氨基酸食物在构建便秘动物模型、治疗便秘药物中的应用及其构建方法与流程

1.本发明涉及生物技术领域，具体涉及氨基酸食物在构建便秘动物模型、治疗便秘药物中的应用及其构建方法。


背景技术：

2.便秘是一种常见的胃肠动力障碍性疾病，慢传输型便秘(stc)是其中常见的一种。患者主要表现为排便困难和(或)排便次数减少、粪便干硬，伴有腹痛、腹胀、食纳减少。目前，中国成人的慢性便秘患病率为4％～10％，且呈逐年上升趋势，70岁以上人群的慢性便秘患病率高达23%。长期慢性便秘与肠癌的发病率密切相关，同时会增加缺血性卒中、高血压、代谢性疾病等疾病的发病，严重影响患者的生活质量。临床上对于慢传便秘常采用促动力剂或缓泻剂治疗，症状严重者甚至需要手术切除结肠，但治疗效果普遍不佳。
3.目前，慢性便秘的动物模型主要采用药物构建，包括复方地芬诺酯和洛哌丁胺灌胃造模，通过破坏肠道屏障构建便秘模型。但该种急性造模方法不能更好模拟人类中由饮食、生活习惯等多种因素导致的长期慢性便秘的情况，并且药物用量及用药时间没有统一标准，造模稳定性差，造模成功率难以保证，与临床患者的发病机制不相符合。因此，建立新的动物模型对认识慢性便秘的发病机制、病理生理过程及其药物研发具有重要作用，对临床上慢性便秘的治疗具有重要的指导意义。


技术实现要素：

4.针对现有研究及存在的问题，本发明的目的是提供氨基酸食物在构建便秘动物模型、治疗便秘药物中的应用及其构建方法。
5.本发明是通过以下技术方案实现的：本发明保护氨基酸食物在构建便秘动物模型中的应用，所述氨基酸食物的蛋白质来源是以水解后的形式存在。
6.优选地，所述氨基酸食物中还包括碳水化合物、脂质、膳食纤维、无机盐、矿物质和维生素。
7.进一步地，所述氨基酸食物中还包括其他营养物质。
8.优选地，所述氨基酸食物为水解奶粉。
9.本发明还保护上述便秘动物模型的构建方法，包括以下步骤：s1、配置蛋白质来源是以水解后的形式存在的氨基酸食物；s2、使用s1配置的氨基酸食物作为动物的唯一食物来源，连续饲喂至少1.5周。
10.优选地，所述构建方法还包括步骤s3：通过结肠排玻璃珠实验和/或胭脂红染料灌胃实验验证实验动物是否处于便秘状态。
11.进一步地，所述验证实验动物是否处于便秘状态是通过与饲喂正常食物动物相比是否存在显著性差异而判断。
12.本发明还保护上述便秘动物模型在探究动物肠道蠕动性和/或动物粪便含水量中的应用。
13.本发明还保护上述便秘动物模型在筛选和/或验证预防、改善和/或治疗便秘的药物中的应用。
14.本发明还保护上述便秘动物模型在筛选和/或验证预防、改善便秘的食品或膳食补充剂中的应用。
15.本发明的有益效果在于：本发明公开了一种氨基酸食物诱导的小鼠便秘模型，该氨基酸食物不包含大分子抗原，与正常食物中的营养成分一致，不影响小鼠的体重和生长发育。连续2周饲喂氨基酸食物即可获得便秘模型，造模时间短、模型稳定、成功率高、温和无刺激，并且能更好地模拟临床上慢行便秘患者的实际情况，对模拟人群中饮食因素导致的便秘具有一致性，为深入探究慢性便秘的发病机制，精准治疗慢性便秘，提供了新的研究途径。
附图说明
16.图1为实施例2中afd诱导的小鼠便秘模型（氨基酸食物组）和正常食物组中小鼠结肠排玻璃珠时间结果，图中组间标注的数字代表二者之间的p值；图2为实施例2中afd诱导的小鼠便秘模型（氨基酸食物组）和正常食物组中小鼠灌胃胭脂红染料的排便时间结果，图中组间标注的数字代表二者之间的p值；图3为实施例3中afd诱导的小鼠便秘模型（氨基酸食物组）和正常食物组中小鼠粪便含水量结果，图中组间标注的数字代表二者之间的p值；图4为实施例4中afd诱导的小鼠便秘模型（氨基酸食物组）和正常食物组中小鼠体重结果，图中组间标注的数字代表二者之间的p值。
具体实施方式
17.为更好理解本发明，下面结合实施例及附图对本发明作进一步描述，以下实施例仅是对本发明进行说明而非对其加以限定。
18.实施例1 设计合成一种氨基酸食物(antigen-free diet, afd)该afd食物模拟深度水解奶粉，不含有大分子抗原，食物中包含的蛋白质成分全部水解为氨基酸形式，不改变原有蛋白质的比例，同时不影响其他营养元素的形式和比例，具体配方如表1。
19.表1 氨基酸食物（afd）和正常食物（ncd）配方对比
*.由南通特洛菲饲料科技有限公司定制购买，其中十八种复合氨基酸包括：甘氨酸，脯氨酸，精氨酸，组氨酸，赖氨酸，酪氨酸，色氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，胱氨酸，苏氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，谷氨酸，丙氨酸，天冬氨酸，丝氨酸；**.由南通特洛菲饲料科技有限公司购买，饲料代码lad0020。
20.实施例2afd构建小鼠便秘模型将12只6周龄spf级c57/b6j雄性小鼠（集萃药康购入）随机分为2组，一组为正常食物组（ncd，6只）、一组为氨基酸食物组（afd，6只）。连续饲喂2周后，通过结肠排玻璃珠实验、胭脂红染料灌胃实验监测其便秘状态，具体实验方法如下：结肠排玻璃珠实验：将直径2mm的玻璃珠推入小鼠肛门，插入直径2mm的金属杆推动玻璃珠，使玻璃珠推入小鼠结肠2cm处，缓慢移出金属杆，将小鼠单独放置于洁净笼盒中，观察并记录玻璃珠排出时间，排出时间越长，反映小鼠的结肠蠕动能力越弱。
21.胭脂红染料灌胃实验：小鼠灌胃前12h禁食，每只小鼠灌胃200μl胭脂红染料（6%胭脂红+0.5%甲基纤维素溶于无菌水中），然后将小鼠单独放置于洁净笼盒中，观察并记录小鼠排出第一颗红色粪便的时间，排出时间越长，反映小鼠的肠道蠕动能力越弱。
22.实验结果如图1、图2所示，氨基酸食物组小鼠的结肠排玻璃珠时间及排出胭脂红粪便的时间均显著长于正常食物组，说明氨基酸食物组小鼠的肠道蠕动性减慢。
23.实施例3afd降低小鼠的粪便含水量对实施例2中的小鼠在第2周进行粪便含水量测算。将小鼠单只放入垫有吸水纸的笼盒中，收集粪便，称重即为湿重，冻干后，即为干重，按照公式：计算粪便含水量。粪便含水
量(％)＝(粪便湿重-粪便干重)/粪便湿重。结果如图3中所示，实验结果表明，氨基酸食物组小鼠的粪便含水量显著低于正常食物组。
24.实施例4afd不影响小鼠的生长发育和体重增长对实施例2构建的afd模型下的小鼠进行体重检测，结果如图4所示，氨基酸食物组小鼠体重与正常食物组小鼠的体重相当，说明氨基酸食物不影响小鼠的生长发育和体重增长。
25.以上所述实施方式仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。


