一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液及其应用的制作方法

1.本发明涉及干细胞保存技术领域，特别涉及一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液及其应用。


背景技术：

2.近全能干细胞为亚全能干细胞，取自胎盘、脐带和脐带血中的近全能干细胞与胚胎干细胞接近，具备全能干细胞的生物学特征，可以定向分化成上皮干细胞、神经干细胞、心肌细胞、骨细胞等，实现机体多种组织病变或损伤的再生修复与功能重建，也为疾病的治疗扩展了新的治疗技术方案。
3.目前，近全能干细胞的保存方式一般是采用冷冻保护液进行低温保存，冷冻保护剂是指为了防止细胞在冷冻和解冻过程中形成冰晶造成损伤而使用的某类小分子或高分子化合物，而常用的冷冻保护液为 dmso，但dmso对细胞存在一定的毒性，常温下可以使胞内蛋白变性，在冷冻前和解冻后都有可能会使近全能干细胞收到损伤，影响细胞存活率。因此，亟需一种能在近全能干细胞的低温保存中保持高存活率的冷冻保护液。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液及其应用，通过该凝胶溶液可以解决脐带近全能干细胞在低温保存后存活率较低的问题。
5.本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
6.一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液，包括如下组分：褐藻酸钠20～40份、甘油100～150份、魔芋糖10～20份、导热金属粉10～20份、胎牛血清700～1000份和去离子水100～200份。
7.优选的，包括如下组分：褐藻酸钠30份、甘油120份、魔芋糖 15份、导热金属粉15份、胎牛血清850份和去离子水150份。
8.优选的，所述导热金属粉为银粉、铜粉和金粉中的一种。
9.优选的，所述导热金属粉的平均直径在50～200μm范围内。
10.本发明再一方面提供一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液对脐带近全能干细胞进行冷冻保存中的应用。
11.本发明再一方面提供一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液的制备方法，其特征在于：步骤如下：
12.步骤一、将魔芋糖溶解于部分去离子水中，得到透明粘稠的液体后与胎牛血清混合，搅拌均匀后在4℃的无菌环境下保存12-24h。
13.步骤二、将褐藻酸钠溶解于剩余去离子水中，得到的粘稠液体再加入到步骤一所得溶液中，搅拌均匀。
14.步骤三、将导热金属粉和甘油倒入步骤二所得溶液中，搅拌均匀。
15.综上所述，本发明具有以下有益效果：
16.本发明中的魔芋糖溶解成胶，可起到非渗透性冷冻保护剂，而且可延缓和减少近全能干细胞对葡萄糖的吸收，在冷冻前降低近全能干细胞的代谢速率，胎牛血清能稳定近全能干细胞的生理平衡，褐藻酸钠凝胶后，再加上魔芋糖增稠，可以保证导热金属粉在本溶液里面均匀分散，借助导热金属粉良好的导热性，能加快降温和升温的速率，实现降温时的玻璃化和升温时抑制冰晶的形成。
具体实施方式
17.以下对本发明作进一步详细说明。为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
18.实施例1：
19.一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液，包括如下组分：
20.褐藻酸钠20份、甘油100份、魔芋糖10份、银粉10份、银粉的直径为50μm，胎牛血清700份和去离子水100份。
21.制备方法步骤如下：
22.步骤一、将魔芋糖溶解于部分去离子水中，得到透明粘稠的液体后与胎牛血清混合，搅拌均匀后在4℃的无菌环境下保存12-24h。
23.步骤二、将褐藻酸钠溶解于剩余去离子水中，得到的粘稠液体再加入到步骤一所得溶液中，搅拌均匀。
24.步骤三、将导热金属粉和甘油倒入步骤二所得溶液中，搅拌均匀。
25.实施例2：
26.一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液，包括如下组分：
27.褐藻酸钠30份、甘油120份、魔芋糖15份、银粉15份、银粉的直径为120μm，胎牛血清850份和去离子水150份。
28.制备方法步骤同实施例1。
29.实施例3：
30.一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液，包括如下组分：
31.褐藻酸钠40份、甘油150份、魔芋糖20份、银粉20份、银粉的直径为200μm，胎牛血清1000份和去离子水200份。
32.制备方法步骤同实施例1。
33.实施例4：
34.一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液，包括如下组分：
35.褐藻酸钠40份、甘油150份、魔芋糖20份、铜粉20份、铜粉的直径为200μm，胎牛血清1000份和去离子水200份。
36.制备方法步骤同实施例1。
37.实施例5：
38.一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液，包括如下组分：
39.褐藻酸钠40份、甘油150份、魔芋糖20份、金粉20份、金粉的直径为200μm，胎牛血清1000份和去离子水200份。
40.制备方法步骤同实施例1。
41.将实施例1-5中制备好的溶液预冷至4℃，再将预冷后的溶液定量添加到脐带近全能干细胞中，搅匀后得到细胞液，再将细胞液置于液氮中保存，分别保存3个月、6个月、9个月和12个月后取出，对脐带近全能干细胞进行解冻计算存活率，存活率如下表所示：
[0042][0043]
由上表可知，本申请实施例中制备的溶液可保证脐带近全能干细胞在长时间的冻存后有着的高存活率，实验过程中，导热金属粉较小的直径会分散均匀，便于导热，但不易于后期的回收，而导热金属粉较大的直径会分散不均匀，不便于导热，但易于后期的回收。
[0044]
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。


技术特征：
1.一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液，其特征在于：包括如下组分：褐藻酸钠20～40份、甘油100～150份、魔芋糖10～20份、导热金属粉10～20份、胎牛血清700～1000份和去离子水100～200份。2.根据权利要求1所述的一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液，其特征在于：包括如下组分：褐藻酸钠30份、甘油120份、魔芋糖15份、导热金属粉15份、胎牛血清850份和去离子水150份。3.根据权利要求1或2中任一一项所述一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液，其特征在于：所述导热金属粉为银粉、铜粉和金粉中的一种。4.根据权利要求3所述的一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液，其特征在于：所述导热金属粉的平均直径在50～200μm范围内。5.根据权利要求1-4任一项所述的一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液对脐带近全能干细胞进行冷冻保存中的应用。6.一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液的制备方法，其特征在于：步骤如下：步骤一、将魔芋糖溶解于部分去离子水中，得到透明粘稠的液体后与胎牛血清混合，搅拌均匀后在4℃的无菌环境下保存12-24h。步骤二、将褐藻酸钠溶解于剩余去离子水中，得到的粘稠液体再加入到步骤一所得溶液中，搅拌均匀。步骤三、将导热金属粉和甘油倒入步骤二所得溶液中，搅拌均匀。

技术总结
本发明公开了一种用于保存脐带近全能干细胞的凝胶溶液及其应用，包括如下组分：褐藻酸钠20～40份、甘油100～150份、魔芋糖10～20份、导热金属粉10～20份、胎牛血清700～1000份和去离子水100～200份。本发明能让脐带近全能干细胞长久保存在低温环境中，而且在脐带近全能干细胞解冻后获得较大的存活率。能干细胞解冻后获得较大的存活率。


技术研发人员：何洁 王金祥
受保护的技术使用者：能科达（上海）干细胞研究中心有限公司
技术研发日：2022.11.03
技术公布日：2022/12/12