一种贺兰山女蒿的组培快繁方法与流程

本发明属于组织培养，特别涉及一种贺兰山女蒿的组培快繁方法。

背景技术：

1、贺兰女蒿( hippolytia alashanensis)是菊科女蒿属的植物，具有较强的耐旱、耐寒、耐瘠薄性，为我国特有植物，主要分布在甘肃、内蒙古、宁夏等地，生长于海拔1900米至2250米的地区，多生长于石缝、草原、山坡或荒漠草原。其茎、叶青鲜时羊和骆驼喜食，马乐食，牛稍食，结实后羊最喜食，骆驼、马也喜食。贺兰山女蒿有抓膘作用，属于中等饲用植物，冬季枝条保留良好，是冬季荒漠草原放牧场上的重要饲用植物，其在开花期的粗蛋白质含量较高，粗纤维含量较低，无氟浸出物亦较高。目前贺兰山女蒿还未由人工引种栽培，缺乏规模化的繁殖与栽培，有关其市场开发在国内还属于空白阶段。因此，有必要开展其繁殖技术研究，有效保护我国贺兰山女蒿野生种质资源，同时促进其野生居群的扩大和可持续开发利用。

技术实现思路

1、本发明主要目的是提供一种贺兰山女蒿的组培快繁育苗方法。

2、本发明是通过以下技术方案实现的：

3、1、外植体选择

4、选择生长健壮，无病虫害的贺兰山女蒿枝条进行水培，取枝条上新生长出的腋芽和茎段为外植体，去除部分叶片。

5、2、外植体消毒

6、将贺兰山女蒿腋芽和茎段放入盛有洗洁精溶液的玻璃瓶中，瓶口用纱布包住，在流水下冲洗30~40 min。然后将洗干净后的外植体移至超净工作台中，用75%的酒精浸泡30s，无菌水冲洗3~4次，接着再用4%的次氯酸钠溶液震荡消毒10分钟，无菌水冲洗3~4次。

7、3、初代培养

8、用无菌纸吸干外植体表面水分，之后置于无菌盘中，使用高温灭菌后的镊子和剪刀将接触药液的切口切除，接种于初代培养基中，ph调整为5.8~6.0，培养温度为25±2℃，光照时间12 h/d，光强为1500~2000 lx，培养周期为30 d。

9、4、继代增殖培养

10、将初代培养中获得的贺兰山女蒿无菌苗茎段剪切成1.5-2 cm左右，转接到继代增殖培养基中进行增殖培养，ph调整为5.8~6.0，培养温度为25±2℃，光照时间12 h/d，光强为1500~2000 lx，培养周期为30 d。

11、5、生根培养

12、选择大小一致，生长健壮的贺兰山女蒿丛生芽植株，接种到生根培养基中生根培养，ph调整为5.80~6.00，培养温度为25±2℃，光照时间12 h/d，光强为1500~2000 lx，培养周期为30 d。

13、6、炼苗移栽

14、在组培室内将已生根的组培瓶盖打开，在组培室内炼苗3天，接着转移到温室内炼苗2天，之后用自来水冲洗干净根系上的培养基，移栽至草炭：珍珠岩：蛭石=1:1:1的育苗基质中进行栽培。

15、一种贺兰山女蒿的组培快繁方法，其特征在于，选择生长健壮，无病虫害的贺兰山女蒿枝条进行水培，取枝条上新生长出的腋芽和茎段为外植体，对其进行灭菌消毒、初代培养、继代培养、生根培养以及炼苗移栽，最终获得再生植株。其中所述初代培养基、继代增殖培养基以及生根培养基的ph为5.80~6.00，培养温度为25±2℃，光照时间12 h/d，光强为1500~2000 lx，培养时间为30 d。

16、外植体的消毒灭菌，具体方法为：将贺兰山女蒿新生茎段和腋芽放入盛有洗洁精溶液的玻璃瓶中，瓶口用纱布包住，置于流水下冲洗30~40 min。然后将洗干净后的外植体移至超净工作台中，用75%的酒精浸泡30 s，无菌水冲洗3~4次，再用4%的次氯酸钠溶液震荡消毒10分钟，无菌水冲洗3~4次。