技术特征：
1.氨基酸食物在构建便秘动物模型中的应用，其特征在于：所述氨基酸食物的蛋白质来源是以水解后的形式存在。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述氨基酸食物中还包括碳水化合物、脂质、膳食纤维、无机盐、矿物质和维生素。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述氨基酸食物中还包括其他营养物质。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述氨基酸食物为水解奶粉。5.一种权利要求1-4任一项所述的便秘动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、配置蛋白质来源是以水解后的形式存在的氨基酸食物；s2、使用s1配置的氨基酸食物作为动物的唯一食物来源，连续饲喂至少1.5周。6.根据权利要求5所述的便秘动物模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括步骤s3：通过结肠排玻璃珠实验和/或胭脂红染料灌胃实验验证实验动物是否处于便秘状态。7.根据权利要求6所述的便秘动物模型的构建方法，其特征在于：所述验证实验动物是否处于便秘状态是通过与饲喂正常食物动物相比是否存在显著性差异而判断。8.一种权利要求1-7任一项所述便秘动物模型在探究动物肠道蠕动性和/或动物粪便含水量中的应用。9.一种权利要求1-7任一项所述便秘动物模型在筛选和/或验证预防、改善和/或治疗便秘的药物中的应用。10.一种权利要求1-7任一项所述便秘动物模型在筛选和/或验证预防、改善便秘的食品或膳食补充剂中的应用。

技术总结
本发明涉及生物技术领域，具体涉及氨基酸食物在构建便秘动物模型、治疗便秘药物中的应用及其构建方法。所述便秘动物模型是通过给动物饲喂氨基酸食物获得，所述氨基酸食物的蛋白质来源是以水解后的形式存在，通过以氨基酸食物作为动物的唯一食物来源饲喂至少1.5周构建便秘动物模型。该氨基酸食物不影响动物的体重和生长发育，造模时间短，模型稳定，成功率高，同时对模拟人群中饮食因素导致的便秘具有一致性。致性。致性。


技术研发人员：朱书 胡冀 何恺鑫
受保护的技术使用者：合肥瀚微生物科技有限公司
技术研发日：2022.10.14
技术公布日：2023/1/2