绿色木霉菌制剂在防治番茄灰霉病中的应用的制作方法

1.本发明涉及生物防治技术领域，更具体地说是涉及绿色木霉菌制剂在防治番茄灰霉病中的应用。


背景技术：

2.番茄灰霉病是由灰葡萄孢(botrytis cinereapers.exfr.)引起的一种世界性病害，在设施蔬菜上危害尤为严重，可造成大量烂果，化学防治是减轻灰霉病为害的主要手段。目前防治灰霉病的药剂主要有苯并咪唑类杀菌剂(多菌灵、甲基硫菌灵)、n
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苯基氨基甲酸酯类杀菌剂(乙霉威)、二甲酰亚胺类杀菌剂(腐霉利、异菌脲)、苯胺基嘧啶类杀菌剂(嘧霉胺)、百菌清和代森锰锌，前4类药剂均因灰葡萄孢抗药性的产生而大大降低了防治效果。因而生物防治成为替代化学防治的一种重要补充手段，然而生物防治由于见效慢，效果不稳定等因素，从而影响其应用前景，采用生物
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化学协同防治成为两者互益的最佳方式。基于这种思考，本发明通过筛选高效的生物杀菌剂，开展生物
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化学协同防治的复配研究。合理的生物
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化学杀菌剂复配或混配具有扩大杀菌谱，提高防治效果、延长施药适期、减少用药量、降低药害、减少残留、延缓真菌耐药性和抗药性的产生，是解决以上问题的最为有效的方法之一。
3.番茄灰霉病是番茄生产中的重要病害之一，对保护地番茄生产构成极大威胁。幼苗期和成株期均可发病，花果叶茎均可受害，尤以青果受害最重，一般导致番茄减产30％以上，对番茄的产量和品质影响很大。目前国内各地均有发生，已经成为番茄设施栽培的限制性障碍。目前，由于尚未发现灰霉病的抗源，抗病育种难以进行，番茄灰霉病的防治仍依靠化学药剂进行防治。然而，长期、连续用药使病原菌逐渐产生了抗药性影响了防治效果，同时造成环境污染，也造成了果实的农药污染。因而寻找和筛选对番茄灰霉病菌有强烈抑制作用的微生物菌株，是番茄灰霉病防治的主要方向。利用生物农药替代化学农药防治植物病害虽可避免抗药性病原菌株的产生，但具有防治机理不清楚、防效较慢，效果不稳定等缺点。
4.根肿菌属于弱寄生性真菌，即在很多不良的环境中一样能够生存侵染，同样生命力也特别顽强，在土壤中能存活10年以上。根肿病是农作物特别是蔬菜生产上表现比较突出的根部病害，在根部形成大小不等的肿瘤，造成根部畸形，最终使地上部分生长迟缓，矮小、呈缺水、缺肥、小老苗状态。随着病情的加重，叶片逐渐枯黄，严重的可引起整株枯死。
5.木霉菌属于半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目，粘孢菌类，是一类普遍存在的真菌。绿色木霉菌(trichoderma viride)在自然界分布广泛，常腐生于木材、种子及植物残体上。绿色木霉菌能产生多种具有生物活性的酶系，如：纤维素酶、几丁质酶、木聚糖酶等。在植物病理生物防治中具有重要的作用。绿色木霉菌是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好。
6.大多数绿色木霉菌可产生多种对植物病原真菌、细菌及昆虫具有拮抗作用的生物活性物质，并能提高农作物的抗逆性，促进植物生长和提高农产品产量，因此被广泛用于生
物防治、生物肥料及土壤改良剂。由于化学农药对环境的负面影响较为严重，所以对环境较为友好的绿色木霉菌受到了广泛的关注。
7.中国授权专利cn108315284b公开了一种产蛋白酶、抗番茄灰霉病菌的芽孢杆菌菌株，该菌株分类命名为沙福芽孢杆菌(bacillus safensis)sh180，于2018年4月8日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏编号为：cgmcc15565。所述菌株具有促进生物生长，产蛋白酶，抗番茄灰霉病的作用。该菌株应用于生产中，对于番茄产量的提高，减少农药对灌溉水体的危害，降低耐药菌的产生有重要意义。
8.中国授权专利cn109628323b公开了一种绿色木霉发酵方法及其水分散粒剂。其公开的绿色木霉发酵方法，包括如下步骤：将绿色木霉ltr
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2接种至发酵培养基，发酵前期控制温度为29
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31℃，发酵后期控制温度为24℃
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26℃、ph为5.0～5.5，得到富含厚垣孢子的绿色木霉ltr
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2发酵液。采用本发明方法，能够获得富含厚垣孢子的绿色木霉发酵液，显著提高产品的抗逆性，延长货架期；其水分散粒剂对番茄灰霉病、马铃薯晚疫病、烟草白粉病的防治效果明显优于对照药剂和农用制剂dz
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1。
9.中国授权专利cn108293480b公开了利用生防菌剂防治番茄灰霉病的方法，其包括如下步骤：将生防菌剂添加到50
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100倍重量的水中，搅拌均匀，置于25
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30℃活化3
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5h，然后按照每株喷洒10
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20ml的量喷洒到番茄上，1周后重复喷洒一次。该发明采用生防制剂对番茄灰霉病进行田间防治，完全没有化学防治所带来的一系列问题，而且防治效果好。
10.然而，随着时代的发展和耐药性的提升，单独的绿色木霉菌用于防治番茄灰霉病已经难以实现较好的效果。因此，本领域技术人员也尝试将绿色木霉菌与其它药物联合应用，以提高防治效果。现有技术虽然提到了绿色木霉菌制剂可以与其他的杀真菌农药、植物生长调节剂混合使用，但如何保证所混药剂对绿色木霉菌无副作用的同时，还能够提高防治效果，这仍是本领域技术人员亟待解决的技术问题。