17、所述初代丛生芽诱导无菌苗培养基为：ms+1.0 mg/l 6-ba+0.01 mg/l naa+30 g/l蔗糖+7 g/l琼脂。

18、所述继代增殖培养基为：ms+0.3 mg/l 6-ba+0.1 mg/l naa+30 g/l蔗糖+7 g/l琼脂。

19、所述生根培养基为：1/2 ms+0.3 mg/l naa+30 g/l蔗糖+7 g/l琼脂。

20、移栽所用基质是用高锰酸钾灭菌消毒过的，各类基质比为草炭：珍珠岩：蛭石=1:1:1。

21、本发明的有益效果在于：本发明提供了一种贺兰山女蒿的组培快繁方法，通过采集新生嫩芽和茎段为外植体诱导无菌苗，不经过愈伤组织途径，直接诱导外植体的芽分化，通过初代培养，继代培养、生根培养以及轻基质育苗，在短期内快速获得大量的再生植株。使用该方法得到的再生植株，结果稳定，组培苗成活率高，遗传性状稳定，能够保持母本的优良遗传性状，不易发生变异。本发明对于保护我国野生贺兰山女蒿种质资源，促进其野生居群的扩大和可持续开发利用等方面具有重要的作用。本发明方法简单，易操作，能有效降低贺兰山女蒿初代培养的污染率，缩短生长周期，为今后贺兰山女蒿的开发利用和野生种质资源保护提供技术支撑和保障。

技术特征：

1.一种贺兰山女蒿的组培快繁方法，其特征在于，选择生长健壮，无病虫害的贺兰山女蒿枝条进行水培，取枝条上新生长出的腋芽和茎段为外植体，对其依序进行外植体的灭菌消毒、初代培养、继代培养、生根培养以及移栽炼苗，最终获得再生植株；其中，所述初代培养基、继代增殖培养基以及生根培养基的ph为5.80~6.00，培养温度为25±2℃，光照时间12h/d，光强为1500~2000 lx，培养时间为30 d。

2.根据权利要求1所述的一种贺兰山女蒿的组培快繁方法，其特征在于，外植体的消毒灭菌方法为：将贺兰山女蒿新生茎段和腋芽放入盛有洗洁精溶液的玻璃瓶中，瓶口用纱布包住，置于流水下冲洗30~40 min；然后，将洗干净后的外植体移至超净工作台中，用75%的酒精浸泡30s，无菌水冲洗3~4次，再用4%的次氯酸钠溶液震荡消毒10分钟，无菌水冲洗3~4次。

3.根据权利要求1所述的一种贺兰山女蒿的组培快繁方法，其特征在于，所述初代培养采用的丛生芽诱导无菌苗培养基为：ms+1.0 mg/l 6-ba+0.01 mg/l naa+30 g/l蔗糖+7 g/l琼脂。

4.根据权利要求1所述的一种贺兰山女蒿的组培快繁方法，其特征在于，所述继代培养采用的增殖培养基为：ms+0.3 mg/l 6-ba+0.1 mg/l naa+30 g/l蔗糖+7 g/l琼脂。

5.根据权利要求1所述的一种贺兰山女蒿的组培快繁方法，其特征在于，所述生根培养采用的生根培养基为：1/2 ms+0.3 mg/l naa+30 g/l蔗糖+7 g/l琼脂。

6.根据权利要求1所述的一种贺兰山女蒿的组培快繁方法，其特征在于，移栽炼苗所用基质是用高锰酸钾灭菌消毒过的，各类基质比为草炭：珍珠岩：蛭石=1:1:1。

7.根据权利要求1至6任一项所述的一种贺兰山女蒿的组培快繁方法，其特征在于，按下述步骤培养：

技术总结
本发明提供了一种贺兰山女蒿的组培快繁方法，首先选择生长健壮，无病虫害的贺兰山女蒿枝条水培，取枝条上新生长出的腋芽和茎段为外植体，将其表面灭菌消毒后接种于初代培养基中诱导丛生芽后，转接到继代增殖培养基中诱导丛生芽大量繁殖，接着将丛生芽接种于生根培养基中进行生根培养，最后对获得的生根苗进行炼苗，移栽培育。本发明方法简单，易操作，能有效降低贺兰山女蒿初代培养的污染率，缩短生长周期，为今后贺兰山女蒿的开发利用和野生种质资源保护提供技术支撑和保障。

技术研发人员：崔大祥,周园园
受保护的技术使用者：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12