一种提高金线莲种子萌发的方法与流程

本发明涉及一种提高金线莲种子萌发的方法，属于现代中草药栽培技术领域。

技术背景

金线莲（Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl. A.roxburghii）即花叶开唇兰，别名金蚕、金线兰、金石松等，是兰科开唇兰属的一种多年生草本植物，主要分布于亚洲的日本、中国、斯里兰卡、印度和尼泊尔等国。金线莲全草皆可入药，其味甘，性平微寒，有清热解毒、凉血平胆等功效。金线莲是一种珍稀药材，广泛用于治疗肝炎、肾炎、肺炎、小儿惊风高热、糖尿病、高肿瘤、风湿病等，还兼治小儿发育不良及毒蛇咬伤。目前学者对金线莲的研究集中在化学成分、提取工艺、药理作用、临床实验等方面，最近仍有报道。但有关金线莲种子生物学特性及萌发条件的研究未见报道。由于金线莲长期无序采挖，导致金线莲野生资源濒临枯竭。在自然条件下萌发，存在耗种量大、难发芽、成活率低等问题，给种质资源研究和人工种质试验带来了很大的困难。

技术实现要素：

为解决金线莲种子自然条件下萌发困难的问题，本发明提供了一种提高金线莲种子萌发的方法。它包括适合金线莲种子萌发的最佳温度、最佳光照、最佳赤霉素浓度，从而确定金线莲种子萌发的最佳条件。

本发明提供的一种提高金线莲种子萌发的方法，金线莲种子萌发条件为：金线莲种子置于25℃下培养，并进行黑暗处理和赤霉素GA₃处理，GA₃质量浓度为40mg/L。

优选的，选取籽粒饱满和质地均匀的金线莲种子，选用0.1%的高锰酸钾溶液消毒15min，冲洗干净；采用培养皿+双层滤纸床，将金线莲种子置于25 ℃下培养，并进行黑暗处理和GA₃处理，GA₃质量浓度为40mg/L。

优选的是，所述金线莲种子购买于云南省农科院种子公司。

本发明主要涉及金线莲种子萌发最佳条件的设计，包括最佳温度、最佳光照、最佳的赤霉素浓度。致力于为以后金线莲种子人工种植技术和规范化种植建设提供指导。本发明方法操作简单、易于掌握，能很好的解决金线莲种子种量大、难发芽、成活率低等问题，不仅提高金线莲种子的萌发率，还大大提高了其萌发效率。仅需12天，发芽率即可达81.33±2.49%，大幅增加发芽率，并且大幅缩短时间。

附图说明

图1为不同光照和温度对金线莲种子萌发的影响，（a）为光照条件。

图2为不同光照和温度对金线莲种子萌发的影响，（b）为黑暗条件。

图3为25℃黑暗处理后，不同赤霉素浓度对金线莲种子萌发的影响。

具体实施方式

具体实施案例：2015年6月中旬以后，连续对不同温度、不同光照、不同赤霉素浓度处理的金线莲种子的萌发情况进行记录。后期关于其发芽率的统计分析，参照发芽率的计算方法、Spass17.0和Sigmaplot10.0。结果见图1、图2及图3；步骤如下：

（1） 选材：试验所用金线莲种子购买于云南省农科院种子公司，选取籽粒饱满、质地均匀的供试种子，选用浓度0.1%的高锰酸钾溶液消毒15min，冲洗干净；

（2） 种子发芽的最佳条件：采用培养皿+双层滤纸床，将金线莲种子分别置于15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃和35 ℃下培养，并在每个温度条件进行光照和黑暗两个处理，每种处理下5次重复，每次重复30粒种子，如图1-2所示，25℃黑暗处理下在24D时发芽率达到最高；

（3）GA₃处理与种子萌发：在前述试验的最适温度和光照条件下，增加不同GA₃浓度处理。金线莲种子分别放在GA₃质量浓度为20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L、160 mg/L和320 mg/L 5个梯度，并以蒸馏水为对照，每次处理随机取出30粒种子，5次重复，如图3所示，在25℃黑暗条件下，GA₃质量浓度为40 mg/L时，发芽率在12时即可达到最高；

（4）实验后期的管理：从处理第4天开始检查记录发芽种子数，到种子不再萌发为止，每天为种子加入适量同浓度的培养液，萌发到高峰期时，用消毒的镊子为种苗翻下身，统计种子发芽率。

由图1-2可知，在15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃4个光照（发现在35 ℃的光照和黑暗条件下，发芽率均为0）与黑暗对照组中，在黑暗条件下培养的发芽率都高于光照条件下培养的发芽率。经方差分析表明，在25 ℃条件培养下，黑暗条件下培养种子发芽率显著高于光照条件下培养种子发芽率。其他温度的光照和黑暗之间的发芽率差异也显著。

由图2可知， 20℃、30℃条件下培养，种子发芽率不超过60%，发芽率不是很高。随着温度的增加，金线莲种子发芽率表现出先升后降的趋势，并且25 ℃条件下发芽率显著高于其他温度下、黑暗条件下的发芽率。这表明，在双层滤纸上、25℃及黑暗条件能提高金线莲种子的萌发。与对照（72.67±2.45）%相比，40 mg/L、20 mg/L赤霉素处理对金线莲种子萌发的促进作用显著（P<0.05）。20 mg/L赤霉素处理，种子发芽率可达（73.33±3.80）%，40 mg/L赤霉素处理种子的发芽率最高为（81.33±2.49）%。而高于40 mg/L的赤霉素浓度，对种子萌发率都有抑制作用。表明适当浓度赤霉素处理可明显缩短金线莲种子萌发时间，提高种子发芽率。见图3。

上述步骤中，金线莲种子的萌发采用培养皿+双层滤纸，双层滤纸吸水性性比较好。探究种子发芽的最佳条件，将金线莲种子置于15℃、20℃、25℃、30℃和35℃下培养，并在每个温度条件进行光照和黑暗两个处理。探究适合金线莲种子萌发的赤霉素浓度，将金线莲种子分别放在GA₃质量浓度为20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L、160 mg/L、320 mg/L 5个梯度，并以蒸馏水为对照。金线莲种子萌发到高峰期时，用消毒的镊子为种苗翻下身，以防止种苗腐烂。