技术实现要素：

11.基于上述背景技术，本发明所要解决的技术问题在于提供绿色木霉菌制剂在防治番茄灰霉病中的应用。为了实现本发明的发明目的，拟采用如下技术方案：
12.本发明一方面涉及绿色木霉菌制剂在防治番茄灰霉病中的应用，所述绿色木霉菌制剂含有绿色木霉菌和银杏多糖。银杏多糖是从银杏果中提取的多糖类物质,又称银杏型果胶，银杏多糖呈淡黄色粉末状。现有技术报道银杏多糖药理主要进行抗肿瘤和免疫调节研究，本发明首次提出将银杏多糖与绿色木霉菌制剂混合施用，不仅不会对绿色木霉菌制剂本身产生副作用，还能有效提高对番茄灰霉病的防治效果以及增产增收。
13.在本发明的一个优选实施方式中，所述绿色木霉菌与银杏多糖的重量比为10：0.5
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2；优选为10：0.8
‑
1.2。本发明的制剂以特定的比例混合绿色木霉菌和银杏多糖，有助于提高防治效果。
14.在本发明的一个优选实施方式中，所述绿色木霉菌为绿色木霉菌ltr
‑
2，其含量为16
‑
22
×
108cfu/g制剂。
15.本发明另一方面还涉及一种防治番茄灰霉病的制剂，所述制剂含有重量比为10：0.5
‑
2的绿色木霉菌与银杏多糖；重量比优选为10：0.8
‑
1.2。
16.在本发明的一个优选实施方式中，所述绿色木霉菌制剂为干粉制剂。
17.在本发明的一个优选实施方式中，所述干粉制剂真空包装并且常温保存。
具体实施方式
18.为了进一步理解本发明，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
19.如无特殊说明，本发明实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
20.实施例1
21.取绿色木霉菌ltr
‑
2干粉剂(含量20
×
108cfu/g)10重量份与1重量份银杏多糖粉末混合均匀，至于真空密封袋中常温保存。3个月后检测其中绿色木霉菌的数量，为17
×
108cfu/g，死亡率为5.5％。单独的绿色木霉菌ltr
‑
2干粉剂储存3个月后的死亡率为16％。由此说明银杏多糖对于绿色木霉菌的活性没有显著的影响，并且还具有一定的保护作用。
22.实施例2：
23.取绿色木霉菌ltr
‑
2干粉剂(含量20
×
108cfu/g)10重量份与2重量份银杏多糖粉末混合均匀，至于真空密封袋中常温保存。3个月后检测其中绿色木霉菌的数量，为15
×
108cfu/g，死亡率为10％，由此说明过量的银杏多糖对于绿色木霉菌的活性有一定的影响，但仍具有一定的保护作用。
24.实施例3：
25.取绿色木霉菌ltr
‑
2干粉剂(含量20
×
108cfu/g)10重量份与0.5重量份银杏多糖粉末混合均匀，至于真空密封袋中常温保存。3个月后检测其中绿色木霉菌的数量，为17
×
108cfu/g，死亡率为11％，由此说明银杏多糖的量对于绿色木霉菌的保护作用有实质性的影响。
26.实施例4：本发明生物制剂防治番茄灰霉病田间防效试验
27.选取如下用药方案进行试验：
28.番茄灰霉病：空白对照ck(清水)、阳性对照组(绿色木霉ltr
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2干粉剂2000倍液喷雾)、实验组(实施例1～3制剂2000倍液喷雾)。第一次用药在定植前，第二次在发病初期，之后每隔7天喷1次，共施用4次。
29.试验方法：试验小区设置：单个小区面积在30
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40平方米左右，设置15个小区，每个实验3个小区，在田块面积大的地方可以设隔离带。各小区仅施药不一样，其他管理及育苗等完全一样。分别统计发病指数，每个处理3次重复取平均值后，计算各药剂的使用效果。其试验数据分别见下表1。
30.表1绿色木霉菌制剂对番茄灰霉病田间防治效果
[0031][0032]
由上述表1的数据可知，实施例的绿色木霉制剂对番茄灰霉病的防治效果明显优于空白对照组和阳性对照组，其中以实施例1的制剂效果最佳。
[0033]
以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。