104255384SQ201410523702
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月8日 优先权日:2014年10月8日
【发明者】李玮, 张瑛, 林玲, 曹雄军, 时晓芳, 周咏梅, 韦荣福 申请人:广西壮族自治区农业科学院葡萄与葡萄酒研究所