本发明涉及一种用于甘蔗花粉活性测定时花粉采集的方法。
背景技术：
甘蔗品种改良主要依靠有性杂交选育。甘蔗花粉活性测定中花粉的采集是甘蔗有性杂交的关键技术环节，是否有花粉、花粉活力情况决定甘蔗杂交父本与母本的界定和杂交组合的选配。甘蔗花粉属于典型三核型花粉，外壁薄，受外界环境影响较大，其活性离开花药后很快就失去活力。可见，甘蔗花粉的采集对甘蔗花粉活性测定至关重要，关系到花粉活性测定的精确度和准确度。
因此，为了能够精准测定甘蔗花粉的活性和花粉量，提高甘蔗杂交组合选配的成功率和杂交结实率，很有必要对甘蔗花粉采集方式进行研究。长期以来甘蔗花粉活性测定中花粉采集方式，一直采用将要开花的甘蔗亲本砍回，并于翌日早晨7:00-10:00点开始散粉时收集花粉的方式进行，该方式采集的花粉是花药开裂并离开花药进行采集，增加花粉暴露在外界条件下活性测定的不确定性，影响花粉活性测定的精准度。此外，该花粉采集方式工作量较大、时间较长、浪费亲本材料资源，不利于甘蔗杂交花穗生产效率的提高。
技术实现要素：
本方法是用于甘蔗花粉活性测定时花粉采集的有效手段，通过花粉采集手段的创新，达到精准、快速、易操作、灵活和科学可靠的花粉活性测定目的。
为了实现上述目的，本发明采用的以下技术方案：
一种用于甘蔗花粉活性测定时花粉采集方法，所述方法包括以下步骤：
s1选取需要花粉活性测定的甘蔗亲本进行开花花穗发育阶段观察，并选定整个植株第一个花药开裂的花穗；
s2取已选定的花穗的枝梗，并做好标记；
s3将标记好的花穗枝梗用尖头镊子取出花穗中的花药，并将花药中的花粉挤出并放在载玻片上；
s4取溶度为5％的ki溶液1-2ml滴在载玻片上，并进行充分染色；
s5染色结束后放置在显微镜下观察花粉染色情况，花粉粒黑色且为饱满的视为发育良好；
s6于步骤5中取3个视野计算发育。
需要说明的是，所述步骤1中的采集时间为采集当日上午7:00至11：00期间。
需要说明的是，所述步骤2中同一个甘蔗亲本须取三个重复样本，并对各样本进行标记。
需要说明的是，所述步骤3中的所述从花穗中取出的花药须是还未开裂，但相邻的花药已开裂。
需要说明的是，每条枝梗取两个花药，并将每个亲本的花药混匀再做花粉活性测定。
需要说明的是，染色时间为60秒。
本发明相比现有技术的优点在于：
一是，精准。传统的花粉采集是采用花药开裂并离开花药时进行，增加花粉暴露在外界条件下活性测定的不确定性。本方法则采用花粉不离开花药进行，达到精细准确测定花粉活性。
二是，快速、易操作且灵活，提高效率。传统的花粉采集方式，需要将要开花的甘蔗亲本砍回，并于翌日早晨7:00-10:00点开始散粉时收集花粉才能测定。本方法采用现场取带回实验室可快速测定，易操作每天可同时测定100份亲本以上，大大提高了效率，及时为甘蔗杂交组合选配提供父母性依据。
具体实施方式
以下将对本发明作进一步的描述，需要说明的是，以下实施例以本技术方案为前提，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围并不限于本实施例。
一种用于甘蔗花粉活性测定时花粉采集的方法具体步骤如下：
1、花穗发育阶段选定：对于需要花粉活性测定的甘蔗亲本进行开花花穗发育阶段观察，在当日上午7:00至11：00期间，选择整个植株第一个花药开裂的花穗。
2、花穗采集：取已选定的花穗花药开裂的枝梗，同一个甘蔗亲本要求取三个重复。将取好的花穗枝梗做好标记放在柔软的纸质笔记本上，并用夹子夹住便可对下个亲本进行取样。
3、花药采集：将新鲜的花穗枝梗带回实验室，用尖头镊子取出花穗中的花药，并将花药中的花粉挤出并放在载玻片上，要求取的花药必须是花药还未开裂，但相邻的花药已开裂。每条枝梗至取两个花药，并将每个亲本的花药混匀再做花粉活性测定。
4、花粉活性测定：取溶度为5％的ki溶液1-2ml滴在带有花粉的载玻片上，并进行充分染色，染色时间为60秒。染色结束后放置在显微镜下观察花粉染色情况，花粉粒黑色且为饱满的视为发育良好，并取3个视野计算发育率。
进一步的，通过本发明的采集方法进行甘蔗花粉活性测定明显优于传统的采集方法，如下表1所示：
表1：5个甘蔗亲本材料不同花粉采集方式花粉发育率比较
对于本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及变形，而所有的这些改变以及变形都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。