一种可在特定细胞中恢复Fah基因表达的Fah基因敲除小鼠及其制备方法和用途

本发明涉及生命科学领域，特别是涉及一种可在特定细胞中恢复fah基因表达的fah基因敲除小鼠及其制备方法和用途。

背景技术：

1、延胡索酸乙酰乙酸水解酶(fah)是酪氨酸代谢途径最后一步所需的一种酶，fah基因缺陷会造成遗传性酪氨酸血症i型(ht1)疾病，肝、肾组织受到严重损害。fah基因敲除小鼠(fah-/-)出现严重的肝损伤，肝细胞增殖受到抑制，凋亡增多。并且持续的2-(2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基)-1,3-环己二酮(2-nitro-4-trifluoroi methylbenzoyl-1,3-cyclohexanedione,ntbc)药物施用可以有效的改善fah-/-小鼠的肝、肾损伤症状，停止ntbc药物的治疗会重新引起肝、肾损伤。fah-/-小鼠已经广泛地应用于肝脏疾病研究。肝脏损伤修复主要依赖肝细胞自我更新来维持。近年来，科学家发现在肝细胞增殖受到抑制的情况下，胆管上皮细胞可以分化为肝细胞参与肝脏的损伤修复。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种可在特定细胞中恢复fah基因表达的fah基因敲除小鼠及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。

2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种转基因工具鼠，所述转基因工具鼠为fah基因敲除工具鼠，所述fah基因敲除工具鼠经过cre-loxp同源重组后在特定细胞中恢复表达fah基因的能力。

3、本发明还提供一种模型动物，所述模型动物为转基因工具鼠与cre工具鼠交配后获得的子代。

4、本发明还提供所述模型动物的构建方法，所述构建方法为将所述的转基因工具鼠与cre工具鼠交配后获得所述动物模型。

5、本发明还提供所述的转基因工具鼠的构建方法，所述构建方法包括以下步骤：

6、1)将loxp-stop-loxp表达框转染至胚胎干细胞，经筛选后获得抗性克隆，再通过鉴定获得阳性克隆；

7、2)将阳性克隆扩增后注入至鼠囊胚获得嵌合鼠，嵌合鼠与野生型鼠交配后即获得fah基因敲除工具鼠。

8、本发明还提供所述的转基因工具鼠或所述模型动物在制备药物筛选模型用动物模型中的用途。

9、如上所述，本发明的可在特定细胞中恢复fah基因表达的fah基因敲除小鼠及其制备方法和用途，具有以下有益效果：本发明可在fah基因敲除小鼠的特定细胞例如胆管细胞中恢复fah基因表达能力，可诱导该类型细胞向肝细胞转分化的潜能，且能够用于筛选相关药物对这种转分化的作用。本发明极大的拓展了遗传靶向操纵的应用范围，为研究肝脏再生中细胞潜能转变及药物筛选提供了宝贵的工具。

技术特征：

1.一种转基因工具鼠，其特征在于，所述转基因工具鼠为fah基因敲除工具鼠，所述转基因工具鼠具备经过cre-loxp同源重组后在特定细胞中恢复表达fah基因的能力。

2.根据权利要求1所述的转基因工具鼠，其特征在于，所述fah基因敲除工具鼠的fah基因中插入有loxp-stop-loxp表达框。

3.根据权利要求1所述的转基因工具鼠，其特征在于，所述fah基因敲除工具鼠fah基因的第一个内含子中插入有loxp-stop-loxp表达框。

4.根据权利要求2所述的转基因工具鼠，其特征在于，所述loxp-stop-loxp表达框中还包括同源臂、筛选基因；优选的，所述loxp-stop-loxp表达框的核苷酸序列如seq id no：3所示。

5.根据权利要求1所述的转基因工具鼠，其特征在于，所述fah基因敲除工具鼠通过和cre工具鼠交配发生cre-loxp同源重组后在特定细胞中恢复表达fah基因的能力。

6.根据权利要求5所述的转基因工具鼠，其特征在于，所述cre工具鼠选自组织特异性cre工具鼠和/或诱导型cre工具鼠，优选的，所述cre工具鼠选自肝脏组织特异性且雌激素诱导型cre工具鼠。

7.一种模型动物，其特征在于，所述模型动物为权利要求1-6任一所述的转基因工具鼠与cre工具鼠交配后获得的子代。

8.权利要求1-6任一所述的转基因工具鼠的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

9.权利要求7所述的模型动物的构建方法，其特征在于，所述构建方法为将权利要求1-6任一所述的转基因工具鼠与cre工具鼠交配后获得所述动物模型。

10.权利要求1-6任一所述的转基因工具鼠或权利要求7所述的模型动物在制备药物筛选用模型动物中的用途。

11.根据权利要求10所述的用途，所述药物为肝脏治疗药物；优选的，所述肝脏治疗药物为肝损伤治疗药物；更优选的，所述肝脏治疗药物为肝脏再生药物。

技术总结
本发明涉及生命科学领域，特别是涉及一种可在特定细胞中恢复Fah基因表达的Fah基因敲除工具鼠及其制备方法和用途，所述Fah基因敲除工具鼠经过Cre‑loxp同源重组后可在特定细胞中恢复Fah基因表达，本发明可在Fah基因全身性敲除工具鼠的特定细胞例如胆管细胞中恢复Fah基因表达能力，可诱导该特定细胞向肝细胞转分化的潜能，且能够用于筛选相关药物对这种转分化的作用。

技术研发人员：周斌,蒲文娟
受保护的技术使用者：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心
技术研发日：
技术公布日：2024/4/24